發(fā)布時間：2020-09-10 11:58

　　 背景及目的:目前,由于臨床上抗感染疾病的治療對于抗生素類藥物的過度依賴甚至濫用,導(dǎo)致了細菌耐藥菌株的不斷出現(xiàn),甚至出現(xiàn)了對多種抗生素耐藥的“超級細菌”。使得臨床上感染性疾病的治療非常棘手,細菌耐藥性問題亟待解決。探究出新思路和新途徑來尋找新的抗菌藥物,從而以其控制和降低細菌的耐藥性顯得十分的迫切。在抗生素尚未問世之前,我國預(yù)防和治療細菌感染性疾病,多予以具有清熱解毒功效的中草藥進行治療。因此,在清熱解毒類中草藥中篩選有效的天然抑菌藥物,為對抗和控制細菌耐藥性問題開辟一種新的可行性途徑,引起了國內(nèi)外學(xué)者的日益關(guān)注�；⒄人幱脷v史悠久,為具有清熱解毒功效的傳統(tǒng)中藥�，F(xiàn)代藥理學(xué)研究進展表明其具有抗菌、抗炎、抗病毒。在前期篩選具有抑菌作用中草藥時發(fā)現(xiàn)虎杖的水煎液在體外具有較強抑菌活性。其中,虎杖中的大黃素、虎杖苷為是其發(fā)揮抑菌藥效的主要活性成分。本研究主要目的是利用正交設(shè)計并聯(lián)用改良式明膠法優(yōu)化虎杖中的抑菌活性成分大黃素、虎杖苷的提取與除鞣工藝;優(yōu)化RP-HPLC法測定虎杖苷、大黃素含量的色譜條件;在優(yōu)化的最佳工藝條件下再進一步對虎杖提取液進行體外抑菌藥效學(xué)的研究。方法:1.采用水提醇沉法對虎杖中抑菌活性成分大黃素、虎杖苷進行提取。正交設(shè)計法優(yōu)化虎杖提取工藝,選擇L_9(3~4)正交表安排試驗,對影響虎杖有效成分提取的取次數(shù)、時間、料液比及藥用醇濃度四因素進行綜合考察。2.采用改良式明膠法去除虎杖藥液中的鞣質(zhì)成分,設(shè)無明膠組與1%、2%、3%明膠除鞣組,分析除鞣前后大黃素、虎杖苷含量與藥液澄明度變化。3.RP-HPLC法對虎杖提取的指標成分大黃素、虎杖苷進行含量測定分析。4.將優(yōu)化的最佳工藝條件下提取的虎杖藥液對試驗菌大腸桿菌(G~-)、銅綠假單胞菌(G~-)、金黃色葡萄球菌(G~+)及真菌白色念珠菌進行體外抑菌活性研究。以市售潔爾陰洗液(國藥準字Z10930008)作為抑菌實驗的陽性對照藥。二倍稀釋法測定虎杖藥液對四種致病菌最小抑菌濃度(MIC);繪制虎杖藥液對四種菌生長抑制量效曲線;采用UV法與電導(dǎo)率法測定經(jīng)虎杖藥液作用后金葡菌的培養(yǎng)液在波長260nm與280nm吸光度與電導(dǎo)率的變化;藥敏紙片法(K-B法)測定虎杖藥液對四種菌的抑菌圈(IDZ)大小;菌藥共孵育-平皿法測定虎杖抑菌作用起效所需共孵育的時間。結(jié)果:1.正交設(shè)計聯(lián)用改良式明膠法優(yōu)化虎杖中大黃素、虎杖苷的提取的最佳工藝組合為:A_2B_3C_3D_3,即料液比為1:10(g/ml)、提取3次、提取時間為90min、80%藥用醇進行醇沉;虎杖的最佳除鞣工藝條件為:2%明膠濃度的改良式明膠法。2.稀釋法測定虎杖抑菌的MIC結(jié)果:對大腸桿菌、銅綠假單胞菌、白色念珠菌、金黃色葡萄球菌的MIC值分別為12.5、25、25、6.25mg/ml;3.在2、1、1/2、1/4、1/8MIC五種不同虎杖藥液濃度下,四種菌的生長受到不同程度的抑制作用,其中2MIC的虎杖藥液濃度明顯抑制了四種菌的生長,使其不能進入對數(shù)生長期,生長曲線平緩,呈非典型生長;在1、1/2、1/4、1/8MIC虎杖藥液濃度的作用下四種菌的生長受到一定程度的抑制作用,雖仍可以進入對數(shù)生長期,但由于抑菌作用延緩和降低了其進入對數(shù)生長期的進程;加入虎杖藥液的金葡菌培養(yǎng)液,隨抑菌作用時間延長測得培養(yǎng)液電導(dǎo)率值、OD_(260)與OD_(280)值不斷增大,均高于未加藥的對照組;4.K-B法測定虎杖藥液對E.coli、P.aer、S.aur、C.alb的IDZ值分別為18±0.2、14±0.2、17±0.2、19±0.2mm;潔爾陰洗液的IDZ值分別為18±0.2、11±0.2、17±0.2、18±0.2mm;5.菌藥共孵育結(jié)果:虎杖藥液對E.coli、P.aer、S.aur、C.alb分別在共孵育12、12、8、8h為明顯抑菌起效時間;潔爾陰洗液明顯抑菌起效的菌藥共孵育時間分別為12、12、8、12h。結(jié)論:1.正交設(shè)計聯(lián)用改良式明膠法優(yōu)選出的最佳提取與除鞣工藝條件穩(wěn)定可靠、操作簡單、虎杖藥液澄明度、穩(wěn)定性好,虎杖中抑菌活性成分大黃素、虎杖苷提取率高。2.虎杖體外抑菌活性研究的四項抑菌活性指標顯示虎杖水煎液在對四種常見致病菌均具有明顯的抑菌作用;其體外抑菌活性與市售的國藥準字號潔爾陰洗液相比活性相當(dāng)或更優(yōu)。3.虎杖抑菌作用機制初步研究結(jié)果表明,虎杖對金葡菌的抑菌作用可能是通過破壞其細胞膜結(jié)構(gòu)或功能,導(dǎo)致細胞膜的通透性發(fā)生改變,使得菌體細胞中的無機鹽離子、核酸與蛋白質(zhì)等大分子發(fā)生外滲,導(dǎo)致菌體的正常形態(tài)和代謝過程受到破壞和影響,從而起到抑菌或殺菌作用。4.研究采用的藥敏試驗方法菌藥共孵育-平皿法可在近似模擬在人體內(nèi)較適宜pH值液體環(huán)境下,藥液與細菌共孵育過程中直接接觸發(fā)生抑菌相互作用,可得出藥液對不同試驗菌出現(xiàn)明顯抑菌作用共孵育所需的時間。具有結(jié)果直觀、準確、快速、可靠的優(yōu)點,實驗結(jié)果表明其可作為研究液體類抗菌藥物體外抑菌作用的一種適用的方法�；⒄润w外抑菌活性結(jié)果顯示其是一味極具有研究和開發(fā)價值的抗菌作用中藥。
【學(xué)位單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R284;R285

【參考文獻】

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本文編號：2815791