【摘要】：目的:通過觀察通腑降濁方對便秘型腸易激綜合征(Constipation-type irritable bowel syndrome,IBS-C)大鼠糞便、體質(zhì)量等一般情況、腸道病理學(xué)形態(tài)、內(nèi)臟敏感性、腸粘膜5-HT及5-HT3受體含量、糞便菌群結(jié)構(gòu)的影響,以及5-HT及其受體3與糞便菌群的關(guān)系,探討通腑降濁方治療IBS-C的可能作用機(jī)制。方法:采用冰水灌胃法建立IBS-C大鼠模型,將49只大鼠隨機(jī)分為7組,正常組(N)、模型組(M)、西藥組(X)、益生元組(Y)、中藥高(ZH)、中(ZM)、低劑量(ZL)組,各7只,造模成功后,西藥組給予西沙必利片(3.6mg.kg~(-1).d~(-1)),益生元組給予乳果糖(1667.5mg.kg~(-1).d~(-1)),中藥高、中、低組分別給予通腑降濁方顆粒(劑量分別為18.5、9.25、4.625g.kg~(-1).d~(-1)),模型組予等量生理鹽水灌胃,治療14d,各組大鼠正常飼養(yǎng),并實(shí)時觀察大鼠糞便等一般狀態(tài)。治療結(jié)束后,禁食不禁水24h后,每只大鼠留取不少于0.5g糞便,置入凍存管,投放入-80℃冰箱保存,通過16S rDNA擴(kuò)增子測序技術(shù),分析大鼠各組間糞便菌群的變化。斷頭法處死大鼠,留取結(jié)腸標(biāo)本,采用蘇木精-伊紅(HE)染色觀察腸組織病理變化,采用免疫組織化學(xué)法觀察腸組織中5-HT及5-HT3受體含量。結(jié)果:1.一般情況正常組大鼠一般狀況良好,糞便質(zhì)軟,色黃。造模組大鼠情緒易激惹,毛發(fā)亂,飲食減少,糞便質(zhì)硬,色發(fā)白,量少。各治療組用藥后,糞便質(zhì)地變軟,數(shù)量增多,情緒好轉(zhuǎn)。2.糞便含水量及糞便粒數(shù)造模后,各造模組糞便含水量及粒數(shù)較正常組明顯減少(P0.05),造模各組之間糞便含水量及糞便粒數(shù)無明顯差異(P0.05),表明造模成功。各治療組糞便含水量及粒數(shù)較模型組均有所增加(P0.05),但仍低于正常組(P0.05);各治療組間比較:中藥各組及益生元組糞便含水量、粒數(shù)多于西藥組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),但中藥各組及益生元組間比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);中藥高劑量組治療后結(jié)果較正常組最為接近。3.大鼠內(nèi)臟敏感性的測量造模后,造模組大鼠直腸球囊擴(kuò)張最小容量閾值均下降(P0.05),提示造模成功。治療后,與M相比,各治療組閾值升高(P0.05);各治療組間,中藥各組間比較無顯著差異(P0.05),其余組間仍有顯著差異(P0.05);與N比較,中藥各組與之最接近且無顯著差異(P0.05),其他組仍與之有顯著差異(P0.05)。4.大鼠體質(zhì)量變化各組大鼠體重于實(shí)驗(yàn)期間均平穩(wěn)增長,且增長趨勢基本一致,無明顯差異(P0.05)。5.腸道病理學(xué)形態(tài)各組大鼠腸組織結(jié)構(gòu)清晰可見,粘膜層完整,無充血、水腫、炎細(xì)胞浸潤、糜爛、潰瘍等異常改變。6.免疫組織化學(xué)方法檢測腸道組織中5-HT及5-HT3受體的含量各組大鼠腸組織5-HT及5-HT3受體平均光度值(D)與其染色深度呈正比。與N比較,M及各治療組5-HT免疫組化染色陽性細(xì)胞均著色較深,平均D值較高(P0.05),5-HT3受體免疫組化染色陽性細(xì)胞均著色較淺,平均D值較低(P0.05);與M比較,各治療組5-HT染色較淺,5-HT平均D值降低(P0.05),5-HT3受體染色較深,平均D值升高(P0.05),且尤以ZH變化明顯;各治療組間,ZH與Y著色深淺接近,平均D值差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),且與M更為接近,余治療組間差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。7.腸道菌群變化稀釋曲線趨于平緩,說明本實(shí)驗(yàn)樣本量充足。M較N大鼠ACE指數(shù)(菌群豐度)下降,各治療組較M升高,ZH、Y最接近N;shannon指數(shù)(多樣性)均無無顯著改變。各組間菌群結(jié)構(gòu)皆有顯著變化,與N比較,M中擬桿菌門顯著增高,厚壁菌門、酸桿菌門、疣微菌門顯著降低;各治療組,菌群結(jié)構(gòu)趨近于N,尤以ZH作用明顯。8.神經(jīng)調(diào)控與腸道微生態(tài)的相關(guān)性分析5-HT與ACE、chao1指數(shù)呈正相關(guān),5-HTR3與其呈負(fù)相關(guān),且二者與門、綱各35個菌種具有顯著相關(guān)性,與shannon、simpson指數(shù)無相關(guān)性,提示5-HT及其受體3在腸道的含量與菌群豐富度相互影響,無致病菌過度生長,即神經(jīng)調(diào)控與腸道微生態(tài)具有顯著相關(guān)性,通腑降濁方等藥物對其均有調(diào)整作用。結(jié)論:1.通腑降濁方可以改善便秘,可能通過降低大鼠腸組織中5-HT的含量,增加5-HT3受體含量改善腸道敏感性及動力異常,發(fā)揮對IBS-C的治療作用。2.通腑降濁方可以提高大鼠腸道微生物豐富度,調(diào)節(jié)其菌群結(jié)構(gòu),穩(wěn)定腸道微生態(tài),這可能是其治療IBS-C的作用機(jī)制之一。3.神經(jīng)調(diào)控與腸道微生態(tài)的相關(guān)性可以影響IBS-C的患病及治療。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5;R-332
【圖文】：

1 正常組大鼠結(jié)腸組織 5-HT 免疫組化染色結(jié)果(×4munohistochemical staining results of 5-HT in NG rats.

1 正常組大鼠結(jié)腸組織 5-HT 免疫組化染色結(jié)果(×munohistochemical staining results of 5-HT in NG rats

西藥組大鼠結(jié)腸組織5-HT免疫組化染色結(jié)果(×400)

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本文編號：2803057