【摘要】：目的:使用鹽酸小檗堿對大鼠主動脈內(nèi)皮細胞進行干預(yù)研究,觀察其增殖活性和凋亡情況,以探討鹽酸小檗堿促凋亡的相關(guān)分子機制,為抗血管生成治療提供可能的藥物干預(yù)方向。方法:25?mol/L,50?mol/L,75?mol/L濃度小檗堿分別干預(yù)大鼠主動脈內(nèi)皮細胞24h,48h,72h。通過MTT方法檢測內(nèi)皮細胞的增殖活性。后續(xù)實驗以25?mol/L,50?mol/L,75?mol/L藥物濃度作用48h。通過流式細胞儀檢測內(nèi)皮細胞的凋亡率,觀察早期凋亡率及晚期凋亡率。通過Western Blot實驗方法檢測鹽酸小檗堿作用內(nèi)皮細胞48h后BAX蛋白、BCL-2蛋白、p38MAPK、ERK1/2及p-ERK1/2通路蛋白的表達情況。結(jié)果:25?mol/L,50?mol/L,75?mol/L濃度小檗堿作用24h(P0.01),48h(P0.01),72h(P0.01)顯著抑制內(nèi)皮細胞增殖活性。流式散點圖可以觀察到,隨著藥物濃度的遞增,細胞凋亡率逐漸增加,特別是早期凋亡率。與對照組相比,25?mol/L,50?mol/L,75?mol/L濃度組總凋亡率和早期凋亡率具有顯著性差異。75?mol/L鹽酸小檗堿作用于內(nèi)皮細胞的凋亡率可達到14.74%±1.66%(P0.01),主要以早期凋亡率為主,可達到12.99%±1.40%(P0.01);50?mol/L鹽酸小檗堿作用于內(nèi)皮細胞的凋亡率可達到13.18%±0.75%(P0.01),其中早期凋亡率為10.6%±0.62%(P0.01);低濃度組25?mol/L鹽酸小檗堿作用于內(nèi)皮細胞的凋亡率可達到9.93%±3.14%(P0.05),其中早期凋亡率可達到7.81%±2.14%(P0.01)。Western Blot結(jié)果顯示:與對照組相比,鹽酸小檗堿干預(yù)組可顯著抑制抑凋亡蛋白BCL-2蛋白的表達(P0.05),降低p-ERK1/2與ERK1/2的比值(P0.05);與對照組相比,顯著促進75?mol/L組BAX(P0.05)和p38MAPK(P0.05)信號通路蛋白的表達。結(jié)論:(1)鹽酸小檗堿具有抑制大鼠主動脈內(nèi)皮細胞增殖,促進內(nèi)皮細胞凋亡的作用。(2)鹽酸小檗堿促進內(nèi)皮細胞的凋亡可能與BCL-2蛋白的下調(diào),BAX蛋白的上調(diào)有關(guān),可能與ERK1/2通路及p38MAPK通路有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：右江民族醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R285.5
【圖文】：

18圖 1-3 倒置顯微鏡觀察鹽酸小檗堿作用內(nèi)皮細胞 48 小時的生長情況 。Fig 1-3: The growth of endothelial cells treated with berberine hydrochloride for 48 hours were obunder inverted microscope.3.2 鹽酸小檗堿誘導(dǎo)內(nèi)皮細胞凋亡這一部分研究研究了鹽酸小檗堿對大鼠主動脈內(nèi)皮細胞的凋亡作用，通過流式儀檢測內(nèi)皮細胞的凋亡率。結(jié)果初步證明鹽酸小檗堿具有促進大鼠主動脈內(nèi)皮細胞亡作用，是一種潛在的抑制內(nèi)皮細胞增殖促進細胞凋亡的藥物。為了探索鹽酸小檗堿引起內(nèi)皮細胞凋亡中的作用，我們分別用 25 mol/L、50μm

