【摘要】：香椿葉味苦、性溫,具有清熱收斂、消炎解毒、祛濕等功效,臨床主治痢疾、腸炎等疾病,在我國(guó)有著較悠久的使用歷史。現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn),香椿葉取物具有抗氧化、抗炎、緩解高血糖癥、調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝、誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡等藥理作用。黃酮類化合物是香椿葉發(fā)揮功效的重要活性成分,本論文圍繞香椿葉中黃酮類化合物的制備及含量測(cè)定開(kāi)展了研究工作,主要研究?jī)?nèi)容及結(jié)果如下:1.一體化技術(shù)制備香椿葉總黃酮的研究在加壓條件下,以低濃度乙醇為溶劑取香椿葉總黃酮,并以總黃酮得率為指標(biāo)優(yōu)化了取條件,包括取溫度、料液比以及載樣量;接著將萃取液輸送至大孔吸附樹(shù)脂柱中進(jìn)行純化,并以總黃酮回收率和純度為指標(biāo)優(yōu)化了粉末量與樹(shù)脂量之比、取溶劑流速、洗脫溶劑體積以及洗脫溶劑流速,從而得到最佳取與純化一體化條件。即取溫度為90℃、料液比為1:30 g/mL、載樣量為9.5 g,即粉末量與樹(shù)脂量之比為1:6 g/g、取溶劑流速為1.0 mL/min、洗脫溶劑體積為2.0 BV、洗脫劑流速為2.0 BV/h。此后,采用UPLC-MS對(duì)純化所得香椿葉總黃酮中的化學(xué)成分進(jìn)行了鑒定,從中共鑒定出了八種黃酮苷(蘆丁,楊梅苷、槲皮素-3-O-β-D-半乳糖苷、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷、槲皮素-3-O-α-L-阿拉伯糖苷、紫云英苷、槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖苷和山柰酚-3-O-α-L-鼠李糖苷)。與傳統(tǒng)的先取后純化方法相比較,一體化技術(shù)使總黃酮回收率及純度分別增加了15.4%和21.3%,且溶劑消耗以及時(shí)間消耗量分別減少了48.1%和45.3%。2.UPLC法同時(shí)測(cè)定香椿葉中四種黃酮苷建立了UPLC分析香椿葉四種黃酮苷的色譜條件,即色譜柱為Waters Xbridge Shield RP18(2.1 mm×150 mm,1.7μm),流動(dòng)相為0.05%甲酸水溶液(A)-0.05%甲酸乙腈溶液(B),梯度洗脫程序?yàn)? min,80%A,20%B;8 min,80%A,20%B;10 min,70%A,30%B;15 min,70%A,30%B。進(jìn)行線性關(guān)系、精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性和加樣回收率等方法學(xué)考察。結(jié)果表明,蘆丁、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷、槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖苷和山柰酚-3-O-α-L-鼠李糖苷分別在0.469~120μg/mL,0.547~140μg/mL,1.25~320μg/mL和0.781~200μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,相關(guān)系數(shù)(r~2)分別為0.9994、0.9999、0.9999和0.9998,精密度處于0.17%~3.15%(n=6),該方法重復(fù)性良好(RSD3%,n=6),供試品溶液48 h內(nèi)穩(wěn)定(RSD2%),平均加樣回收率100%~105%(n=3)。測(cè)定了九個(gè)產(chǎn)地中香椿葉四種黃酮苷的含量,發(fā)現(xiàn)有較大差異,其中,安徽阜陽(yáng)產(chǎn)香椿葉中四種黃酮苷總含量最高,達(dá)到23.5 mg/g;安徽蕪湖、河南南陽(yáng)和江蘇鎮(zhèn)江產(chǎn)香椿葉樣品中四種黃酮苷總含量較為接近;山西晉中產(chǎn)香椿葉這四種黃酮苷的總含量最低,為6.45 mg/g,僅為安徽阜陽(yáng)產(chǎn)香椿葉總黃酮含量的27.4%。