目的:本研究通過采用細胞培養(yǎng)、形態(tài)學檢查及染色、生化檢測和Western Blot等技術(shù)手段,觀察腎腦復元湯(ShenNaoFuYuan decoction,SNFYD)含藥血清對缺糖缺氧(Oxygen-Glucose Deprivation,OGD)PC12細胞的保護作用,及其對NLRP3/Caspase-1、IL-1β/IL18焦亡通路相關(guān)細胞因子表達的影響,并以此探討腎腦復元湯通過抑制焦亡、減輕損傷以保護PC12細胞的可能機制,為其應用于缺血性中風治療提供實驗依據(jù)。方法:1、腎腦復元湯含藥血清制備:取SD大鼠灌服腎腦復元湯,連續(xù)3天,采集腹主動脈血液,離心分離血清,滅活后凍存?zhèn)溆谩?、PC12的培養(yǎng)與模型建立:PC12細胞株為購入成品,使用含10%FBS及1%雙抗的DMEM-HG完全培養(yǎng)液進行培養(yǎng),根據(jù)檢測的指標與實驗目的,予接種至相應孔板。種板后待細胞貼壁,對數(shù)生長時,予更換無糖培養(yǎng)液,并置于三氣培養(yǎng)箱中,溫度37℃,通以95%N2-5%CO2進行培養(yǎng)。OGD時間為4小時,再換回原培養(yǎng)條件,恢復糖、氧供應,并根據(jù)分組進行藥物處理。3、腎腦復元湯含藥血清培養(yǎng)液對PC12干預:OGD后的細胞設三組,SNFYD組為實驗組,使用含10%腎腦復元湯含藥血清的完全培養(yǎng)基進行培養(yǎng);陰性對照組為空白血清組,使用10%空白大鼠血清加入完全培養(yǎng)基進行干預;陽性對照組選擇NLRP3抑制劑INF39為干預藥物,以1μM濃度加入完全培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。4、檢測相關(guān)數(shù)據(jù):各組細胞于倒置顯微鏡下觀察形態(tài),AO/EB染色后熒光顯微鏡下檢測凋亡程度,CCK8法檢測活性、Western blot法檢測焦亡通路NLRP3/Caspase-1—IL-1β/IL18細胞因子的表達情況。結(jié)果:OGD造模后,PC12損傷明顯,焦亡通路的各細胞因子明顯升高,使用腎腦復元湯含藥血清及INF39干預受損的PC12細胞后,PC12細胞形態(tài)、活性均見好轉(zhuǎn),相應地NLRP3/Caspase-1焦亡通路激活減弱,表明該通路的抑制與細胞狀態(tài)的好轉(zhuǎn)有相關(guān)性,而腎腦復元湯與INF39均能抑制該通路的激活。提示腎腦復元湯可能通過抑制NLRP3/Caspase-1及下游焦亡通路,減少神經(jīng)細胞炎性凋亡,從而保護神經(jīng)組織,達到治療腦梗塞的目的。結(jié)論:腎腦復元湯含藥血清對缺氧缺糖PC12細胞模型有保護作用,這一作用可能與抑制焦亡有關(guān),NLRP3/Caspase-1及下游的IL-18、IL-1β細胞因子可能是抑制焦亡的關(guān)鍵靶點。
【學位單位】：湖南中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：R285.5

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本文編號：2812515