和 75μmol/L 濃度小檗堿干預(yù)內(nèi)皮細胞 48h，采用流式細胞儀檢測 Annexin V 陽性的細胞。圖 2-1 為設(shè)立的同型對照組，用作調(diào)流式細胞儀的補償和電壓。流式散點可以觀察到，隨著藥物濃度的遞增，細胞凋亡率逐漸增加，特別是早期凋亡率。表示：與對照組相比，高中低濃度組總凋亡率和早期凋亡率具有顯著性差異，75μm酸小檗堿顯著促進內(nèi)皮細胞發(fā)生凋亡，凋亡率可達到 14.74%±1.66%（P<0.01），主早期凋亡率為主，可達到 12.99%±1.40%（P<0.01）；50μmol/L 鹽酸小檗堿作用于內(nèi)胞的凋亡率可達到 13.18%±0.75%（P<0.01），其中早期凋亡率為 10.6%±0.62%（P<低濃度組25μmol/L鹽酸小檗堿作用于內(nèi)皮細胞的凋亡率可達到9.93%±3.14%（P<其中早期凋亡率可達到 7.81%±2.14%（P<0.01）。與低濃度組總凋亡率比較，高濃（P<0.05）具有顯著性差異。

和 75μmol/L 濃度小檗堿干預(yù)內(nèi)皮細胞 48h，采用流式細胞儀檢測 Annexin V 陽性的細胞。圖 2-1 為設(shè)立的同型對照組，用作調(diào)流式細胞儀的補償和電壓。流式散點可以觀察到，隨著藥物濃度的遞增，細胞凋亡率逐漸增加，特別是早期凋亡率。表示：與對照組相比，高中低濃度組總凋亡率和早期凋亡率具有顯著性差異，75μm酸小檗堿顯著促進內(nèi)皮細胞發(fā)生凋亡，凋亡率可達到 14.74%±1.66%（P<0.01），主早期凋亡率為主，可達到 12.99%±1.40%（P<0.01）；50μmol/L 鹽酸小檗堿作用于內(nèi)胞的凋亡率可達到 13.18%±0.75%（P<0.01），其中早期凋亡率為 10.6%±0.62%（P<低濃度組25μmol/L鹽酸小檗堿作用于內(nèi)皮細胞的凋亡率可達到9.93%±3.14%（P<其中早期凋亡率可達到 7.81%±2.14%（P<0.01）。與低濃度組總凋亡率比較，高濃（P<0.05）具有顯著性差異。

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前6條

1 周軍挺;王麗;吳婷;楊婷婷;鄢連和;;小檗堿抗人結(jié)直腸腺癌的作用及其機制[J];中草藥;2017年03期

2 張勇;黃春來;付婷婷;陳小青;王麗萍;莊永澤;;小檗堿對果糖誘導(dǎo)人腎小管細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激PERK凋亡通路的影響[J];解放軍醫(yī)學(xué)雜志;2017年01期

3 Shengyan Xi;Kunhan Chuang;Kwangming Fang;Yimin Lee;Jinggung Chung;Yaochen Chuang;;Effect of berberine on activity and mRNA expression of N-acetyl transferase in human lung cancer cell line A549[J];Journal of Traditional Chinese Medicine;2014年03期

4 金鑫;宋霞;曹永兵;姜遠英;孫青煈;;小檗堿的結(jié)構(gòu)改造及其藥理活性的研究進展[J];藥學(xué)實踐雜志;2014年03期

5 劉真;肖斌;毛旭虎;鄒全明;;炎癥與腫瘤的關(guān)系研究進展[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進展;2009年03期

6 ;Neutral sulfate berberine modulates cytokine secretion and increases survival in endotoxemic mice[J];Acta Pharmacologica Sinica;2006年09期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 徐西強;鹽酸小檗堿治療骨肉瘤的作用及其機制[D];華中科技大學(xué);2012年

本文編號：2801956