發(fā)布時間：2020-08-23 13:32

【摘要】：目的:研究表明傳統(tǒng)藏藥紅景天苷分子極性較大而脂溶性較小,難以透過血腦屏障。為此,我們通過結(jié)構(gòu)改造合成了紅景天苷類似物(SalA-4g)。本文分析SalA-4g在大鼠各臟器中的分布以及藥代動力學(xué)；探討SalA-4g對氧糖剝奪(OGD)損傷海馬神經(jīng)元以及大腦中動脈栓塞(MCAO)模型鼠的腦保護作用及相關(guān)機制。通過研究為將其開發(fā)為一種神經(jīng)保護劑應(yīng)用于臨床防治缺血性腦血管病提供重要的理論基礎(chǔ)。方法:1.采用高效液相色譜(HPLC),大鼠單劑量靜脈注射SalA-4g,于不同時間點采集血漿和器官樣品,檢測其中SalA-4g的濃度。采用DAS軟件對血藥濃度-時間曲線進行統(tǒng)計矩擬合,得出系列藥代動力學(xué)參數(shù),分析SalA-4g在大鼠體內(nèi)代謝過程動態(tài)規(guī)律以及各臟器中的分布。2.采用線栓法建立大鼠MCAO損傷模型,通過mNSS神經(jīng)功能評分、腦梗死體積測定和TUNEL,分析SalA-4g對MCAO模型鼠腦損傷的保護作用;通過18-氟化脫氧葡萄糖正電子發(fā)射掃描(18FDG-PET/CT)檢查,觀察SalA-4g對MCAO鼠缺血腦組織葡萄糖攝取能力的影響;采用Western blot,觀察SalA-4g對MCAO鼠缺血腦組織葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白GLUT3表達的影響。3.體外培養(yǎng)胚胎17-18 dSD大鼠海馬神經(jīng)元,建立神經(jīng)元OGD損傷模型,采用MTT和Hoechst染色,觀察SalA-4g對OGD損傷海馬神經(jīng)元的保護作用;采用熒光標(biāo)記2-脫氧葡萄糖(2-NBDG)、免疫細胞化學(xué)染色,觀察SalA-4g對OGD損傷海馬神經(jīng)元葡萄糖攝取和神經(jīng)元GLUT3表達的影響,探討PKA/CREB/GLUT3通路是否參與SalA-4g增強OGD損傷海馬神經(jīng)元的葡萄糖攝取以及神經(jīng)保護作用。結(jié)果:1.SalA-4g檢測濃度的線性范圍為0.1～200 μg/ml(r2=0.9996),最低檢測限為0.1 μg/ml;藥動學(xué)參數(shù):SalA的T1/2(h)為 0.657,V(L/kg)為 7.376;SalA-4g 在體內(nèi)主要通過肝代謝、腎排泄,在肺、心、脾和腦中分布相對較少,但清除較慢。2.Sa1A-4g對OGD損傷的海馬神經(jīng)元具有顯著保護作用,能抑制細胞活力的下降和減少細胞凋亡的發(fā)生,并呈現(xiàn)劑量依賴效應(yīng),在濃度為200 μM時作用最佳,且保護效果優(yōu)于同等劑量的紅景天苷。3.Sa1A-4g對MCAO模型鼠具有顯著的腦保護作用,可以降低mNSS行為學(xué)評分,減輕腦梗死體積,降低模型鼠大腦皮層和海馬CA1區(qū)域的細胞凋亡率,且呈現(xiàn)劑量依賴效應(yīng),50 mg/kg Sa1A-4g的腦保護作用最佳,并且優(yōu)于同等劑量的紅景天苷。4.Sa1A-4g能顯著提高OGD損傷海馬神經(jīng)元的葡萄糖攝取能力,增強神經(jīng)元GLUT3的表達,并且這種變化呈劑量依賴性,濃度為200 μM作用最顯著,而紅景天苷對GLUT3表達的影響不大。5.Sa1A-4g能顯著提高MCAO模型鼠腦葡萄糖代謝水平,改善腦梗死區(qū)代謝恢復(fù)率,增強模型鼠皮層區(qū)和海馬區(qū)組織GLUT3的表達,在所觀察的劑量范圍內(nèi)呈現(xiàn)劑量依賴效應(yīng),50mg/kg Sa1A-4g作用最佳,而紅景天苷對缺血腦組織GLUT3表達無明顯影響。6.Sa1A-4 g能夠激活OGD損傷后的海馬神經(jīng)元CREB以及調(diào)節(jié)PKARⅡ的表達;采用H-89抑制PKA/CREB信號通路后,明顯拮抗了Sa1A-4g誘導(dǎo)的OGD損傷海馬神經(jīng)元GLUT3表達增強、葡萄糖攝取的增強以及神經(jīng)保護作用。結(jié)論:1.紅景天苷類似物Sa1A-4g經(jīng)結(jié)構(gòu)修飾改造后疏水性增加、親油性增高,與紅景天苷相比更易透過血腦屏障進入中樞而發(fā)揮腦保護作用。2.Sa1A-4g對大鼠海馬神經(jīng)元OGD損傷以及MCAO模型鼠腦缺血損傷具有顯著保護作用。3.Sa1A-4g的神經(jīng)保護作用與增強缺血腦組織的葡萄糖攝取能力相關(guān),PKA/CREB/GLUT3信號通路能通過增強葡萄糖攝取來參與Sa1A-4g的腦保護作用。
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R285.5
【圖文】：

