高效抗逆轉(zhuǎn)錄病毒療法(highly active antiretroviral therapy,HAART)的應(yīng)用成功地將艾滋病從一種致死性的疾病轉(zhuǎn)變?yōu)橐环N慢性可控性的疾病。然而由于患者體內(nèi)潛伏HIV儲(chǔ)存庫(kù)的存在,一旦停藥,患者體內(nèi)的HIV病毒載量又會(huì)迅速反彈�！凹せ钤贇纭敝委煵呗缘奶岢鱿Ｍㄟ^(guò)潛伏激活劑特異性地激活潛伏儲(chǔ)存庫(kù)中的HIV,同時(shí)再聯(lián)合HAART阻止病毒的二次感染;活化的HIV可誘導(dǎo)細(xì)胞病變效應(yīng)和天然免疫系統(tǒng)對(duì)細(xì)胞特異性殺傷,最終實(shí)現(xiàn)艾滋病的功能性治愈。目前,高效低毒的潛伏激活劑的開(kāi)發(fā)是艾滋病治愈研究的熱點(diǎn)。白藜蘆醇是一種廣泛存在于多種植物中的天然化合物,尤其在紅酒中含量較為豐富。在之前的研究中發(fā)現(xiàn)白藜蘆醇能夠激活潛伏HIV,但是對(duì)它的激活作用以及作用機(jī)制還沒(méi)有深入的研究。因此,本研究通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)、熒光定量PCR以及Western blotting等實(shí)驗(yàn)手段對(duì)白藜蘆醇激活潛伏HIV的活性進(jìn)行了驗(yàn)證,并在此基礎(chǔ)上以J-LatA2細(xì)胞為主要實(shí)驗(yàn)對(duì)象進(jìn)一步闡明其作用機(jī)制。本研究首先采用多株HIV潛伏感染細(xì)胞(J-Lat A2、J-Lat 10.6和ACH2細(xì)胞)對(duì)白藜蘆醇激活潛伏HIV的能力進(jìn)行了驗(yàn)證。隨后通過(guò)XTT法檢測(cè)白藜蘆醇對(duì)三株HIV潛伏感染細(xì)胞、Jurkat T細(xì)胞以及人外周血單核細(xì)胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)細(xì)胞活力的影響,結(jié)果顯示白藜蘆醇具有較小的細(xì)胞毒性。為進(jìn)一步分析白藜蘆醇的安全性,檢測(cè)其是否能引起廣泛的T細(xì)胞活化。結(jié)果表明白藜蘆醇并不影響人PBMCs中T細(xì)胞活化標(biāo)志CD25和CD69的表達(dá),提示白藜蘆醇并不會(huì)引起廣泛的T細(xì)胞活化。此外,當(dāng)聯(lián)合使用白藜蘆醇和經(jīng)典激活劑prostratin、JQ1以及SAHA后發(fā)現(xiàn)白藜蘆醇與此三個(gè)經(jīng)典激活劑合用對(duì)潛伏HIV均具有協(xié)同激活效應(yīng)。在白藜蘆醇具有潛伏HIV的激活活性的基礎(chǔ)上,本研究還進(jìn)一步檢測(cè)了白藜蘆醇衍生物(三乙酰白藜蘆醇、二氫白藜蘆醇、白藜蘆醇三甲醚、白皮杉醇、紫檀芪和虎杖苷)對(duì)J-Lat A2細(xì)胞中潛伏HIV的激活效應(yīng)。結(jié)果表明僅有三乙酰白藜蘆醇仍具有與白藜蘆醇相似的活性,并且與prostratin、JQ1、SAHA也具有協(xié)同作用。而其他五個(gè)衍生物對(duì)潛伏HIV無(wú)明顯的激活作用。通過(guò)構(gòu)效分析推測(cè)白藜蘆醇結(jié)構(gòu)中苯環(huán)上的間位羥基和兩個(gè)苯環(huán)之間的雙鍵對(duì)于白藜蘆醇發(fā)揮激活潛伏HIV的活性可能比較關(guān)鍵。