【摘要】：目的:通過實(shí)驗(yàn)研究,闡明朱砂安神丸對條件性恐懼大鼠恐懼記憶的影響及作用機(jī)制。方法:第一部分:朱砂安神丸對條件性恐懼大鼠恐懼記憶的影響1.朱砂安神丸對條件性恐懼大鼠恐懼記憶習(xí)得的影響條件性恐懼模型的復(fù)制:將實(shí)驗(yàn)動物隨機(jī)分為空白對照組、模型對照組、給藥組,每組10只。給藥組實(shí)驗(yàn)動物給予朱砂安神丸混懸液(經(jīng)灌胃途徑給予,0.81mg/g),空白對照組、模型對照組均給予相同體積的雙蒸水,1次/日,連續(xù)7日。在末次給藥后,將模型對照組、給藥組實(shí)驗(yàn)動物依次放入條件性恐懼刺激箱內(nèi),適應(yīng)120秒。在第120秒給予實(shí)驗(yàn)動物單一頻率聲音信號(2000Hz,75dB)。第125秒,在聲音信號的基礎(chǔ)上給予實(shí)驗(yàn)動物持續(xù)5秒的不可逃避的足底電刺激(0.75mA)。第130秒聲音信號與電刺激同時(shí)結(jié)束,130～190秒內(nèi)不做任何處理。第190秒重復(fù)120～190秒過程,連續(xù)20次�？瞻讓φ战M僅給予聲音信號不給予電刺激,其他操作相同。結(jié)束后讓實(shí)驗(yàn)動物在刺激箱內(nèi)停留120秒后再放回飼養(yǎng)籠。恐懼記憶習(xí)得測試:復(fù)制條件性恐懼模型的次日,將各組實(shí)驗(yàn)動物依次再放入刺激箱內(nèi),適應(yīng)120秒。在第120秒給予實(shí)驗(yàn)動物單一頻率聲音信號(2000Hz,75dB)。第130秒聲音信號結(jié)束,130～190秒內(nèi)不做任何處理,記錄聲音信號停止后60秒內(nèi)實(shí)驗(yàn)動物的僵直反應(yīng)時(shí)間。第190秒重復(fù)120～190秒過程,連續(xù)5次。結(jié)束后讓實(shí)驗(yàn)動物在刺激箱內(nèi)停留120秒后再放回飼養(yǎng)籠。記錄各組實(shí)驗(yàn)動物的僵直反應(yīng)時(shí)間,以此作為觀測指標(biāo)探究朱砂安神丸對條件性恐懼大鼠恐懼記憶習(xí)得的影響。2.朱砂安神丸對條件性恐懼大鼠恐懼記憶消退的影響按上述“朱砂安神丸對條件性恐懼大鼠恐懼記憶習(xí)得的影響”實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行條件性恐懼模型的復(fù)制,在習(xí)得測試后的第1、3、5、7天,將各組實(shí)驗(yàn)動物依次再放入刺激箱內(nèi),重復(fù)恐懼記憶習(xí)得測試的操作,記錄各組實(shí)驗(yàn)動物的僵直反應(yīng)時(shí)間,以此作為觀測指標(biāo)探究朱砂安神丸對條件性恐懼大鼠恐懼記憶消退的影響。3.朱砂安神丸對條件性恐懼大鼠自主活動的影響按上述“朱砂安神丸對條件性恐懼大鼠恐懼記憶習(xí)得的影響”實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行條件性恐懼模型的復(fù)制,在各組實(shí)驗(yàn)動物進(jìn)行條件性恐懼模型復(fù)制的次日,將各組實(shí)驗(yàn)動物放入大小鼠開場活動實(shí)驗(yàn)箱內(nèi),記錄各組實(shí)驗(yàn)動物運(yùn)動時(shí)間、運(yùn)動距離,以此探究朱砂安神丸對條件性恐懼大鼠自主活動的影響。第二部分朱砂安神丸對條件性恐懼大鼠海馬突觸可塑性的影響1.朱砂安神丸對條件性恐懼大鼠海馬突觸功能可塑性的影響按上述“朱砂安神丸對條件性恐懼大鼠恐懼記憶習(xí)得的影響”實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行條件性恐懼模型的復(fù)制,在各組實(shí)驗(yàn)動物進(jìn)行條件性恐懼模型復(fù)制的次日,用烏拉坦腹腔注射麻醉各組實(shí)驗(yàn)動物,在腦立體定位儀上固定后,埋置自制的刺激電極和記錄電極。記錄基礎(chǔ)水平的群峰電位后,高頻強(qiáng)直刺激(HFS)誘導(dǎo)長時(shí)程增強(qiáng)(LTP)。記錄各組實(shí)驗(yàn)動物海馬區(qū)群峰電位(PS),根據(jù)PS的變化率探究朱砂安神丸對條件性恐懼大鼠海馬功能可塑性的影響。2.朱砂安神丸對條件性恐懼大鼠海馬突觸結(jié)構(gòu)可塑性的影響按上述“朱砂安神丸對條件性恐懼大鼠恐懼記憶習(xí)得的影響”實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行條件性恐懼模型的復(fù)制,在各組實(shí)驗(yàn)動物進(jìn)行條件性恐懼模型復(fù)制的次日,各組隨機(jī)選取3只實(shí)驗(yàn)動物,水合氯醛腹腔注射麻醉后,取出海馬組織,制作透射電鏡超薄切片,在日立(H-7650)透射電鏡下放大30000倍觀察神經(jīng)氈周圍的突觸形態(tài)。使用Image-Pro Plus6.0測量海馬CA1神經(jīng)元突觸活性區(qū)長度、突觸PSD厚度、突觸間隙寬度,以此探究朱砂安神丸對條件性恐懼大鼠海馬結(jié)構(gòu)可塑性的影響。3.朱砂安神丸對條件性恐懼大鼠海馬神經(jīng)元的保護(hù)作用按上述“朱砂安神丸對條件性恐懼大鼠恐懼記憶習(xí)得的影響”實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行條件性恐懼模型的復(fù)制,在各組實(shí)驗(yàn)動物進(jìn)行條件性恐懼模型復(fù)制的次日,各組隨機(jī)選取3只實(shí)驗(yàn)動物,水合氯醛腹腔注射麻醉后,取出海馬組織,制作透射電鏡超薄切片,在日立(H-7650)透射電鏡下放大8000倍觀察海馬CA1區(qū)神經(jīng)元形態(tài),放大15000倍觀察神經(jīng)元內(nèi)細(xì)胞器形態(tài)。結(jié)果:第一部分:朱砂安神丸對條件性恐懼大鼠恐懼記憶的影響1.朱砂安神丸對條件性恐懼大鼠恐懼記憶習(xí)得的影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:在條件性恐懼記憶習(xí)得階段的第1min、第3min、第5min時(shí)間點(diǎn)以及第2min、第4min時(shí)間點(diǎn),模型對照組實(shí)驗(yàn)動物的僵直反應(yīng)時(shí)間高于空白對照組,兩者比較具有顯著差異(P0.01,P0.05);與模型對照組比較,給藥組實(shí)驗(yàn)動物的僵直反應(yīng)時(shí)間均低于模型對照組,但兩者比較無顯著差異。2.