目的:對不同基原黨參的性狀以及顯微結(jié)構(gòu)進行鑒定并比較基原間的差異性;對不同基原黨參90%甲醇提取物的主要化學成分進行分析鑒定并比較基原間的差異性;對不同基原黨參游離糖提取物的成分進行分析鑒定并比較基原間的差異性;測定不同基原黨參游離糖提取液甜度并采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(GC-MS)技術(shù)作為佐證,構(gòu)建新的甜度檢測方法,并對不同基原黨參差異性進行比較。方法:采用隨機抽樣法選取不同基原黨參樣品,觀察形態(tài)、顏色、質(zhì)地、斷面等性狀,用皮尺和游標卡尺測量長度和直徑,顯微檢測樣品處理方式為蘆頭下1 cm處橫切,取0.5 cm厚的材料,鮮品直接用FAA固定液固定,干品用10%甘油液軟化后,FAA固定液固定。常規(guī)石蠟制片法連續(xù)切片,每隔5片取一片,每批共取7片,厚度為10~15μm,番紅-固綠染色,中性樹膠封片,拍照固定后,測定木質(zhì)部、韌皮部和根半徑長(測量數(shù)n=10個),導管口徑、導管壁厚度(n=50個),通過Spss 18.0軟件分析不同基原黨參組織結(jié)構(gòu)差異性;超聲法制備不同基原黨參90%甲醇提取物,采用Agilent Poroshell 120 EC C18色譜柱,檢測波長為254 nm,以甲醇-0.1%甲酸水為流動相進行梯度洗脫,柱溫為25℃,流速為0.7 m L/min,進樣量為10μL的色譜條件,Agilent電噴霧-四級桿-飛行時間串聯(lián)質(zhì)譜儀(1290 Series型高效液相色譜系統(tǒng)),電噴霧離子源(ESI),采用正、負兩種離子化模式檢測,干燥氣的體積流量6.8 L/min,干燥氣溫度325℃,霧化氣壓0.8 Bar,正離子模式下,毛細管電壓4.5 k V,負離子模式下,毛細管電壓4.0 k V,碎裂電壓130 V,掃描范圍m/z 50~1500進行檢測,對各色譜峰進行歸屬;采用震蕩提取從不同基原黨參中提取多種低聚糖化合物,低聚游離糖成分經(jīng)乙�；蟛捎肰F-23ms(30 m×0.25 mm×0.25μm)毛細管柱,以高純氦為載氣,采取1.0 ml/min柱流量;使用45:1的分流比,進樣口溫度為220℃,柱壓為73.0 kpa,程序升溫,采用電子轟擊(EI)離子源,離子源溫度220℃,接口溫度250℃,質(zhì)量掃描范圍m/z 45~550為質(zhì)譜條件對其游離糖成分進行分析;采用水提醇沉方法除去黨參中多糖后提取黨參單糖溶液,通過WYT-J手持糖量計檢測30批次三個基原不同產(chǎn)地黨參樣品的甜度差異性,并以VF-23ms(30m×0.25 mm×0.25μm)毛細管柱,以高純氦為載氣,采取1.0 ml/min柱流量;使用45:1的分流比,進樣口溫度為220℃,柱壓為73.0 kpa,程序升溫,采用電子轟擊(EI)離子源,離子源溫度220℃,接口溫度250℃,質(zhì)量掃描范圍m/z45~550為質(zhì)譜條件對其游離糖成分進行分析。結(jié)果:通過觀測性狀及顯微結(jié)構(gòu),發(fā)現(xiàn)不同基原和年限的黨參橫切面差異主要體現(xiàn)在木栓細胞列數(shù)、石細胞數(shù)量、韌皮部外層裂隙程度、韌皮部、木質(zhì)部占根橫切面比例存在差異性;通過二級高分辨質(zhì)譜分析結(jié)合相關(guān)文獻,在三個基原黨參中共鑒定出38種化學成分的結(jié)構(gòu),所有三個基原黨參藥材中均含有包括苯丙苷類、生物堿類、氨基酸類等在內(nèi)的26種共有化學成分,黨參相較于素花黨參,在共同的28種成分的基礎(chǔ)上,多含有5種特異性化學成分;黨參相較于川黨參,有32種共有成分,黨參具有包括2-Nonenoic acid,Coronaric acid在內(nèi)的2種特異性化學成分,川黨參具有包括5-Ally-2-hydroxy-3-methoxy benzaldehyde,Geniposide等在內(nèi)的5種特異性化學成分;利用優(yōu)化后的方法對24批次三個基原不同產(chǎn)地的黨參樣品進行分析,鑒別出三個基原黨參含包括山梨糖、半乳糖、葡萄糖、D-甘露糖、果糖、肌醇、蔗糖等在內(nèi)的七種游離糖成分,各基原黨參的游離糖含量存在差異性;利用優(yōu)化后的方法對樣品進行分析,確認各基原黨參甜度存在差異性,并與它們的游離糖含量存在相關(guān)性。結(jié)論:研究發(fā)現(xiàn)各基原黨參組織結(jié)構(gòu)存在差異性,為不同基原黨參的鑒別提供了參考依據(jù);UPLC-Q-TOF-MS/MS可以在保留時間、紫外吸收光譜、精確相對分子質(zhì)量、分子式和二級結(jié)構(gòu)碎片等方面對各基原黨參化學成分進行定性分析,為尋找黨參中的活性物質(zhì)以及比較不同基原黨參化學成分的差異性提供一種快速準確的分析方法;GC-MS技術(shù)可以通過保留時間、分子式、結(jié)構(gòu)碎片等方面對黨參的游離糖成分進行定性、定量分析,為尋找黨參中的游離糖成分以及比較不同基原黨參游離糖成分的差異性提供一種快速準確的分析方法;優(yōu)化了黨參游離糖的提取條件,將客觀指標與甜度聯(lián)系,為黨參的甜味檢測提供一種客觀可靠的評價方法并采取GC-MS技術(shù)對黨參的低聚游離糖溶液進行檢測分析,對黨參低聚游離糖進行定性、定量分析,通過GC-MS檢測游離糖成分、含量佐證糖量計所測甜度的客觀性。
【學位單位】：湖南中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R284
【部分圖文】：