圖３．邋ＳａｌＡ－４ｇ的色譜圖逡逑Ａ：空白血漿逡逑Ｂ：空白血i}＋ＳａｌＡ－４ｇ邋（１００邋｜ｊｇ／ｍｌ）逡逑Ｃ：給藥５邋ｍｉｎ后的血i}＃品逡逑Ｆｉｇ．３邋Ｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｖｅ邋ＳａｌＡ－４ｇ邋ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍｓ逡逑Ａ：邋Ｂｌａｎｋ邋ｒａｔ邋ｐｌａｓｍａ逡逑Ｂ：邋Ｂｌａｎｋ邋ｒａｔ邋ｐｌａｓｍａ邋ｓｐｉｋｅｄ邋ｗｉｔｈ邋ＳａｌＡ－４ｇ邋（１００邋｜ｘｇ／ｍｌ）逡逑Ｃ：邋Ｒａｔ邋ｐｌａｓｍａ邋ｓａｍｐｌｅ邋５邋ｍｉｎ邋ａｆｔｅｒ邋ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ邋ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ邋ｗｉｔｈ邋ＳａｌＡ－４ｇ邋（５０邋ｍｇ／ｋｇ）逡逑（三）精密度測定逡逑取空白血漿加入ＳａｌＡ－４ｇ標(biāo)準(zhǔn)品，分別配制低、中、高（１，１０，邋１０0Ｈｇ／ｍｌ）３濃度的ＳａｌＡ－４ｇ血漿樣品，按“２．邋２”生物樣品預(yù)處理方法處理，平行做５份，連續(xù)５逡逑

２．邋ＳａｌＡ－４ｇ對正常培養(yǎng)海馬神經(jīng)元活力的影響逡逑采用ＭＴＴ法觀察ＳａｌＡ－４ｇ對正常培養(yǎng)以及ＯＧＤ損傷海馬神經(jīng)元活力的影響。給逡逑予不同濃度ＳａｌＡ－４ｇ邋（８ｐＭ，４０＾ｉＭ，２００邋ｐＭ）處理海馬神經(jīng)元２４ｈ，邋ＭＴＴ檢測細逡逑胞活力結(jié)果發(fā)現(xiàn)，不同濃度的ＳａｌＡ－４ｇ對正常海馬神經(jīng)元活力無明顯影響（圖７）。逡逑２４逡逑

