目的:本實驗基于LC-MS代謝組學(xué)技術(shù),分析16月齡自然增長小鼠脾組織、腎組織以及血漿樣本的內(nèi)源性代謝差異物變化及六味地黃丸對小鼠體內(nèi)這些代謝標(biāo)志物的調(diào)節(jié)作用,為六味地黃丸干預(yù)小鼠增齡相關(guān)證候的生物學(xué)基礎(chǔ)提供科學(xué)依據(jù)。方法:本實驗選取SPF清潔級ICR小鼠共60只為實驗對象;其中雌、雄小鼠各20只,從3月齡正常單籠飼養(yǎng)到16月齡,隨機(jī)分為模型組和六味地黃丸給藥組,每組雌、雄小鼠各10只;另選取3月齡雌、雄小鼠各10只為青年對照組,青年對照組與模型組采用同體積比的生理鹽水灌胃,六味地黃丸組采用灌胃給藥。給藥第31天小鼠眶靜脈取血以制取血漿,之后斷頸處死,取其脾、腎組織,將樣品置于-80℃冰箱凍存。實驗前將樣本預(yù)處理,進(jìn)行代謝組學(xué)技術(shù)檢測得出數(shù)據(jù),進(jìn)行多元統(tǒng)計分析和篩選出標(biāo)志性差異物。結(jié)果:1.16月齡模型組雌雄小鼠的脾組織、腎組織及血漿樣品中代謝物標(biāo)志物與3月齡青年對照組相比,出現(xiàn)不同程度的變化。在脾組織樣品分析中,雄鼠鑒定出28個增齡相關(guān)代謝標(biāo)志物,主要參與了14條代謝通路,氨基酸、脂類、糖代謝等代謝通路在雄鼠脾組織中有著不同程度的改變;雌鼠脾組織鑒定出27個增齡相關(guān)代謝標(biāo)志物,主要參與了11條代謝途徑,其中影響氨基酸代謝的生物標(biāo)志物數(shù)量最多。在腎組織樣品分析中,雄鼠鑒定出25個增齡相關(guān)代謝標(biāo)志物,參與了13條代謝通路,主要集中在氨基酸與脂類代謝上;雌鼠鑒定出25個增齡相關(guān)代謝標(biāo)志物,主要參與了12條代謝途徑,主要為氨基酸與糖代謝。在血漿樣本分析中,雄鼠鑒定出12個增齡相關(guān)代謝標(biāo)志物,參與了2條代謝通路,均為糖代謝途徑;雌鼠血漿樣本鑒定出16個增齡相關(guān)代謝標(biāo)志物,主要參與了5條代謝途徑,主要表現(xiàn)為氨基酸代謝通路發(fā)生變化。2.結(jié)合3月齡青年對照組、16月齡模型組以及六味地黃丸給藥組三組小鼠增齡相關(guān)代謝標(biāo)志物數(shù)據(jù)分析,六味地黃丸對這些標(biāo)志性代謝差異物具有回調(diào)作用。在雄鼠脾組織樣品分析中,六味地黃丸對13個代謝標(biāo)志物有調(diào)節(jié)作用,調(diào)節(jié)的主要通路有11條,主要集中在氨基酸代謝與糖類代謝上;在雌鼠脾組織樣品分析中,六味地黃丸對8個代謝標(biāo)志物有調(diào)節(jié)作用,調(diào)節(jié)的主要通路有5條,主要為氨基酸代謝、檸檬酸循環(huán)。在雄鼠腎組織樣品分析中,六味地黃丸對10個代謝標(biāo)志物有調(diào)節(jié)作用,調(diào)節(jié)的主要通路有7條,主要影響氨基酸代謝與糖代謝;雌鼠腎組織樣品分析中,六味地黃丸對10個代謝標(biāo)志物有調(diào)節(jié)作用,調(diào)節(jié)的主要通路有5條,以核黃素代謝、糖類代謝為主。在雌雄小鼠血漿樣品分析中,六味地黃丸對11個代謝標(biāo)志物有調(diào)節(jié)作用,調(diào)節(jié)的主要通路有2條和4條,六味地黃丸對雄鼠影響的代謝通路為糖代謝,對雌鼠影響的代謝通路集中在氨基酸代謝。結(jié)論:1.16月齡小鼠相比于3月齡小鼠,其脾組織、腎組織、血漿中內(nèi)源性代謝差異物發(fā)生改變,表明自然增齡將導(dǎo)致小鼠代謝狀態(tài)發(fā)生變化。2.六味地黃丸對16月齡雌、雄小鼠脾組織、腎組織、血漿樣本中增齡相關(guān)代謝差異物均有不同程度的回調(diào)作用,證明六味地黃丸能調(diào)節(jié)增齡引起的各組織整體代謝的改變。六味地黃丸對雄鼠脾組織、腎組織的干預(yù)均集中在氨基酸、糖代謝,在血漿樣本中主要為糖代謝。六味地黃丸對雌鼠脾組織的干預(yù)集中在氨基酸代謝,在腎組織中主要為糖代謝,在血漿樣本中為氨基酸代謝。
【學(xué)位授予單位】：黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5
【圖文】：

黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)碩士學(xué)位論文 部 分 分 析 增 齡 過 程 中 代 謝 標(biāo) 志 物 的 變 化 及 六 味丸 的 調(diào) 節(jié) 作 用分 析 16 月 齡 小 鼠 脾 組 織 代 謝 標(biāo) 志 物 變 化 穩(wěn) 定 性 檢 驗每 隔 10 個 待 測 樣 品 進(jìn) 組 QC， 檢 驗 儀 器 穩(wěn) 定 性 。 如 圖 示 （ 雄 鼠 正 / 負(fù) 離 子 模 式 ）， 圖 1 - 3 、 1 - 4 所 示 （ 雌 鼠 正 / 負(fù)）， 小 鼠 脾 組 織 樣 本 各 待 測 樣 品 （ Other） 分 布 較 離 散 ， 說個 體 差 異 ，QC 分 布 較 集 中 ，說 明 儀 器 穩(wěn) 定 性 良 好 ，數(shù) 據(jù) 可

每 隔 10 個 待 測 樣 品 進(jìn) 組 QC， 檢 驗 儀 器 穩(wěn) 定 性 。 如 圖 示 （ 雄 鼠 正 / 負(fù) 離 子 模 式 ）， 圖 1 - 3 、 1 - 4 所 示 （ 雌 鼠 正 / 負(fù)）， 小 鼠 脾 組 織 樣 本 各 待 測 樣 品 （ Other） 分 布 較 離 散 ， 說個 體 差 異 ，QC 分 布 較 集 中 ，說 明 儀 器 穩(wěn) 定 性 良 好 ，數(shù) 據(jù) 可1 雄 鼠 脾 組 織 樣 本 （ QC） PCA 主 成 分 分 析 后 Scores 圖 ： 正 離 子

3 雌 鼠 脾 組 織 樣 本 （ QC） PCA 主 成 分 分 析 后 Scores 圖 ： 正 離 子4 雌 鼠 脾 組 織 樣 本 （ QC） PCA 主 成 分 分 析 后 Scores 圖 ： 負(fù) 離 子 織 代 謝 輪 廓 表 征 分 析取 青 年 對 照 組 （ 3M） 和 模 型 組 （ 16M） 小 鼠 脾 組 織 ， 通 過方 法 處 理 ， 進(jìn) 行 正 負(fù) 離 子 模 式 掃 描 ， 得 到 16 月 齡 小 鼠 脾

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2807320