朱砂安神丸對條件性恐懼大鼠恐懼記憶消退的影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:在條件性恐懼記憶消退階段,各組實(shí)驗(yàn)動物的僵直反應(yīng)時(shí)間隨著時(shí)間的延長逐漸減少;與空白對照組比較,模型對照組實(shí)驗(yàn)動物的僵直反應(yīng)時(shí)間在各時(shí)間段內(nèi)均明顯高于空白對照組,兩者比較具有極顯著差異(P0.01);與模型對照組比較,給藥組實(shí)驗(yàn)動物的僵直反應(yīng)時(shí)間均低于模型對照組,其中,第5日給藥組實(shí)驗(yàn)動物的僵直反應(yīng)時(shí)間低于模型對照組,兩者比較具有顯著差異(P0.05),第7日給藥組實(shí)驗(yàn)動物的僵直反應(yīng)時(shí)間明顯低于模型對照組,兩者比較具有極顯著差異(P0.01)。3.朱砂安神丸對條件性恐懼大鼠自主活動的影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:與空白對照組比較,模型對照組實(shí)驗(yàn)動物的運(yùn)動時(shí)間、運(yùn)動距離均小于空白對照組,但兩者比較無顯著差異;與模型對照組比較,給藥組實(shí)驗(yàn)動物的運(yùn)動時(shí)間、運(yùn)動距離均大于模型對照組,但兩者比較無顯著差異。第二部分:朱砂安神丸對條件性恐懼大鼠海馬神經(jīng)元突觸可塑性的影響1.朱砂安神丸對條件性恐懼大鼠海馬功能可塑性的影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:高頻強(qiáng)直刺激后,實(shí)驗(yàn)動物的PS幅值增加的百分率超過了20%,說明LTP誘發(fā)成功。與空白對照組比較,模型對照組的PS幅值在第40min、70min、80min、90min、100min時(shí)明顯增大,兩者比較具有顯著差異(P0.05);與模型對照組比較,給藥組的PS幅值在120min的測定過程中均顯著減少,兩者比較具有顯著差異(P0.05)。2.朱砂安神丸對條件性恐懼大鼠海馬結(jié)構(gòu)可塑性的影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:比較各組實(shí)驗(yàn)動物海馬CA1區(qū)神經(jīng)元突觸的數(shù)目及形態(tài),與空白對照組比較,模型對照組實(shí)驗(yàn)動物海馬神經(jīng)元神經(jīng)氈內(nèi)出現(xiàn)大量空泡,突觸數(shù)目明顯減少,突觸前膜、突觸后膜的邊緣界限不清晰,突觸間隙內(nèi)模糊不清,突觸前膜內(nèi)的突觸小泡明顯減少甚至消失,突觸前膜內(nèi)線粒體腫脹,內(nèi)部結(jié)構(gòu)溶解,嵴減少甚至消失。與模型對照組比較,給藥組神經(jīng)氈內(nèi)未出現(xiàn)空泡,突觸數(shù)目較多,突觸各部分結(jié)構(gòu)界限清晰,突觸前膜內(nèi)的突觸小泡也較多,圓而清亮,分布較為密集,突觸前、后膜,與空白對照組接近,突觸前膜內(nèi)線粒體結(jié)構(gòu)輕微腫脹,但嵴較多,清晰可見。測量各組實(shí)驗(yàn)動物海馬CA1區(qū)神經(jīng)元突觸活性區(qū)長度、突觸PSD厚度、突觸間隙寬度:模型對照組實(shí)驗(yàn)動物的突觸活性區(qū)長度(212.65±48.63nm)明顯小于空白對照組(247.14±27.57nm),兩者比較具有極顯著差異(P0.01),突觸PSD厚度(37.98±7.84nm)明顯小于空白對照組(51.20±9.48nm),兩者比較具有極顯著差異(P0.01),突觸間隙寬度(31.73±5.20nm)明顯大于空白對照組(22.06±2.80nm),兩者比較具有極顯著差異(P0.01);給藥組實(shí)驗(yàn)動物海馬CA1區(qū)突觸活性區(qū)長度(238.73±19.20nm)大于模型對照組,兩者比較具有顯著差異(P0.05),突觸PSD厚度(51.54±6.87nm)明顯大于模型對照組,兩者比較具有極顯著差異(P0.01),突觸間隙寬度(21.90±2.71nm)明顯小于模型對照組,兩者比較具有極顯著差異(P0.01)。3.朱砂安神丸對條件性恐懼大鼠海馬神經(jīng)元的保護(hù)作用實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:比較各組實(shí)驗(yàn)動物海馬CA1區(qū)神經(jīng)元的形態(tài),空白對照組實(shí)驗(yàn)動物的海馬神經(jīng)元細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整,細(xì)胞膜、核膜清晰,細(xì)胞漿內(nèi)細(xì)胞器散在分布,且結(jié)構(gòu)完好;模型對照組實(shí)驗(yàn)動物的海馬神經(jīng)元細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整,但出現(xiàn)細(xì)胞膜、核膜不清晰,細(xì)胞核皺縮等現(xiàn)象,細(xì)胞漿內(nèi)出現(xiàn)空泡,粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)部分出現(xiàn)明顯的擴(kuò)張,線粒體大多出現(xiàn)腫脹、嵴減少或消失的現(xiàn)象,甚至小部分線粒體發(fā)生溶解,內(nèi)部出現(xiàn)空泡,部分神經(jīng)元細(xì)胞胞漿內(nèi)可見溶酶體;給藥組實(shí)驗(yàn)動物的海馬神經(jīng)元細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整、清晰,細(xì)胞核大,細(xì)胞膜、核膜均完整,細(xì)胞漿內(nèi)細(xì)胞器較多,形態(tài)較好,細(xì)胞漿內(nèi)空泡、細(xì)胞器變形現(xiàn)象比模型對照組減少,粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張現(xiàn)象不明顯,線粒體大多形態(tài)完好、嵴較多、清晰可見,小部分線粒體略有腫脹,嵴減少。結(jié)論:1.朱砂安神丸具有促進(jìn)恐懼記憶消退的作用。2.朱砂安神丸能夠促進(jìn)恐懼記憶消退的作用與其保護(hù)海馬神經(jīng)元,增強(qiáng)海馬突觸結(jié)構(gòu)與功能可塑性相關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5
【圖文】：

