目的:本研究通過(guò)采用細(xì)胞培養(yǎng)、形態(tài)學(xué)檢查及染色、生化檢測(cè)和Western Blot等技術(shù)手段,觀察腎腦復(fù)元湯(ShenNaoFuYuan decoction,SNFYD)含藥血清對(duì)缺糖缺氧(Oxygen-Glucose Deprivation,OGD)PC12細(xì)胞的保護(hù)作用,及其對(duì)NLRP3/Caspase-1、IL-1β/IL18焦亡通路相關(guān)細(xì)胞因子表達(dá)的影響,并以此探討腎腦復(fù)元湯通過(guò)抑制焦亡、減輕損傷以保護(hù)PC12細(xì)胞的可能機(jī)制,為其應(yīng)用于缺血性中風(fēng)治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:1、腎腦復(fù)元湯含藥血清制備:取SD大鼠灌服腎腦復(fù)元湯,連續(xù)3天,采集腹主動(dòng)脈血液,離心分離血清,滅活后凍存?zhèn)溆谩?、PC12的培養(yǎng)與模型建立:PC12細(xì)胞株為購(gòu)入成品,使用含10%FBS及1%雙抗的DMEM-HG完全培養(yǎng)液進(jìn)行培養(yǎng),根據(jù)檢測(cè)的指標(biāo)與實(shí)驗(yàn)?zāi)康?予接種至相應(yīng)孔板。種板后待細(xì)胞貼壁,對(duì)數(shù)生長(zhǎng)時(shí),予更換無(wú)糖培養(yǎng)液,并置于三氣培養(yǎng)箱中,溫度37℃,通以95%N2-5%CO2進(jìn)行培養(yǎng)。OGD時(shí)間為4小時(shí),再換回原培養(yǎng)條件,恢復(fù)糖、氧供應(yīng),并根據(jù)分組進(jìn)行藥物處理。3、腎腦復(fù)元湯含藥血清培養(yǎng)液對(duì)PC12干預(yù):OGD后的細(xì)胞設(shè)三組,SNFYD組為實(shí)驗(yàn)組,使用含10%腎腦復(fù)元湯含藥血清的完全培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng);陰性對(duì)照組為空白血清組,使用10%空白大鼠血清加入完全培養(yǎng)基進(jìn)行干預(yù);陽(yáng)性對(duì)照組選擇NLRP3抑制劑INF39為干預(yù)藥物,以1μM濃度加入完全培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。4、檢測(cè)相關(guān)數(shù)據(jù):各組細(xì)胞于倒置顯微鏡下觀察形態(tài),AO/EB染色后熒光顯微鏡下檢測(cè)凋亡程度,CCK8法檢測(cè)活性、Western blot法檢測(cè)焦亡通路NLRP3/Caspase-1—IL-1β/IL18細(xì)胞因子的表達(dá)情況。結(jié)果:OGD造模后,PC12損傷明顯,焦亡通路的各細(xì)胞因子明顯升高,使用腎腦復(fù)元湯含藥血清及INF39干預(yù)受損的PC12細(xì)胞后,PC12細(xì)胞形態(tài)、活性均見好轉(zhuǎn),相應(yīng)地NLRP3/Caspase-1焦亡通路激活減弱,表明該通路的抑制與細(xì)胞狀態(tài)的好轉(zhuǎn)有相關(guān)性,而腎腦復(fù)元湯與INF39均能抑制該通路的激活。提示腎腦復(fù)元湯可能通過(guò)抑制NLRP3/Caspase-1及下游焦亡通路,減少神經(jīng)細(xì)胞炎性凋亡,從而保護(hù)神經(jīng)組織,達(dá)到治療腦梗塞的目的。結(jié)論:腎腦復(fù)元湯含藥血清對(duì)缺氧缺糖PC12細(xì)胞模型有保護(hù)作用,這一作用可能與抑制焦亡有關(guān),NLRP3/Caspase-1及下游的IL-18、IL-1β細(xì)胞因子可能是抑制焦亡的關(guān)鍵靶點(diǎn)。
【學(xué)位單位】：湖南中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R285.5

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 羅莉麗;;萎胃復(fù)元湯對(duì)慢性萎縮性胃炎的治療效果分析[J];大家健康(學(xué)術(shù)版);2016年07期