胞活力輕微增高，但是隨著ＯＧＤ損傷時間的延長，海馬神經(jīng)元活力逐漸下降，ＯＧＤ逡逑損傷６邋ｈ復(fù)氧復(fù)糖２４邋ｈ時，細胞活力下降為正常對照組的６５％左右，該損傷條件用于逡逑后續(xù)實驗的進行（圖８）。逡逑海馬神經(jīng)元采用ＯＧＤ處理６邋ｈ，復(fù)氧復(fù)糖２４邋ｈ，在復(fù)氧復(fù)糖的同時給予不同濃逡逑度ＳａｌＡ－４ｇ邋（８ｐＭ，４０ｐＭ，邋２００邋ＭＭ）孵育２４ｈ，檢測細胞活力。結(jié)果表明，ＯＧＤ逡逑損傷后海馬神經(jīng)元活力明顯下降，ＳａｌＡ￣４ｇ處理可有效拮抗ＯＧＤ損傷所引起的海馬逡逑神經(jīng)元活力的下降，在所觀察劑量范圍內(nèi)呈現(xiàn)劑量相關(guān)性，２００邋保護作用最明顯，逡逑且優(yōu)于２００邋ｐＭ紅景天苷（Ｓａｌ），見圖９。逡逑倒置相差顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)，正常對照組的海馬神經(jīng)元胞體透亮，細胞突起完整，逡逑相互交織成網(wǎng)；ＯＧＤ損傷組細胞胞體明顯皺縮，折光性下降，突起回縮或斷裂，部逡逑分細胞成團；給予不同濃度ＳａＩＡ－４ｇ處理后可顯著恢復(fù)神經(jīng)元形態(tài)

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 劉玉珍,鄭健,王力健,徐飛,鄭璐,張貴;反相高效液相色譜法測定復(fù)方紅景天心腦沖劑中紅景天苷的含量[J];中國新藥雜志;2000年03期

2 宋玉成,馬瀟,羅興平;野生與家種大花紅景天的質(zhì)量評價研究[J];中國藥事;2004年02期

3 常雪萍;常虹;;紅景天對臟器保護作用的研究進展[J];中國誤診學(xué)雜志;2010年14期

4 陳小明;徐超群;;紅景天中紅景天苷的提取工藝研究[J];華西藥學(xué)雜志;2010年03期

5 阮佳佳;林靈超;陳再潔;;紅景天及其制劑中紅景天苷的含量測定[J];山東中醫(yī)雜志;2013年05期

6 何寶佳;魏蔚;;不同產(chǎn)地紅景天中紅景天苷提取工藝研究[J];通化師范學(xué)院學(xué)報;2013年10期

7 錢彥叢,劉景東,戎文慧;薄層掃描法測定冀產(chǎn)紅景天中紅景天苷的含量[J];基層中藥雜志;2002年02期

8 黃萍,廖建,劉仲義;紅景天膠囊中紅景天苷的含量測定[J];華西藥學(xué)雜志;2003年02期

9 蔡鷹,張梅;紅景天膠囊中紅景天苷的含量測定[J];中國藥師;2003年07期

10 馬偉;趙昕;于濤;楊意;;高山紅景天中紅景天苷含量的生育期差異[J];中醫(yī)藥信息;2006年06期

相關(guān)會議論文 前10條

1 馬莉;蔡東聯(lián);王瑩;裴素萍;;紅景天苷對疲勞小鼠糖及脂肪代謝的影響[A];中國營養(yǎng)學(xué)會第12屆全國臨床營養(yǎng)學(xué)術(shù)會議資料匯編[C];2009年

2 李天奇;范維琥;李勇;羅心平;;紅景天苷對兔股動脈粥樣斑塊模型穩(wěn)定性的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會心血管病學(xué)分會第八次全國心血管病學(xué)術(shù)會議匯編[C];2006年

3 李天奇;李勇;范維琥;;紅景天和紅景天苷對兔股動脈粥樣斑塊內(nèi)新生血管及細胞外基質(zhì)代謝影響的比較[A];第八次全國中西醫(yī)結(jié)合心血管病學(xué)術(shù)會議論文集[C];2007年

4 林海泓;朱軍;施海明;羅心平;;紅景天苷對人骨髓間充質(zhì)干細胞增殖、分泌的影響[A];第八次全國中西醫(yī)結(jié)合心血管病學(xué)術(shù)會議論文集[C];2007年

5 李天奇;范維琥;李勇;羅心平;;紅景天苷對兔股動脈粥樣斑塊模型穩(wěn)定性的影響[A];第八次全國中西醫(yī)結(jié)合心血管病學(xué)術(shù)會議論文集[C];2007年

