【摘要】：中藥材蒺藜為蒺藜科蒺藜屬植物蒺藜(Tribulus terrestris L.)的干燥成熟果實,具有抗衰老、抗菌、鎮(zhèn)痛、調(diào)節(jié)血脂、降血糖、抑癌、利尿、性強壯、抑制酪氨酸酶等藥理作用,常用于治療冠心病、心絞痛、腦血栓、糖尿病、高血脂等疾病。本文從蒺藜的水提物中分離得到21個單體化合物(JL-1~JL-21),利用1D-NMR、2D-NMR、MS、IR等波譜學(xué)手段,結(jié)合其理化性質(zhì),鑒定出其中19個化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu),其中3個為新化合物,3個為首次從蒺藜中分得的化合物。新化合物分別為26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(25R)-5α-呋甾-2α,3β,22α,26-四醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷(JL-18)、26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(25S)-5α-呋甾-2α,3β,22α,26-四醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷(JL-19)、26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(25S)-5α-呋甾-3β,22α,26-三醇-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)]-β-D-吡喃半乳糖苷(JL-21)。首次分得的化合物分別為吉托皂苷元-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷(JL-6)、曼諾皂苷元-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷(JL-1)、新海柯皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)]-β-D-吡喃半乳糖苷(JL-9)。在研究化學(xué)成分的基礎(chǔ)上,本文建立了蒺藜中8種螺甾型皂苷的SPE-HPLC-ELSD含量測定方法。這8種螺甾型皂苷分別為曼諾皂苷元-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷(JL-1)、�？略碥赵�-3-O-β-D-吡喃半乳糖基-(1→2)-[β-D-吡喃木糖-(1→3)]-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷(JL-2)、(25R,S)-海柯皂苷元-3-O-β-D-吡喃半乳糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷(JL-3)、�？略碥赵�-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷(JL-4)、(25R,S)吉托皂苷元-3-O-β-D-吡喃半乳糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷(JL-5)、吉托皂苷元-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷(JL-6)、替告皂苷元-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-[α-L吡喃鼠李糖基-(1→2)]-β-D-吡喃半乳糖苷(JL-7)和海柯皂苷元(JL-8)。首先,通過對提取溶劑種類、提取方法、提取溶劑用量、提取次數(shù)以及SPE種類及洗脫條件等因素的考察,確立了最佳提取與富集方法。其次,進行了方法學(xué)考察。實驗結(jié)果表明,化合物JL-1、JL-2、JL-3、JL-4和JL-7在0.40~20.00μg范圍內(nèi)峰面積y(lgS_均)和進樣濃度x(lgm)具有良好的線性關(guān)系,化合物JL-5、JL-6、JL-8在0.20~10.00μg范圍內(nèi)峰面積y(lgS_均)和進樣濃度x(lgm)具有良好的線性關(guān)系。化合物JL-1~JL-8的精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性以及加樣回收率的RSD值均小于2.0%,說明本實驗所建立的含量測定方法具有精密度好、準(zhǔn)確度高等優(yōu)點。含量測定結(jié)果表明,不同產(chǎn)地蒺藜藥材中化合物JL-1~JL-8的含量差別不是很明顯,8種螺甾型皂苷的平均含量分別為0.049 mg·g~(-1)(JL-1),0.105 mg·g~(-1)(JL-2),0.125 mg·g~(-1)(JL-3),0.063 mg·g~(-1)(JL-4),0.050 mg·g~(-1)(JL-5),0.039 mg·g~(-1)(JL-6),0.081 mg·g~(-1)(JL-7),0.013 mg·g~(-1)(JL-8)。本文還利用大孔吸附樹脂分離方法制備了蒺藜總呋甾皂苷和蒺藜總螺甾皂苷,并對二者的清除羥基自由基活性、抑制酪氨酸酶活性以及抑制肺癌A549細胞的增殖活性進行了對比研究。實驗結(jié)果表明,蒺藜總螺甾皂苷和總呋甾皂苷均具有清除羥基自由基、抑制酪氨酸酶及抑制肺癌A549細胞增殖的活性,其中蒺藜總螺甾皂苷的活性優(yōu)于蒺藜總呋甾皂苷。綜上所述,本論文從蒺藜的水提物中分離出21個單體化合物,鑒定了19個單體化合物,其中3個為新化合物,3個為首次從蒺藜中分得的化合物;建立了蒺藜中8種螺甾型皂苷的SPE-HPLC-ELSD含量測定方法;研究了蒺藜總螺甾皂苷和蒺藜總呋甾皂苷的3種生物活性。本論文的研究結(jié)果為蒺藜藥效物質(zhì)的深入研究,蒺藜質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的完善以及蒺藜中甾體皂苷類化合物的應(yīng)用研究提供了新的科學(xué)依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R284;R285
【圖文】：

化合物 JL-19 的化學(xué)結(jié)構(gòu)式和 HMBC 相關(guān)譜見圖 2.6 和 2.7，核磁數(shù)據(jù)見表2.5�；衔� JL-18 和化合物 JL-19 均未見文獻報道，故確認化合物 JL-18 和化合物 JL-19 為新化合物。OOR2R1OHHOOHR1=-β-D-Gal4-1β-D-GlcR2=-β-D-Glc圖 2.4 化合物 JL-18 的結(jié)構(gòu)式

圖 2.7 化合物 JL-19 的 HMBC 相關(guān)表 2.5 JL-19 的13C NMR(150MHz)和1H NMR(600MHz)數(shù)據(jù)(δ,ppm,C5D5N)Position JL-19 Position JL-19cHcH123456789101112131445.870.684.934.144.828.232.434.754.537.021.640.241.256.42.09(m)4.47(m)3.72(m)1.36(m)0.96(m)1.03(m)1.16(m)1.12(dd)0.49(dd)-----1.30(m)1.00(m)-----0.90(s)3-O-Gal 1234564-Glc 12345626-O-Glc 12103.673.275.580.375.961.0107.376.178.872.478.963.2105.375.34.83(d ,J=7.8Hz)4.34(m)4.12(m)4.58(m)3.97(m)4.19(m)5.20(d ,J=7.8Hz)4.17(m)4.04(m)3.97(m)3.99(m)4.37 (m)4.63(d ,J=7.8Hz)3.71(m)

B.樣品溶液圖 3.1 化合物 JL-1～JL-8 的高效液相譜圖3.3 提取條件的考察為保證蒺藜干燥果實中化合物 JL-1~JL-8 能夠提取完全，實驗中以 JL-1~JL-8的色譜峰面積為考察指標(biāo)，對提取溶劑、提取方法、液料比和提取次數(shù)這四個影響因素進行了考察。3.3.1 提取溶劑考察取蒺藜干燥果實，粉碎，過 60 目篩，精密稱取 4 份，每份 5.0g。分別用 50mL 水、丙酮、甲醇、乙酸乙酯為提取溶劑進行提取，每份藥材加熱回流提取 1次，時間均為 2.0 h，合并提取液，減壓回收溶劑，加入適量蒸餾水溶解，過 AB-8SPE 固相萃取小柱，40%乙醇-水淋洗，再以 85%乙醇-水洗脫，回收溶劑至干，

【參考文獻】

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本文編號：2801722