2 劉顯杰;;萎胃復(fù)元湯治療慢性萎縮性胃炎臨床研究[J];中醫(yī)臨床研究;2014年33期

3 范育炬;;萎胃復(fù)元湯治療慢性萎縮性胃炎患者臨床分析[J];中醫(yī)臨床研究;2015年22期

4 陳楓剛;;慢性萎縮性胃炎通過(guò)萎胃復(fù)元湯治療的效果分析[J];現(xiàn)代養(yǎng)生;2016年20期

5 賈志山;;偏癱復(fù)元湯治療腦梗死50例[J];河南中醫(yī);2011年08期

6 石向榮;;萎胃復(fù)元湯治療慢性萎縮性胃炎臨床療效分析[J];中國(guó)衛(wèi)生產(chǎn)業(yè);2011年22期

7 吳彬;辛淼;田振宇;;消栓復(fù)元湯治療腦血栓臨床研究[J];河南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2008年03期

8 趙建春;徐萍;宋亞光;;巢衰復(fù)元湯治療卵巢早衰38例臨床觀察[J];北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)(中醫(yī)臨床版);2006年06期

9 牛紅,李巖;“丙肝復(fù)元湯”治療輸血后丙肝[J];江蘇中醫(yī);1999年03期

10 楊旭敏;腰腿復(fù)元湯治療腰椎間盤突出癥108例[J];實(shí)用中醫(yī)藥雜志;1996年01期

相關(guān)會(huì)議論文 前2條

1 林穗芳;王新亮;;余氏萎胃復(fù)元湯治療慢性萎縮性胃炎綜合療效評(píng)價(jià)[A];第二十一屆全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合消化系統(tǒng)疾病學(xué)術(shù)會(huì)議暨國(guó)家級(jí)中西醫(yī)結(jié)合消化系統(tǒng)疾病新進(jìn)展學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2009年

2 譚新歡;聶偉志;隋顯玉;;手法復(fù)位經(jīng)皮穿針內(nèi)固定結(jié)合骨傷復(fù)元湯治療跟骨骨折的療效觀察[A];第七屆全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合骨科微創(chuàng)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2017年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前1條

1 ;乙肝復(fù)元湯治療慢性乙型肝炎療效好[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2004年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 延衛(wèi)東;萎胃復(fù)元湯治療慢性萎縮性胃炎臨床研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2006年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 李昕;基于細(xì)胞焦亡機(jī)制探討腎腦復(fù)元湯對(duì)缺糖缺氧PC12細(xì)胞的保護(hù)作用[D];湖南中醫(yī)藥大學(xué);2019年

2 張?zhí)锾?腎腦復(fù)元湯對(duì)MCAO再灌注大鼠HPA軸功能的影響[D];湖南中醫(yī)藥大學(xué);2019年

3 商燕;腎腦復(fù)元湯對(duì)缺血再灌大鼠腦血管新生的作用及整合素α5β1表達(dá)的影響[D];湖南中醫(yī)藥大學(xué);2019年

4 周黔香;自擬益氣復(fù)元湯對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎大鼠Th1/Th2細(xì)胞平衡的影響[D];南方醫(yī)科大學(xué);2018年

5 劉瑩瑩;腎腦復(fù)元湯治療椎—基底動(dòng)脈供血不足性眩暈?zāi)I虛血瘀證的臨床研究[D];湖南中醫(yī)藥大學(xué);2014年

6 趙傳山;骨傷復(fù)元湯在脛腓骨開放性骨折骨愈合過(guò)程中的療效觀察[D];山東中醫(yī)藥大學(xué);2016年

7 秦偉夫;烏鱧復(fù)元湯促進(jìn)術(shù)后大鼠切口愈合的實(shí)驗(yàn)研究[D];湖南中醫(yī)藥大學(xué);2007年

8 岳飛翔;小腿開放性骨折游離骨塊回植術(shù)后口服骨傷復(fù)元湯的臨床療效觀察[D];福建中醫(yī)藥大學(xué);2016年

9 王晚霞;益氣復(fù)元湯對(duì)氣虛血瘀證的臨床干預(yù)研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2008年

10 李傳明;復(fù)元湯配合結(jié)腸灌腸治療慢性腎衰竭的療效觀察及對(duì)血磷的影響[D];黑龍江中醫(yī)藥大學(xué);2014年

本文編號(hào)：2812515