【摘要】：本論文以油橄欖葉降糖有效部位為研究對象,分別開展其對糖代謝關(guān)鍵酶α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶的抑制作用。在此基礎(chǔ)上,利用離線二維高速逆流色譜技術(shù)對油橄欖葉降糖有效部位中的主要有效成分進(jìn)行了分離制備,從中得到3個(gè)化合物。具體的研究內(nèi)容包括以下2個(gè)方面:1.將油橄欖葉降糖有效部位在BMKX-4大孔吸附樹脂柱上進(jìn)行吸附,依次用20%、40%、60%、80%乙醇梯度洗脫,得到A、B、C、D 4個(gè)組分,然后分別考察A、B、C、D這4個(gè)組分對α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶的抑制作用,并利用高效液相色譜法(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)對各組分中4個(gè)共有化合物羥基酪醇乙酰脂(X1)、橄欖苦苷(X2)、女貞苷(X3)、2″-epifraxamoside(X4)進(jìn)行分析,考察其含量與酶抑制活性的相關(guān)性。結(jié)果表明,組分A對α-葡萄糖苷酶的抑制作用最強(qiáng),組分C對α-淀粉酶的抑制作用最強(qiáng)。X1、X3與對α-葡萄糖苷酶的抑制率呈正相關(guān),X2、X4與抑制作用呈負(fù)相關(guān);X2、X4與對α-淀粉酶的抑制率呈正相關(guān),X1、X3與抑制作用呈負(fù)相關(guān)。驗(yàn)證了本課題組前期篩選得到的油橄欖葉降糖有效部位對糖代謝過程中的兩種關(guān)鍵酶均具有較好的抑制作用,其中X1、X3可能是抑制α-葡萄糖苷酶的主要活性成分,而X2、X4可能是抑制α-淀粉酶的主要活性成分。2.利用離線二維高速逆流色譜技術(shù),對油橄欖葉降糖有效部位中的主要有效成分進(jìn)行了分離制備的研究。首先,利用高速逆流色譜建立了一種快速分離制備油橄欖葉降糖活性部位中橄欖苦苷的方法。優(yōu)化的色譜條件為:正丁醇-乙酸乙酯-甲醇-水-氯仿(1:19:1:19:0.4,v/v)作為兩相溶劑系統(tǒng),上相作為固定相,下相作為流動相,轉(zhuǎn)速為900 rpm,同時(shí)考察了流速及進(jìn)樣量對橄欖苦苷分離度的影響,得出當(dāng)流速為1.5m L·min-1,進(jìn)樣量濃度為20 mg·m L-1時(shí),利用該方法,從油橄欖葉降糖有效部位中分離得到的橄欖苦苷,其純度達(dá)到90.5%,且可以進(jìn)行大量制備。其次,是將除去大量橄欖苦苷后所有的洗脫液(包括保留在柱色譜中的組分),優(yōu)化后選擇溶劑系統(tǒng)正丁醇-乙酸乙酯-水(1:2:3,v/v),上相作為固定相,下相作為流動相,轉(zhuǎn)速為900 rpm,流速為2.0 m L·min-1,進(jìn)樣量濃度為2 mg·mL-1。采用高速逆流色譜的雙洗脫模式,分離得到羥基酪醇和木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷2個(gè)化合物,其純度分別為95.3%和91.2%。
【學(xué)位授予單位】：甘肅中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R284
【圖文】：

圖 1-2 4 個(gè)組分在 232 nm 波長處的 HPLC 色譜圖3.小結(jié)與討論本節(jié)利用大孔吸附樹脂 BMKX-4，分別用不同比例的乙醇，將油橄欖葉降糖有效部位分為 4 個(gè)組分，并利用 HPLC 對 4 個(gè)組分進(jìn)行分析。由圖 1-2 可知：利用大孔吸附樹脂從油橄欖葉降糖有效部位分離得到的 A、B、C、D 4 個(gè)組分所含的化合物基本一致但是各個(gè)化合物的含量差異很大。

1-3 各樣品對兩種酶的抑制活性（a 為 α-葡萄糖苷酶，b 為 α-淀粉酶） 為 20%、40%、60%、80%的洗脫組分，E 為橄欖苦苷，以上濃度均為 2波糖，濃度為 5 mg·mL-1；與 F 組比較，*P<0.05；與 E 組比較，#P<0分析法步探究抑制 α-葡萄糖苷酶和 α-淀粉酶活性的物質(zhì)基礎(chǔ)，利用 HP物質(zhì)的分析檢測。各組分中所含的化合物差異較大，經(jīng)外標(biāo)法苷的含量依次為 19.50%，57.67%，52.96%，23.26%。在波長為面積歸一化法計(jì)算，選取了在色譜圖中分離度較好且峰面積個(gè)化合物進(jìn)行研究。本課題組前期已知 X1為羥基酪醇乙酰脂，貞苷，X4為 2″-epifraxamoside[31]。通過 HPLC 對 A、B、C、D4 為 C 組分的色譜圖，表 1-5 為 4 個(gè)峰在各個(gè)組分中的峰面積

圖 1-4 組分 C 的 HPLC 色譜圖將 X1、X2、X3、X4在樣品 A、B、C、D 中的峰面積值進(jìn)行均數(shù)化處理，用以衡量樣品中各共有峰所對應(yīng)的化學(xué)成分含量的變化情況，所得數(shù)據(jù)均進(jìn)行四舍五入保留四位小數(shù)。表 1-5 4 個(gè)共有化合物在各樣品中的峰面積及量化峰值化合物 部位 峰面積 量化峰值 化合物 部位 峰面積 量化峰值A(chǔ) 35.5 0.7175 A 7612.1 0.5085X1B 87.1 1.7605 X2B 22510.7 1.5036C 61.6 1.2451 C 20678.3 1.3812D 13.7 0.2769 D 9082.3 0.6067A 39.5 0.3169 A 648.1 0.4439X3B 260.4 2.0493 X4B 1945.4 1.3324C 176.2 1.3866 C 2225.3 1.5240D 32.2 0.2534 D 1021.7 0.6997

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本文編號：2801245