圖 1. 1 不同產(chǎn)地黨參性狀圖甘肅渭源兩年生黨參(A)，甘肅省隴南地區(qū)哈達鋪黨參(B)，甘肅省福星鎮(zhèn)黨參(C)，甘肅省渭源黨參鮮品(D)紋黨：呈長圓柱形，2~3 分支，彎曲。表面黃棕色至灰棕色，“獅子盤頭”明根頭下環(huán)橫紋多且密，達一半及以上。外表皮有縱紋和疏生橫長皮孔樣突起硬，斷面有放射狀紋理，外側(cè)裂隙較多，皮部黃白色或黃棕色，木部黃色根的 1/2~2/3，氣香，味甘甜，不化渣。見圖 1.2(A)及圖 1.2(B)。

圖 1. 2 不同產(chǎn)地素花黨參性狀圖甘肅省文縣紋黨(A)，甘肅省文縣多年生紋黨(B)川黨參：單支條狀，稍彎曲。表面黃棕色至灰棕色，有較深略直的縱溝，根頭下環(huán)橫紋少或無，橢圓狀皮孔縱向排列成直線，具縱溝，“獅子盤頭”不明顯。質(zhì)硬，斷面有放射狀紋理，外側(cè)裂隙較少，皮部黃白色，木部淡黃色，約占根的1/3；氣微香，味微甜，化渣。見圖 1.3(A)及圖 1.3(B)。

斷面有放射狀紋理，外側(cè)裂隙較多，皮部黃白色或黃棕色，木部黃色，約占根的 1/2~2/3，氣香，味甘甜，不化渣。見圖 1.2(A)及圖 1.2(B)。圖 1. 2 不同產(chǎn)地素花黨參性狀圖甘肅省文縣紋黨(A)，甘肅省文縣多年生紋黨(B)川黨參：單支條狀，稍彎曲。表面黃棕色至灰棕色，有較深略直的縱溝，根頭下環(huán)橫紋少或無，橢圓狀皮孔縱向排列成直線，具縱溝，“獅子盤頭”不明顯。質(zhì)硬，斷面有放射狀紋理，外側(cè)裂隙較少，皮部黃白色，木部淡黃色，約占根的1/3；氣微香，味微甜，化渣。見圖 1.3(A)及圖 1.3(B)。A B

【參考文獻】

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本文編號：2815443