【摘要】：目的:探討芍藥苷(paeoniflorin,PF)對肝缺血再灌注(ischemia reperfusion,IR)損傷的保護作用并探討其作用機制。方法:將C57BL/6小鼠隨機分為:假手術組(Control組)、芍藥苷對照組(PF組)、肝缺血再灌注損傷模型組(IR組)、芍藥苷干預組(PF+IR組),共四組。其中芍藥苷給予劑量為100 mg/kg,分三次灌胃給藥。模型組和藥物干預組小鼠肝缺血1.5 h再灌注6 h,檢測血清中丙氨酸轉氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、天門冬氨酸轉氨酶(aspartate aminotransferase,AST)的活性,酶聯(lián)免疫吸附測定法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)檢測血清中腫瘤壞死因子-?(tumor necrosis factor-?,TNF-?)和白細胞介素-1?(interleukin-1?,IL-1?)的水平。蘇木素-伊紅(hematoxylin-eosin,HE)染色后鏡下觀察組織損傷的形態(tài)學變化,末端脫氧核苷酸轉移酶介導dUTP缺口末端標記測定法(terminal deoxynucleotidyl transferase mediated d UTP nick-end labeling,TUNEL)法結合Caspase-3試劑盒檢測細胞凋亡情況和Caspase-3活性水平。組織免疫化學(immunohistochemistry,IHC)法測定高遷移率族蛋白1(high mobility group box-1 protein,HMGB1)的表達,定量逆轉錄聚合酶鏈反應(quantitative reverse transcription polymerase chain reaction,q RT-PCR)法檢測細胞膜上模式識別受體Toll樣受體4(toll like receptor 4,TLR4)和炎癥因子TNF-?、IL-1?mRNA的水平。免疫熒光法(immunofluorescence,IF)和流式細胞術(flow cytometry,FCM)檢測中性粒細胞的數(shù)量和表達變化。Western blot進一步檢測TLR4及下游信號分子:磷酸化的c-Jun氨基末端激酶(p-c-Jun N-terminal kinase,p-JNK)、磷酸化的細胞外調節(jié)蛋白激酶(phosphorylated extracellular signal-regulated kinase,p-ERK)、磷酸化的p38(phosphorylated p38,p-p38)以及磷酸化的轉錄因子NF-?B(phosphorylated NF-?B,p-NF-?B)蛋白表達的變化。結果:與Control組相比,IR組血清中轉氨酶活性明顯升高,芍藥苷干預后血清中ALT、AST降低,HE染色和TUNEL結果顯示芍藥苷抑制了肝細胞凋亡,減輕了肝缺血再灌注誘導的損傷。芍藥苷可下調炎癥因子TNF-?、IL-1?的mRNA水平以及蛋白表達水平,而且抑制了中性粒細胞的活化和募集。芍藥苷下調HMGB1和TLR4,也降低了p-JNK、p-ERK、p-p38以及p-NF-?B的蛋白表達水平。結論:芍藥苷對小鼠肝缺血再灌注誘導的損傷確實具有保護作用,可能是通過作用于HMGB1及TLR4-MAPKs信號通路減少了炎癥因子TNF-?、IL-1?的釋放減少了細胞凋亡,同時抑制中性粒細胞浸潤阻止炎癥反應放大以達到保護肝臟的作用。
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R285.5

【參考文獻】

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本文編號：2803262