在進(jìn)一步的機(jī)制研究中,采用Western blotting、流式細(xì)胞術(shù)、染色質(zhì)共沉淀等多種實(shí)驗(yàn)方法得出白藜蘆醇可能的作用機(jī)制:白藜蘆醇誘導(dǎo)的潛伏HIV激活作用與SIRT1無(wú)關(guān)。其可能是通過(guò)上調(diào)組蛋白乙�；�、活化熱休克因子1(heat shock factor 1,HSF1)通路以及P-TEFb共同促進(jìn)轉(zhuǎn)錄起始和轉(zhuǎn)錄延伸,進(jìn)而促進(jìn)潛伏HIV的激活。綜上所述,白藜蘆醇能夠有效地激活潛伏HIV,同時(shí)不引起廣泛的T細(xì)胞活化。而這一激活作用可能是通過(guò)上調(diào)組蛋白乙�；�、活化HSF1通路以及P-TEFb而產(chǎn)生的。此外,白藜蘆醇與經(jīng)典潛伏激活劑prostratin、JQ1和SAHA具有協(xié)同激活的作用。
【學(xué)位單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2017
【中圖分類(lèi)】：R285
【部分圖文】：

毒的二次感染；同時(shí)活化的ＨＩＶ可誘導(dǎo)細(xì)胞病變效應(yīng)和天然免疫系統(tǒng)對(duì)細(xì)胞特異逡逑性殺傷，使得潛伏細(xì)胞半衰期大大縮短進(jìn)而迅速走向死亡；最終實(shí)現(xiàn)ＨＩＶ的功能逡逑性治愈［２７］（圖１）。逡逑ｊ）ＮＡ邐Ｖｏｒｉｎｏｓｔａｔ邐Ｉｍｍｕｎｅ邋ｓｙｓｔｅｍ邐Ａｎｔｉｒｅｔｒｏｖｉｒａｌ逡逑＇Ｄ邋－邋＾Ｌｒ逡逑Ｈ｜Ｖ邐Ｍｅｍｏｒｙ邐廠邐｜逡逑ｇｅｎｏｍｅ邋ＣＤ４’Ｔ邋ｃｅｌｌ邐ＨＩＶ邋ＲＮＡ邋ＨＩＶ邋ｐｒｏｔｅｉｎｓ邐Ｄｙｉｎｇ邋ｉｎｆｅｃｔｅｄ邋ｃｅｌｌ邐Ｕｎｉｎｆｅｃｔｅｄ邋ｃｅｌｌ逡逑圖１：邐“激活再殺滅”策略示意圖［２７］逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋１：邋Ｓｃｈｅｍａｔｉｃ邋ｄｉａｇｒａｍ邋ｏｆ邋“ｓｈｏｃｋ邋ａｎｄ邋ｋｉｌｌ”邋ｓｔｒａｔｅｇｙ逡逑四潛伏激活劑的研宄進(jìn)展逡逑針對(duì)已發(fā)現(xiàn)的ＨＩＶ潛伏感染形成和維持的機(jī)制，目前已發(fā)現(xiàn)多個(gè)作用于不逡逑同途徑的潛伏激活劑。主要分為以下三大類(lèi)：逡逑１．表觀遺傳修飾類(lèi)潛伏激活劑：包括ＨＤＡＣ抑制劑（ＨＤＡＣ邋ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ，邋ＨＤＡＣｉ），逡逑可抑制組蛋白去乙�；�，使染色體中的結(jié)構(gòu)單元核小體趨于不穩(wěn)定狀態(tài)，從逡逑４逡逑

稱(chēng)為ｖｏｒｉｎｏｓｔａｔ）、帕比司他、羅米地辛［２８］。ＤＮＡ甲基化酶（ＤＮＡ邋ｍｅｔｈｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ，逡逑ＤＮＭＴ）抑制劑，可抑制前病毒ＤＮＡ的甲基化過(guò)程。代表藥物有地西他賓［２９】。逡逑組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶（Ｈｉｓｔｏｎｅ邋ｍｅｔｈｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ，ＨＭＴ）抑制劑，可抑制細(xì)胞ＨＭＴ的活性，從而抑制前病毒ＤＮＡ的轉(zhuǎn)錄。