安徽蕪湖產(chǎn)香椿葉蘆丁和槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷含量均為最高;安徽阜陽(yáng)產(chǎn)香椿葉槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖苷含量最高,其次為河北保定以及江蘇鎮(zhèn)江產(chǎn)的香椿葉;河南南陽(yáng)產(chǎn)香椿葉山柰酚-3-O-α-L-鼠李糖苷含量最高,其次為安徽阜陽(yáng)產(chǎn)香椿葉。其次,以四種黃酮苷含量為依據(jù),對(duì)九個(gè)產(chǎn)地香椿葉進(jìn)行單因素方差分析,可以看出,在顯著性水平α=0.05時(shí),九個(gè)產(chǎn)地的香椿葉中四種黃酮苷含量存在極顯著性差異(P0.001)。利用最小顯著差數(shù)法對(duì)這九種產(chǎn)地香椿葉的四種黃酮苷含量進(jìn)行兩兩比較,發(fā)現(xiàn)四種黃酮苷的含量在這九個(gè)產(chǎn)地之間P0.05,也存在顯著性差異。接著,對(duì)香椿葉中四種黃酮苷含量進(jìn)行相關(guān)性分析,可以看出,在顯著性水平α=0.01時(shí),香椿葉中的蘆丁和槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷的含量存在極顯著正相關(guān);在顯著性水平α=0.05時(shí),香椿葉中的槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖苷和山柰酚-3-O-α-L-鼠李糖苷的含量存在顯著正相關(guān)。最后,采用組間聯(lián)接法、歐式距離平方作為度量標(biāo)準(zhǔn)的區(qū)間,根據(jù)這四種黃酮苷含量,香椿葉進(jìn)行系統(tǒng)聚類分析,可將九個(gè)產(chǎn)地香椿葉分為三類,第一類為安徽阜陽(yáng)產(chǎn)香椿葉,其四種黃酮苷含量明顯高于其他產(chǎn)地,質(zhì)量最佳;其次為河南南陽(yáng)產(chǎn)香椿葉,其所含四種黃酮苷均相對(duì)較高,質(zhì)量相對(duì)較好;其他產(chǎn)地的香椿葉歸為第三類。3.雙相酸水解-HPLC法同時(shí)測(cè)定香椿葉中槲皮素和山柰酚的含量建立了HPLC色譜分析條件,即色譜柱為Waters Xbridge RP18(4.6 mm×150 mm,3.5μm),流動(dòng)相為流動(dòng)相為0.1%甲酸水溶液(A)-乙腈(B),梯度洗脫程序?yàn)? min,A(75%),B(25%);5 min,A(70%),B(30%);15 min,A(60%),B(40%);25 min,A(15%),B(85%)。流速為1.0 mL/min,柱溫:35℃,檢測(cè)波長(zhǎng)為254 nm,進(jìn)樣體積:10μL。進(jìn)行線性關(guān)系、精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性和加樣回收率等方法學(xué)考察。結(jié)果表明,槲皮素和山柰酚均在0.313~40.0μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r~2=0.9999),精密度實(shí)驗(yàn)RSD2.5%(n=6),重復(fù)性實(shí)驗(yàn)RSD4%(n=6),供試液在24 h內(nèi)穩(wěn)定(RSD2%),平均加樣回收率均在95%~105%范圍內(nèi)(RSD4%)。構(gòu)建了雙相酸水解體系并應(yīng)用于轉(zhuǎn)化香椿葉黃酮苷獲取槲皮素和山柰酚,首先對(duì)該過(guò)程中的取條件和雙相酸水解條件進(jìn)行了單因素優(yōu)化,發(fā)現(xiàn)取時(shí)間2 h、料液比1:30 g/mL、乙醇濃度60%和水解時(shí)間1 h、水解溫度80℃、鹽酸濃度6%、樣品量為100 mg、乙酸乙酯體積為10 mL時(shí),所測(cè)得的槲皮素和山柰酚含量最高。