憶的編碼和鞏固的過程；前扣帶回、內(nèi)側(cè)前額葉是能夠調(diào)節(jié)恐懼情緒的調(diào)節(jié)中樞；逡逑在條件性恐懼消退中發(fā)揮著重要作用的則是海馬和內(nèi)側(cè)前額葉Ｗ�？謶智榫w的基逡逑本神經(jīng)環(huán)路如圖１所示。逡逑１７逡逑

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用３Ｆ±ｓ表示，采用ＳＰＳＳ１７．０進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，兩組間比較采用獨(dú)立逡逑樣本／檢驗(yàn)，Ｐ＜０．０５表示具有顯著差異，Ｐ＜０．０１表示具有極顯著差異。實(shí)驗(yàn)結(jié)果逡逑見表２，圖２。逡逑表２條件性恐懼大鼠恐懼記憶習(xí)得階段的僵直反應(yīng)時(shí)間（ｆ±ｓ，ｎ＝１０）逡逑僵直反應(yīng)時(shí)間（ｓ）逡逑組別逡逑邐Ｍｉｎｉ邐Ｍｉｎ２邐Ｍｉｎ３邐Ｍｉｎ４邐Ｍｉｎ５逡逑空白對照組邋〗．３７±０＿４１邐１．４７±０．５０邐１＿５８±０＿２７邐１．６０±0．４４邐１．２５±０．３１逡逑模型對照組邐５５．９７±５．２１＊＊邐５５．６３±９．７３＊邐５７．３７±３．７０＊＊邐５７．６１±１．９６＊邐５５．５６±４．６７＊＊逡逑給藥組邋５４．７３±５．９３邐５４．３８±８．３０邐５０．２２±８．２２邐４９．１１±５．１２邐４８．８４±５．４１逡逑注：與空白對照組比較

