目的:研究青蒿琥酯抑制腫瘤細(xì)胞增殖的作用與對(duì)溶酶體功能的影響,探討溶酶體抑制在增強(qiáng)耐藥細(xì)胞藥敏性中的意義。方法:通過(guò)CCK8法檢測(cè)細(xì)胞活力,觀察青蒿琥酯對(duì)不同腫瘤細(xì)胞的增殖抑制作用;通過(guò)Western blot法檢測(cè)溶酶體組織蛋白酶cathepsin D和cathepsin L以及凋亡相關(guān)蛋白PARP和caspase3的變化;透射電子顯微鏡觀察青蒿琥酯對(duì)線(xiàn)粒體的影響,同時(shí)觀察自噬/溶酶體相關(guān)變化;JC-1檢測(cè)線(xiàn)粒體膜電位以及檢測(cè)細(xì)胞色素c在線(xiàn)粒體及胞漿的水平來(lái)評(píng)價(jià)青蒿琥酯對(duì)線(xiàn)粒體功能的影響;采用GFP-RFP-LC3Ⅱ穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株,評(píng)價(jià)青蒿琥酯對(duì)自噬流的影響。LysoTracker和LysoSensor標(biāo)記溶酶體并檢驗(yàn)溶酶體的改變;通過(guò)敲減或過(guò)表達(dá)溶酶體生物合成相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子TFEB,觀察溶酶體功能對(duì)腫瘤細(xì)胞耐藥性的影響;用三種耐藥細(xì)胞株評(píng)價(jià)青蒿琥酯對(duì)腫瘤細(xì)胞耐藥性的影響。結(jié)果:細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,青蒿琥酯可以明顯抑制多種腫瘤細(xì)胞增殖,并且具有濃度依賴(lài)性;JC-1結(jié)果、線(xiàn)粒體內(nèi)外細(xì)胞色素c水平檢測(cè)結(jié)果以及透射電鏡結(jié)果分別顯示,青蒿琥酯處理后線(xiàn)粒體膜電位顯著降低、細(xì)胞色素c從線(xiàn)粒體釋放至胞漿增多,空泡化線(xiàn)粒體明顯增多;此外,青蒿琥酯處理后PARP以及caspase3蛋白水平升高,提示青蒿琥酯損傷了線(xiàn)粒體并且引起細(xì)胞凋亡。在檢測(cè)自噬/溶酶體功能中發(fā)現(xiàn),電鏡結(jié)果顯示青蒿琥酯處理后自噬體數(shù)量增多,而自噬溶酶體數(shù)量減少;GFP-RFP-LC3Ⅱ穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株也顯示出同樣的結(jié)果。結(jié)果提示青蒿琥酯可能抑制了溶酶體功能。進(jìn)一步檢測(cè)溶酶體功能發(fā)現(xiàn),青蒿琥酯使溶酶體組織蛋白酶cathepsin D、cathepsin L的激活型降低,酶活降低,LysoTracker和LysoSensor實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示青蒿琥酯升高了溶酶體pH,抑制了溶酶體活性。TFEB過(guò)表達(dá)與敲減實(shí)驗(yàn)證明,高溶酶體活性細(xì)胞具有較強(qiáng)的耐藥性,而青蒿琥酯通過(guò)抑制溶酶體功能,可逆轉(zhuǎn)耐藥細(xì)胞的增殖。在青蒿琥酯對(duì)耐藥細(xì)胞的影響實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),三種耐藥細(xì)胞中具有最高cathepsins活性的細(xì)胞是耐紫杉醇的A549細(xì)胞,而青蒿琥酯對(duì)這種細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用最強(qiáng)。結(jié)論:青蒿琥酯可以抑制溶酶體功能,減少失能線(xiàn)粒體的清除,從而引發(fā)細(xì)胞凋亡。青蒿琥酯通過(guò)抑制溶酶體功能明顯增強(qiáng)了耐藥細(xì)胞對(duì)藥物的敏感性,且對(duì)組織蛋白酶表達(dá)高的耐藥細(xì)胞抑制效果更明顯。
【學(xué)位單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類(lèi)】：R285

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 侯海霞,周莉玲,李銳;青蒿琥酯研究進(jìn)展[J];廣東藥學(xué);2000年02期

2 劉春朝,王玉春,歐陽(yáng)藩,葉和春,李國(guó)風(fēng);青蒿素研究進(jìn)展[J];化學(xué)進(jìn)展;1999年01期

本文編號(hào)：2812962