【摘要】：目的:帕金森病是一種中老年人常見的神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病,其病理特征為黑質(zhì)致密區(qū)多巴胺能神經(jīng)元變性缺失和路易小體形成,導致紋狀體多巴胺不足,基底節(jié)神經(jīng)調(diào)節(jié)功能紊亂,臨床主要表現(xiàn)為靜止性震顫、肌強直、運動遲緩和姿勢不穩(wěn)等癥狀。目前對帕金森病的治療只能緩解臨床癥狀,不能根治或延緩其病情自然發(fā)展。NSCs是一種終生具有自我更新能力的細胞,在特定條件誘導下,能夠向特定類型神經(jīng)元或神經(jīng)膠質(zhì)細胞分化,正常成年哺乳類動物腦內(nèi)保留有NSCs。內(nèi)源性NSCs如能被特異性地誘導分化成為多巴胺神經(jīng)元以替代變性缺失的神經(jīng)元,將為帕金森病的治療帶來新的希望。Notch信號通路可以抑制NSCs向神經(jīng)元分化,促進NSCs向放射狀膠質(zhì)細胞分化,顯示Notch信號通路是調(diào)控NSCs分化的重要途徑。龜板作為中醫(yī)補腎法的重要藥物,其水煎液已被研究證實對帕金森病具有治療作用,其提取物對誘導NSCs定向分化為多巴胺能神經(jīng)元具有重要的調(diào)節(jié)作用。但龜板對NSCs分化的調(diào)節(jié)作用,是否靶向Notch信號通路,目前仍不明確。因此,本課題擬探討龜板水煎液對帕金森病的治療作用與Notch通路的相關(guān)性,闡明Notch通路在龜板提取物促NSCs向多巴胺神經(jīng)元分化中的調(diào)控機制,為中醫(yī)補腎法在帕金森病治療中提供新思路。方法:1.龜板水煎液對PD模型大鼠的治療作用用6-OHDA注射法建立PD大鼠模型,分組為:正常組、假手術(shù)組、PD模型組、陽性藥物組、龜板水煎液低劑量組、龜板水煎液高劑量組,采用HE染色法從形態(tài)學上觀察PD模型大鼠病理形態(tài)學上的變化;免疫組化觀察龜板水煎液對 PD 模型大鼠中α-synuclein、TH、Notch1 的作用;Western-blot 法檢測α-synuclein、TH、Notch1的蛋白表達水平;qRT-PCR法檢測TH的mRNA表達。2.龜板提取物對NSCs分化過程中Notch通路分子表達的影響從孕14天SD大鼠取原代NSCs培養(yǎng),采用免疫熒光染色法鑒定NSCs的多向分化能力。先用濃度為30μg/ml的龜板提取物PTE(2B)、十八酸乙酯(S6)和4-甾酮(S9)刺激NSCs分化5天,采用免疫熒光染色法檢測TH和Notchl的表達。再分別用三個不同濃度的2B、S6和S9對NSCs分化刺激7天,采用Western-blot法檢測TH和Notch1的蛋白表達水平。3.龜板提取物對轉(zhuǎn)染Hes1-siRNA后Notch信號通路分子表達的影響培養(yǎng)P19細胞,轉(zhuǎn)染Hes1-siRNA,用不同濃度的2B、S6和S9對其刺激7天,采用Western-blot法檢測TH和NF200的蛋白表達水平。結(jié)果:1.PD模型組黑質(zhì)路易小體表達增多,龜板水煎液組表達減少,紋狀體沒有顯著差異;PD模型組黑質(zhì)和紋狀體中的TH表達減少,α-synuclein和Notch1表達增多;龜板水煎液低、高劑量組的TH表達增多,且量效關(guān)系明顯,α-synuclein和Notch1表達減少。2.刺激NSCs分化5天后,30μg/ml的2B、S6和S9組的TH表達均升高,Notch1表達均減少;刺激NSCs分化7天后,各濃度2B、S6和S9組的TH蛋白表達均有不同程度增多,均以中劑量組(30μg/ml)較為顯著;2B組和S9組的Notch1蛋白表達均有不同程度的減少,而S6組的Notch1蛋白表達則有所增多。3.轉(zhuǎn)染Hes1-siRNA后,各濃度的2B、S6和S9組的TH和NF200蛋白表達升高,其中S6量效關(guān)系明顯,S9隨濃度加大而TH和NF200表達降低。結(jié)論:1.龜板水煎液對PD模型大鼠有治療作用,能減輕黑質(zhì)路易小體的表達,減少腦組織內(nèi)原有多巴胺神經(jīng)元的缺失,量效關(guān)系明顯,這可能是通過抑制Notch1的表達實現(xiàn)的。2.龜板提取物(2B、S6、S9)可能通過抑制Notch1或Hes1促進NSCs向多巴胺神經(jīng)元分化。
【學位授予單位】：廣州中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R285.5
【圖文】：

邐廣州中醫(yī)藥大學２０１７屆碩士學位論文邐逡逑路易小體是帕金森病腦內(nèi)主要的特征性病理標志物，也是其診斷的重要依逡逑據(jù)，位于神經(jīng)元胞質(zhì)中，顯微鏡下為圓形粉紅色均質(zhì)狀結(jié)構(gòu)，中央呈致密核心，逡逑周圍有細絲狀暈圈［７１］。ＨＥ染色后顯微鏡下觀察，ＰＤ模型組腦黑質(zhì)和紋狀體中均逡逑可見數(shù)量不等的路易小體，表明ＰＤ大鼠模型造模成功。在腦黑質(zhì)切片中，與ＰＤ逡逑模型組相比，陽性藥物組、龜板水煎液低劑量組和龜板水煎液高劑量組的路易小逡逑體表達均顯著減少（戶＜０．０１）；而在紋狀體切片中，各組路易小體的表達沒有逡逑顯著差異。逡逑？

Ａ腦炓質(zhì)邐Ｂ紋狀體逡逑圖１－１邋ＰＤ模型組腦黑質(zhì)和紋狀體中的路易小體（ＨＥ染色）（Ｘ邋１０００）逡逑＊邋？；邋■邋Ｈ邋＾逡逑＃邐＼邐＾邐、“逡逑？‘邐．邋＃邐％逡逑＊邋＼邋＾邋．＊逡逑＇邋？邐ｔ邋＊邋ｒ，邋＇邐．．逡逑陽性藥物組逡逑？邋？，邐？／邋，Ｖ：、逡逑＜邐＇邋ａ邋ｆｔ邐．．邐－ｒ／．逡逑p�，逦？／气辶x希緬�？辶x希掊澹掊澹潁у澹灣�？＇邋＇邋？辶x希咤�，逦１６辶x希海觶骸觶垮危骸鰣澹誨澹掊我錚�？＂辶x希茫у澹�？逦＇＇－｀嵪X危蓿鄭皺危潁В掊危А觥觶蹋掊澹簦澹

本文編號：2804996