然后,利用L_9(3~4)正交試驗(yàn)優(yōu)化了水解時(shí)間、水解溫度以及鹽酸濃度,最終得到最佳的水解條件,即水解時(shí)間為1.5 h、水解溫度80℃、鹽酸濃度4%。將新方法與傳統(tǒng)方法進(jìn)行比較,發(fā)現(xiàn)槲皮素和山柰酚得率分別高了40.7%和52.7%,且所用的鹽酸濃度更低。測(cè)定了九個(gè)產(chǎn)地香椿葉中槲皮素和山柰酚含量,發(fā)現(xiàn)九個(gè)產(chǎn)地中香椿葉的槲皮素含量均明顯高于山柰酚含量,且安徽阜陽(yáng)產(chǎn)香椿葉槲皮素和山柰酚總含量顯著高于其他產(chǎn)地,其次為江蘇鎮(zhèn)江產(chǎn)香椿葉,而山西晉中、山東濟(jì)南、江蘇蘇州、江蘇無(wú)錫、河北保定、安徽蕪湖、河南南陽(yáng)產(chǎn)香椿葉中槲皮素和山柰酚總含量接近,其中山西晉中產(chǎn)香椿葉槲皮素和山柰酚的含量均為最低。
【學(xué)位授予單位】：江蘇大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R284.1
【圖文】：

江 蘇 大 學(xué) 碩 士 學(xué) 位 論 文第一章 緒論介椿（Toona sinensis）又名椿、椿樹(shù)和春芽樹(shù)，在《植物名實(shí)圖考》中稱為紅椿，Meliaceae）香椿屬落葉喬木（圖 1.1），是我國(guó)特有的珍貴木材樹(shù)種，色澤亮麗硬、不易變形，有美麗花紋，氣味芬芳，素有“中國(guó)桃花心木”（Chinese mahoga]。此外，香椿在我國(guó)有著較悠久的使用歷史，其樹(shù)皮（椿白皮）、樹(shù)汁（春尖（香玲子）均可入藥，香椿嫩葉（香椿芽）是我國(guó)傳統(tǒng)的時(shí)令蔬菜，因其具特殊氣而出名，味甘美、口感脆嫩、香味濃郁，曾與荔枝一同作為貢品獻(xiàn)給宮廷御用中不可多得的珍品，深受廣大民眾的喜愛(ài)。香椿主要種植于安徽、山西、江蘇、東、河南等省，也是廣泛分布于亞洲的重要經(jīng)濟(jì)樹(shù)種之一[3,4]。

江 蘇 大 學(xué) 碩 士 學(xué) 位 論 文第一章 緒論介椿（Toona sinensis）又名椿、椿樹(shù)和春芽樹(shù)，在《植物名實(shí)圖考》中稱為紅椿，Meliaceae）香椿屬落葉喬木（圖 1.1），是我國(guó)特有的珍貴木材樹(shù)種，色澤亮麗硬、不易變形，有美麗花紋，氣味芬芳，素有“中國(guó)桃花心木”（Chinese mahoga]。此外，香椿在我國(guó)有著較悠久的使用歷史，其樹(shù)皮（椿白皮）、樹(shù)汁（春尖（香玲子）均可入藥，香椿嫩葉（香椿芽）是我國(guó)傳統(tǒng)的時(shí)令蔬菜，因其具特殊氣而出名，味甘美、口感脆嫩、香味濃郁，曾與荔枝一同作為貢品獻(xiàn)給宮廷御用中不可多得的珍品，深受廣大民眾的喜愛(ài)。香椿主要種植于安徽、山西、江蘇、東、河南等省，也是廣泛分布于亞洲的重要經(jīng)濟(jì)樹(shù)種之一[3,4]。

香椿葉黃酮類化學(xué)成分制備技術(shù)與含量測(cè)定研究. 香椿的化學(xué)成分多年來(lái)，國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)香椿化學(xué)成分的研究十分廣泛，到目前為止共計(jì)報(bào)道了從香分離得到的百余個(gè)化合物，主要包括黃酮類化合物 19 個(gè)、萜類化合物 44 個(gè)、苯丙素合物 7 個(gè)、酚類化合物 14 個(gè)和其它類別化合物 16 個(gè)[3, 5, 6]。.1 黃酮類化合物共計(jì)從香椿中分離與鑒定了黃酮類化合物 19 個(gè)，包括 11 種黃酮苷元和 8 個(gè)黃酮苷 6]。

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2804944