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用３ｆ±ｓ表示，采用ＳＰＳＳ１７．０進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，兩組間比較采用獨(dú)立逡逑樣本／檢驗(yàn)，Ｐ＜０．０５表示具有顯著差異，Ｐ＜０．０１表示具有極顯著差異。實(shí)驗(yàn)結(jié)果逡逑見表３，圖３。逡逑表３條件性恐懼大鼠恐懼記憶消退階段的僵直反應(yīng)時(shí)間（３ｆ±ｓ，ｎ＝１０）逡逑僵直反應(yīng)時(shí)間（ｓ）逡逑組別逡逑Ｄａｙｌ邐Ｄａｙ３邐Ｄａｙ邋５邐Ｄａｙ邋７逡逑空白對照組邐４．０８±０．９２邐４．２８±１．４２邐２．９８±０．６８邐２．２１±０．７７逡逑模型對照組邐４６．７４土邋１２．６６＊＊邐４２．５７±１３．６６＊＊邐３１．８６土邋１０．０９＊＊邐２７．３５ｉ８．７４＊＊逡逑給藥組邐４２．２２±１２．５９邐３２．７８±１０．０５邐１７．６６±５．７８Ａ邐６．２２±１．９２ＡＡ逡逑注：１）與空白對照組比較，＊Ｐ＜0．0５，邋＊＊Ｐ＜０．０１；逡逑２）與模型對照組比較，ＡＰ＜０．０５，＾ＦＯ．Ｏｌ。逡逑６０逡逑＊＊逡逑５０邐＊＊逡逑＾邐Ｈｈ逡逑ｕｉ邋４0邐１邐．？上．逡逑一邋ｗ邐＊＊逡逑畫邐：：：：：—Ｌ邐ｔ邐＊＊逡逑＾邋３０邐｜邋N邐｜：丨：逡逑ｍ邐ｒ－＾ｈ逡逑必邐：：：：Ａ逡逑R*２０逡逑８３邐：？：？：邐？；？；？邋ｒ＾－ｉ逡逑ｉｏ邐產(chǎn)逡逑0邋Ｉ邐灥丨：：：：ｌｌ邐W邐W丨畫邐＿逡逑Ｄａｙｌ邐ＤａｙＢ邐Ｄａｙ５邐Ｄａｙ７逡逑ｓ空白對照組□模型對照組□給藥組逡逑圖３條件性恐懼大鼠恐懼記憶消退階段的僵直反應(yīng)時(shí)間逡逑實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：在條件性恐懼記憶消退階段，各組實(shí)驗(yàn)動物的僵直反應(yīng)時(shí)間逡逑均逐漸減少；與空白對照組比較

