【摘要】：艾葉在中國用藥歷史悠久,具有抗氧化、抗腫瘤、抗菌等多種藥理作用,其化學物質多而復雜,主要化學成分包括揮發(fā)油、黃酮類、鞣質類、桉葉烷類、多糖類、三萜類及微量元素類等。隨著對艾葉研究的廣泛開展以及提取技術日益成熟,對化學成分生化活性的研究也進一步深入。本文旨在對研究艾葉三種提取組分的化學成分,在此基礎上通過體外實驗(RAW264.7巨噬細胞炎癥模型)和體內實驗(斑馬魚創(chuàng)傷性感染炎癥模型)進一步研究艾葉三種提取組分的抗炎作用。首先通過氣相色譜-質譜聯(lián)用法確定主要波峰,查閱相關文獻以及CAS號確定主要化學成分的名稱。在化學成分分析的基礎上通過MTT、Griess、Real-time PCR等實驗方法評估艾葉三種提取組分的體外抗炎效果,并建立斑馬魚創(chuàng)傷感染型炎癥模型對其進行體內抗炎效果研究。在體外實驗中,研究結果顯示,500 ng/mL的LPS刺激RAW 264.7細胞6 h后炎癥因子IL-6、IL-1β和TNF-α表達顯著升高,證明細胞炎癥模型構建成功;MTT方法檢測發(fā)現(xiàn)艾葉三種提取組分對細胞毒性均較小,且低濃度對RAW 264.7細胞具促增值作用,三種提取組分IC50值均高于50μg/ml;Griess方法檢測發(fā)現(xiàn)艾葉三種提取組分能顯著減少在LPS刺激下巨噬細胞NO的釋放量,并呈濃度依賴性降低;Real-time PCR方法檢測發(fā)現(xiàn)三種提取組分能有效降低RAW 264.7細胞在LPS刺激后IL-6、IL-1β和TNF-α炎癥因子的表達和分泌。在體內實驗中,觀察到在熒光顯微鏡下斑馬魚炎癥模型中經(jīng)熒光標記的巨噬細胞和中性粒細胞都一定數(shù)量的減少,證明了其具有一定抗炎作用。因此,艾葉三種提取組分因其低毒、高效的抗炎作用可以作為有效治療炎癥疾病的有效藥物。
【學位授予單位】：暨南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R284.1
【圖文】：

暨南大學碩士學位論文曲線后計算各上清中的 NO 含量。測量艾葉重油及純露 NO 釋放量實驗方法同艾葉輕油。3 實驗結果3.1 細胞炎癥模型的建立參考相關文獻，本實驗500 ng/mL的LPS 對RAW264.7進行刺激，分為細胞組與 RAW 264.7 正常細胞組，通過 Real-time PCR 方法檢測炎性因TNF-α的 mRNA 表達量，從而判斷模型是否建立成功。由下圖可知，經(jīng) LIL-1β、TNF-α mRNA 表達量都顯著升高，證明經(jīng) LPS 刺激，部分促炎因升高，說明此模型成功建立，綜合考慮選取 500 ng/mL 為工作液濃度。

暨南大學碩士學位論文2 三種提取組分對細胞毒性的測定通過 MTT 方法分別檢測艾葉輕油、艾葉重油、艾葉純露對 RAW 264.7 細胞增殖的。MTT 即噻唑藍，是一種水溶性黃色染料，活細胞中線粒體的琥珀酸脫氫酶可以將成甲瓚生成不溶于水的藍紫色沉淀，DMSO 能將生成的甲瓚溶解掉，因此藍紫色甲的生成量與活細胞數(shù)量成正比，間接反映了細胞在不同藥物濃度時的存活率。實驗艾葉輕油、艾葉重油、艾葉純露的濃度均為濃度 400 μg/mL，200 μg/mL，100 μg/m μg/mL，25 μg/mL，12.5 μg/mL，6.25 μg/mL，3.13 μg/mL。測定細胞的 IC50 值，活性被抑制一半時所對應的藥物濃度。結果如圖 3.2.所示，艾葉輕油的 IC50 為 54 μg/葉重油的 IC50 為 61 μg/mL，而艾葉純露對細胞的毒性作用較小且有一定的促增殖作以后續(xù)實驗選擇不大于 50 μg/mL 的藥物濃度進行。

mL 的艾葉輕油、艾葉重油、艾葉純露檢測其對 RAW 264.7 細胞 IL-1β、IL-6 和 TNF-α mRNA 表達量的影響的影響。如圖3.3-1，當加入艾葉輕油后，IL-1β、IL-6 和 TNF-α的 mRNA 表達量均顯著性下降。當艾葉輕油濃度為 12.5 μg/mL 和 25 μg/mL 時 L-1β、IL-6 和 TNF-α的表達量均被明顯抑制，與陽性對照藥物地塞米松的抗炎效果相近甚至優(yōu)于地塞米松組。如圖 3.3-2，當加入艾葉重油，當濃度為 25 μg/mL IL-1β、IL-6 和 TNF-α的 mRNA 表達量明顯下降。但是當艾葉重油濃度低于 25 μg/mL 時，L-1β、IL-6 和 TNF-α的表達量抑制不明顯。如圖 3.3-3，當加入艾葉純露， IL-1β、IL-6 和 TNF-α的 mRNA 表達量雖然受到抑制，但是抑制效果不明顯，效果不如陽性對照藥物地塞米松組。圖 3.3 艾葉輕油對 RAW 264.7 細胞炎性因子 IL-1β、IL-

【參考文獻】

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本文編號：2803951