【摘要】：目的通過(guò)觀(guān)察骨痿康顆粒對(duì)大鼠外周血中白細(xì)胞計(jì)數(shù)、單個(gè)核細(xì)胞計(jì)數(shù)、CD34~+細(xì)胞含量及VEGF、TGF-β、PDGF細(xì)胞生長(zhǎng)因子表達(dá)量的影響,探討骨痿康顆粒對(duì)大鼠骨髓干細(xì)胞的動(dòng)員作用以及外周血細(xì)胞生長(zhǎng)因子的表達(dá)影響,為下一步運(yùn)用中藥動(dòng)員干細(xì)胞以及增加外周血細(xì)胞生長(zhǎng)因子含量來(lái)達(dá)到無(wú)創(chuàng)性的治療骨缺血壞死、骨缺損、骨不連等骨科疾病做前期的基礎(chǔ)研究。方法SD大鼠60只,隨機(jī)分為4組,每組15只。生理鹽水組:生理鹽水灌胃,同時(shí)皮下注射生理鹽水;骨痿康顆粒組:骨痿康顆粒稀釋劑灌胃,同時(shí)皮下注射生理鹽水;粒細(xì)胞集落刺激因子(granulocyte colony stimulating factor,G-CSF)組(G-CSF組):生理鹽水灌胃,同時(shí)皮下注射G-CSF;骨痿康顆粒+G-CSF(聯(lián)合用藥組):骨痿康顆粒稀釋劑灌胃,同時(shí)皮下注射G-CSF;連續(xù)用藥5天后,各組取大鼠外周血,檢測(cè)計(jì)數(shù)大鼠外周血中白細(xì)胞計(jì)數(shù)和單個(gè)核細(xì)胞數(shù)量,流式細(xì)胞儀檢測(cè)CD34~+細(xì)胞百分比,ELISA檢測(cè)外周血VEGF、TGF-β、PDGF含量。結(jié)果用藥5天后,生理鹽水組、骨痿康顆粒組、G-CSF組以及骨痿康顆粒+G-CSF組外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)分別為(7.47±0.40)×10~9/L、(7.76±0.41)×10~9/L、(19.81±0.66)×10~9/L、(20.01±0.58)×10~9/L,骨痿康顆粒組白細(xì)胞計(jì)數(shù)與生理鹽水組比較(P㧐0.01),G-CSF組白細(xì)胞計(jì)數(shù)與骨痿康顆粒+G-CSF組比較(P㧐0.01),G-CSF組以及骨痿康顆粒+G-CSF組外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)均高于生理鹽水組(P㩳0.01);生理鹽水組、骨痿康顆粒組、G-CSF組以及聯(lián)合用藥組外周血單個(gè)核細(xì)胞計(jì)數(shù)分別為(3.32±0.30)×10~9/L、(4.93±0.51)×10~9/L、(10.99±0.62)×10~9/L、(12.64±0.69)×10~9/L,其中,骨痿康顆粒組單個(gè)核細(xì)胞計(jì)數(shù)高于生理鹽水組(P㩳0.01),G-CSF組單個(gè)核細(xì)胞計(jì)數(shù)高于骨痿康顆粒組(P㩳0.01),聯(lián)合用藥組高于G-CSF組(P㩳0.01);骨痿康顆粒組、G-CSF組以及聯(lián)合用藥組CD34~+細(xì)胞百分比為(0.78±0.04)%、(3.26±0.07)%、(3.90±0.08)%,均高于生理鹽水組的(0.20±0.02)%(P㩳0.01),其中G-CSF組CD34~+細(xì)胞百分比高于骨痿康顆粒組(P㩳0.01),聯(lián)合用藥組CD34~+細(xì)胞百分比高于G-CSF組(P㩳0.01)。骨痿康顆粒組、G-CSF組和聯(lián)合用藥組的大鼠VEGF、TGF-β含量均高于生理鹽水組(P㩳0.01),其中G-CSF組VEGF、TGF-β含量高于骨痿康顆粒組(P㩳0.01),聯(lián)合用藥組VEGF、TGF-β含量高于G-CSF組(P㩳0.01)。各組大鼠PDGF含量比較,骨痿康顆粒組和聯(lián)合用藥組PDGF含量高于生理鹽水組(P㩳0.01),但是G-CSF組PDGF含量與生理鹽水組比較無(wú)差異(P㧐0.01)。結(jié)論中藥骨痿康顆粒對(duì)干細(xì)胞具有一定的動(dòng)員作用,同時(shí)能夠增加外周血VEGF、TGF-β、PDGF表達(dá)量,臨床上骨痿康顆粒治療骨缺血壞死等疾病的細(xì)胞學(xué)機(jī)制可能與此有關(guān)。骨痿康顆粒聯(lián)合G-CSF對(duì)干細(xì)胞的動(dòng)員效果最佳,并且能夠在動(dòng)員干細(xì)胞的同時(shí),顯著增加外周血中VEGF、TGF-β、PDGF含量。這提示我們?cè)诮窈蟮难芯恐?可以更多的嘗試將中藥作為干細(xì)胞動(dòng)員劑或輔助干細(xì)胞動(dòng)員,在增加外周血干細(xì)胞數(shù)量的同時(shí)增加外周血中細(xì)胞生長(zhǎng)因子的含量,為受損組織的修復(fù)提供充足的干細(xì)胞來(lái)源和生長(zhǎng)因子條件。實(shí)驗(yàn)證明利用中藥參與干細(xì)胞動(dòng)員治療骨科疾病在細(xì)胞學(xué)上具有可行性,具有研究意義。
【學(xué)位授予單位】：安徽中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類(lèi)號(hào)】：R285.5
【圖文】：

圖 1 分離的單個(gè)核細(xì)胞層Fig 1 The MNC layer was isolated2.4.3 流式細(xì)胞檢測(cè) CD34+細(xì)胞百分比① 100μL 的 BSA 加入單個(gè)核細(xì)胞（MNC）標(biāo)本中，室溫下放置 30min。② 30min 后，取 PE 直接標(biāo)記的抗大鼠 CD34 抗體 10μL 加入到 90μL 的 MNC提取液中，另一管中加入陰性對(duì)照試劑，每管再加入 2ml 紅細(xì)胞裂解液，室溫放置（20℃-30℃）30 min。③ 30min 后，再加入 2mlBSA，混勻，20℃下，1500r/min 離心 15min。離心之后，棄上清液，加入 500μL BSA，混勻。④ 可以 4℃臨時(shí)放置，同日上機(jī)檢測(cè)。應(yīng)用 BD 公司的 FACSCaIib 收集檢測(cè)處理過(guò)的 MNC，首先設(shè)定第一個(gè)門(mén)，選取單個(gè)核細(xì)胞，濾去雜質(zhì)，在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步選取 CD34 陽(yáng)性細(xì)胞，統(tǒng)計(jì)分析 CD34+百分比。

各組大鼠WBC計(jì)數(shù)Fig2ThecountofWBCineachgroup

17圖 3 各組大鼠 MNC 計(jì)數(shù)Fig3 The count of MNC in each group給藥 5 天后，WBC 計(jì)數(shù)統(tǒng)計(jì)分析比較發(fā)現(xiàn)：骨痿康顆粒組大鼠 WBC 計(jì)數(shù)與生理鹽水組比較，略有增長(zhǎng)，但分析比較（P㧐0.01）。G-CSF 組和聯(lián)合用藥組的WBC 均明顯高于生理鹽水組（P㩳0.01），說(shuō)明給予 G-CSF 皮下注射后，無(wú)論是單

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本文編號(hào)：2800511