代表藥物有Ｇ９ａ甲基化轉(zhuǎn)移酶抑制劑逡逑ＢＩＸ０１２９４和Ｓｕｖ３９Ｈｌ甲基化轉(zhuǎn)移酶抑制劑毛殼素。逡逑２．轉(zhuǎn)錄因子類(lèi)潛伏激活劑：包括蛋白激酶Ｃ邋（ｐｒｏｔｅｉｎ邋ｋｉｎａｓｅ邋Ｃ，邋ＰＫＣ）激活劑，逡逑可磷酸化ＰＫＣ，進(jìn)而活化下游ＮＦ－ｋＢ以及ＡＰ－１通路，促進(jìn)ＨＩＶ基因的轉(zhuǎn)錄。代藥物有？１＾加如、卩＼１八以及１＾（＾３如－１［３（），３１］。卩－丁￡？１５激活劑，通過(guò)促進(jìn)？－丁丑？與ＨＩＶＴａｔ結(jié)合激活ＨＩＶ的轉(zhuǎn)錄。代表藥物有ＨＭＢＡ、ＪＱ１和ＯＴＸ０１５等［３２＿３４］。逡逑３．細(xì)胞因子免疫功能調(diào)節(jié)劑：如ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５和ＧＭ－ＣＳＦ等［３５］。另外還有未逡逑分類(lèi)型的戒酒硫（ｄｉｓｕｌｆｉｒａｍ）邋［３６］，維甲酸（ａｃｉｔｒｅｔｉｎ）等［３７］。在目前己有的研究逡逑結(jié)果表明，聯(lián)合應(yīng)用兩種或兩種以上不同作用機(jī)制的ＬＲＡｓ，能發(fā)揮協(xié)同增強(qiáng)的逡逑激活活性［１６，３８］。各類(lèi)ＬＲＡｓ的作用途徑如圖２所示。逡逑

上的植物中。白藜蘆醇在植物中能以游離態(tài)（順式、反式）和糖苷結(jié)合態(tài)（順逡逑式、反式）兩種形式分布。在植物中白藜蘆醇主要以反式形式存在，并且其生逡逑理活性強(qiáng)于其順式異構(gòu)體％】。反式白藜蘆醇的化學(xué)結(jié)構(gòu)式如圖３所示。逡逑ＨＯ逡逑ＨＯ逡逑圖３：反式白藜蘆醇的化學(xué)結(jié)構(gòu)逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋３：邋Ｔｈｅ邋ｃｈｅｍｉｃａｌ邋ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ邋ｏｆ邋ｔｒａｎｓ－ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ逡逑自２０世紀(jì)９０年代發(fā)現(xiàn)葡萄酒的飲用進(jìn)而攝入白藜蘆醇可減低冠心病的發(fā)逡逑病率起，白藜蘆醇就受到廣泛的關(guān)注，其生物活性也得到了進(jìn)一步的開(kāi)發(fā)【４１］。逡逑近年來(lái)，越來(lái)越多的研宄表明白藜蘆醇具有抗癌、心血管保護(hù)、抗炎、神經(jīng)保逡逑護(hù)等多種生物活性及藥理作用［４２］�，F(xiàn)如今，己有超過(guò)１２０個(gè)臨床試驗(yàn)被批準(zhǔn)用逡逑于確定白藜蘆醇的安全性及其多種藥理作用。其中有６個(gè)處于ＩＶ期臨床試驗(yàn)階逡逑段［４３］。在ＨＩＶ研宄領(lǐng)域，白藜蘆醇也被報(bào)道具有抗病毒活性。其作用機(jī)制是通逡逑過(guò)抑制核糖核苷還原酶的作用從而抑制核糖核苷酸的生成，進(jìn)而抑制ＨＩＶ的復(fù)逡逑６逡逑

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本文編號(hào)：2809907