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 張文超;王庚;胡中華;段開明;歐陽文;;異氟醚對老年大鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力及海馬RhoA蛋白表達(dá)的影響[J];中國醫(yī)藥導(dǎo)報(bào);2015年16期

2 孫麗芳;楊波;石少波;劉韜;阮兵;梁錦軍;;慢性應(yīng)激對心臟交感神經(jīng)和室性心律失常易感性的影響[J];中國循環(huán)雜志;2015年03期

3 吳美潑;;逍遙散和朱砂安神丸聯(lián)合西藥治療神經(jīng)性抑郁癥療效觀察[J];中醫(yī)臨床研究;2015年01期

4 胡國恒;范金花;;補(bǔ)腎方藥促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞增殖分化的研究概述[J];世界中西醫(yī)結(jié)合雜志;2014年03期

5 高珊;周寧;陳春龍;戴海濱;劉健;李偉彥;;不同Narcotrend分級指導(dǎo)下全身麻醉對老年腹部手術(shù)患者術(shù)后認(rèn)知功能的影響[J];東南國防醫(yī)藥;2014年01期

6 董秋安;劉曉偉;;恐懼應(yīng)激大鼠行為學(xué)評估及比較[J];黑龍江中醫(yī)藥;2014年01期

7 勾明會;佘燕玲;孫亞男;徐世芬;;針刺對腦突觸可塑性影響的實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)展[J];上海針灸雜志;2013年12期

8 陳U喫

本文編號：2810000