6 林海泓;朱軍;施海明;羅心平;;紅景天苷對人骨髓間充質(zhì)干細胞增殖、分泌的影響[A];第一屆全國中西醫(yī)結(jié)合心血管病中青年醫(yī)師論壇論文匯編[C];2008年

7 馬莉;蔡東聯(lián);王瑩;裴素萍;;紅景天苷對不同狀態(tài)下小鼠糖及脂肪代謝的影響[A];中國西部第六屆營養(yǎng)與健康學(xué)術(shù)會議論文集[C];2011年

8 陳金晶;申佳佳;毛根祥;李電東;王真;;紅景天苷干預(yù)衰老的體內(nèi)外作用及機制研究[A];第二屆中國藥理學(xué)會補益藥藥理專業(yè)委員會學(xué)術(shù)研討會論文匯編[C];2012年

9 張莉;魏平平;袁X;石峰;齊剛;;紅景天苷的來源、提取分離與合成[A];2007年全國生化與生物技術(shù)藥物學(xué)術(shù)年會論文集[C];2007年

10 李利群;張穎;林力;劉建勛;;紅景天苷在大鼠體內(nèi)生物利用度的研究[A];第九屆全國藥物和化學(xué)異物代謝學(xué)術(shù)會議論文集[C];2009年

相關(guān)重要報紙文章 前9條

1 司馬憲光 劉國順;青藏高原藥材珍品——紅景天[N];中國特產(chǎn)報;2002年

2 記者 李仲宏;新工藝提取紅景天苷[N];阿壩日報;2008年

3 繼寧;紅景天飲品通過部級鑒定[N];中國食品報;2010年

4 記者 劉正午;西藏大花紅景天低溫提取技術(shù)獲突破[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2010年

5 中國疾病預(yù)防控制中心營養(yǎng)與食品安全所 陳競邋曲寧 楊文婕;紅景天膠囊可提高缺氧耐受力[N];中國中醫(yī)藥報;2008年

6 記者 星子;我省從紅景天中成功提取活性成分[N];青海日報;2009年

7 記者 葉青;和藤醫(yī)藥首創(chuàng)低溫連續(xù)提取技術(shù)[N];廣東科技報;2010年

8 衣曉峰;紅景天藥用成分調(diào)控規(guī)律被揭開[N];中國醫(yī)藥報;2008年

9 鐘顯飛 蔣明德;四川實驗證實:紅景天苷可誘導(dǎo)HSC細胞凋亡[N];中國醫(yī)藥報;2005年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 于舒;紅景天苷類似物對腦缺血損傷的保護及機制研究[D];蘇州大學(xué);2017年

2 張新茹;紅景天苷在2型糖尿病小鼠中通過microRNA改善糖脂代謝的機制研究[D];吉林大學(xué);2016年

3 司沛沛;紅景天苷對海人藻酸致癇小鼠的神經(jīng)保護作用及其機制的探討[D];河北醫(yī)科大學(xué);2016年

4 賴文芳;紅景天苷對腦缺血再灌注損傷大鼠的保護作用及機制研究[D];福建中醫(yī)藥大學(xué);2016年

5 陳茹萱;中藥紅景天成分對TGF-β1誘導(dǎo)MRC-5細胞纖維化表型的干預(yù)[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2016年

6 陳昌貴;紅景天苷抑制肺動脈平滑肌細胞增殖及遷移的機制研究[D];武漢大學(xué);2014年

7 吳丹;紅景天苷抑制白蛋白跨腎小球內(nèi)皮細胞穿胞在改善糖尿病腎病蛋白尿中的作用與機制[D];華中科技大學(xué);2015年

8 張偉;勞力性熱射病大鼠線粒體損傷機制及紅景天苷的保護作用研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2016年

9 毛根祥;紅景天苷干預(yù)細胞衰老的分子機制及其防治骨質(zhì)疏松活性的研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2010年

10 邢莎莎;紅景天苷改善血管內(nèi)皮功能及其抗動脈粥樣硬化的作用與分子機制[D];華中科技大學(xué);2014年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 李宗e

本文編號：2801589