發(fā)布時間：2020-08-18 20:54

【摘要】：目的:鮮藥是中醫(yī)臨床上傳統(tǒng)的特色用藥之一,具有源遠流長的歷史。石斛是傳統(tǒng)鮮藥,中醫(yī)認為石斛具有“生者優(yōu)良”的特點,講究“鮮品為上”�，F(xiàn)代研究也表明鮮石斛比干品具有更顯著的藥理活性,因此,2015版《中國藥典》將石斛飲片的干品和鮮品分開介紹。目前關于石斛的化學成分及藥理活性的研究多集中于石斛干品,缺乏鮮、干石斛在化學成分和功效活性上差異的系統(tǒng)深入研究,限制了鮮石斛的市場應用和產品開發(fā)。本論文從體內外抗氧化活性、多糖活性、多糖含量、多糖結構方面對鮮、干鐵皮石斛進行了系統(tǒng)研究,明確了鮮、干鐵皮石斛多糖成分及抗氧化活性差異的原因,初步闡明了鐵皮石斛抗氧化活性物質基礎,驗證了石斛“生者優(yōu)良”的科學內涵,為鐵皮石斛鮮藥的開發(fā)提供了理論依據。方法:本論文首先以DPPH·、ABTS~+·和·OH為指標,對鮮、干鐵皮石斛的體外抗氧化活性進行對比分析,在此基礎上,進一步通過構建CCl_4所致急性肝損傷小鼠模型,考察鮮、干鐵皮石斛對小鼠肝組織和血清中T-AOC、GSH、CAT、MDA和SOD生化指標的影響,探討鮮、干鐵皮石斛的體內抗氧化活性差異;制備得到鮮、干鐵皮石斛多糖,考察鮮、干鐵皮石斛多糖體內外抗氧化活性差異;為探究活性差異的原因,對鮮、干鐵皮石斛中的總多糖、甘露糖進行了含量測定,結合高效凝膠滲透色譜法和氣相色譜-液質聯(lián)用技術對多糖的分子量排布和單糖組成差異進行了比較分析。結果:1.相對于干鐵皮石斛,鮮品及其多糖具有更好的體外抗氧化活性鮮、干鐵皮石斛對DPPH·、ABTS~+·和·OH自由基都有較強的清除能力,且鮮品對各自由基的最大清除率分別達到了52.56%、61.24%、28.71%,干品的的最大清除率僅為41.34%、48.01%、15.84%,鮮品的抗氧能力顯著強于其干品(p0.05);提取分離得到鮮、干鐵皮石斛多糖,體外抗氧化結果表明:鮮多糖對自由基的最大清除率分別為45.7%、42.4%、28.71%,干多糖的最大清除率分別為40.09%、35.13%、21.98%,鮮鐵皮石斛多糖的抗氧化能力顯著強于其干品多糖(p0.05)。2.鮮鐵皮石斛及其多糖體內抗氧化活性優(yōu)于干品構建CCl_4所致急性肝損傷小鼠模型,考察鮮、干鐵皮石斛對小鼠血液及肝臟T-AOC、GSH、CAT、MDA和SOD生化指標的影響,探討鮮、干鐵皮石斛的體內抗氧化活性差異。結果表明:鮮、干鐵皮石斛均具有提高由CCl_4所致肝損傷模型小鼠肝組織和血清中的T-AOC、GSH、CAT和SOD水平,和降低MDA水平的能力,且鐵皮石斛鮮品明顯優(yōu)于其干品(p0.05);對鮮、干鐵皮石斛多糖體內抗氧化研究結果表明,鮮多糖的體內抗氧化作用也明顯優(yōu)于(p0.05)干多糖。3.鮮鐵皮石斛多糖、甘露糖含量均高于干品,兩者多糖組成存在顯著差異為探究活性差異產生的原因,對鮮、干鐵皮石斛中多糖和甘露糖進行了含量測定,鐵皮石斛鮮品中多糖和甘露糖含量分別為512 mg·g~(-1)、489.5 mg·g~(-1),均明顯高于其干品(348.7 mg·g~(-1)和291.3 mg·g~(-1))(p0.05);HPLC-GPC結果顯示,鮮石斛多糖的分子量為1572 KDa,且排布較均一,而干多糖被降解成了三個不同分子量的多糖片段,分別為1572 KDa、583 KDa和8 KDa;GC-MS結果表明,鮮、干石斛多糖的單糖組成成分相同,但是單糖相對含量的比重存在明顯的差異。鮮石斛多糖中葡萄糖、甘露糖、鼠李糖的相對含量分別為1.000、0.830和0.008,而干多糖中三者的相對含量分別為0.719、1.000和0.001。結論:本研究表明,鮮鐵皮石斛的體內外抗氧化活性均優(yōu)于干品,具有顯著性差異;活性差異原因主要有兩個方面:一是鐵皮石斛鮮藥中多糖的含量明顯高于干品;二是鐵皮石斛在加工過程中多糖結構發(fā)生了改變,造成其活性降低。
【學位授予單位】：安徽中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R284
【圖文】：

第一章 鮮、干鐵皮石斛及多糖體外抗氧化活性研究圍內，隨著樣品濃度增大，清除作用也逐漸增強，且都是呈線性關系的（R98）。由圖可知，在 DPPH·自由基清除方面，VitC 的作用明顯強于（p < 0.0O 和 DDO 樣品，最大清除率高達 95%。并且，F(xiàn)DO 和 DDO 對 DPPH·自由除作用相比較下，F(xiàn)DO 的最大清除率達到了 52.56%；而 DDO 在相同濃度下除率只有 41.34%。所以，本實驗結果表明，在清除 DPPH·自由基能力方面O 優(yōu)于（p < 0.05）DDO。

圖 2-2 FDO 和 DDO 對 ABTS·+自由基清除活性的影響(x s)Fig2-2 The scavenging effects of FDO and DDO onABTS free radical4.1.3 FDO 和 DDO 對·OH 自由基清除的能力比較·OH 自由基是由生物機體產生的高活性、毒性強的一種自由基，對生物大子、細胞等具有極大的損傷作用，·OH 自由基的清除能力是常見的評價和衡量氧化物質的抗氧化能力強弱的重要指標之一。如圖 2-3 所示，F(xiàn)DO 和 DDO 對·O自由基都具有較強的清除能力，但是清除作用明顯低于 VitC。且 FDO 的清除用顯著高于（p < 0.05）DDO。所以，本實驗的結果表明，在·OH 自由基清除用方面，F(xiàn)DO 優(yōu)于 DDO。

圖 2-3 FDO 和 DDO 對·OH 自由基清除活性的影響(x s)Fig2-3 The scavenging effects of FDO and DDO on hydroxyl free radical4.2 鮮、干鐵皮石斛多糖體外抗氧化能力的比較4.2.1 FDOP 和 DDOP 對 DPPH·自由基清除的能力比較圖 2-4 結果顯示，在一定的濃度范圍內，F(xiàn)DOP 和 DDOP 樣品對 DPPH·自由基都有一定的清除作用，清除效率隨著濃度的增大逐漸增強，但是在相同濃度下，清除效果存在一定的差異，且清除能力均都低于 VitC。在對 DPPH·自由基清除的能力方面的比較，F(xiàn)DOP 的自由基清除率在 33.72-45.70%，而 DDOP 的清除率僅在 30.24-40.10%。因此，本試驗結果表明，F(xiàn)DOP 對 DPPH·自由基清除的能力強于 DDOP（p < 0.05）。

【參考文獻】

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本文編號：2796705