【摘要】：目的:鮮藥是中醫(yī)臨床上傳統(tǒng)的特色用藥之一,具有源遠流長的歷史。石斛是傳統(tǒng)鮮藥,中醫(yī)認為石斛具有“生者優(yōu)良”的特點,講究“鮮品為上”�，F(xiàn)代研究也表明鮮石斛比干品具有更顯著的藥理活性,因此,2015版《中國藥典》將石斛飲片的干品和鮮品分開介紹。目前關(guān)于石斛的化學(xué)成分及藥理活性的研究多集中于石斛干品,缺乏鮮、干石斛在化學(xué)成分和功效活性上差異的系統(tǒng)深入研究,限制了鮮石斛的市場應(yīng)用和產(chǎn)品開發(fā)。本論文從體內(nèi)外抗氧化活性、多糖活性、多糖含量、多糖結(jié)構(gòu)方面對鮮、干鐵皮石斛進行了系統(tǒng)研究,明確了鮮、干鐵皮石斛多糖成分及抗氧化活性差異的原因,初步闡明了鐵皮石斛抗氧化活性物質(zhì)基礎(chǔ),驗證了石斛“生者優(yōu)良”的科學(xué)內(nèi)涵,為鐵皮石斛鮮藥的開發(fā)提供了理論依據(jù)。方法:本論文首先以DPPH·、ABTS~+·和·OH為指標,對鮮、干鐵皮石斛的體外抗氧化活性進行對比分析,在此基礎(chǔ)上,進一步通過構(gòu)建CCl_4所致急性肝損傷小鼠模型,考察鮮、干鐵皮石斛對小鼠肝組織和血清中T-AOC、GSH、CAT、MDA和SOD生化指標的影響,探討鮮、干鐵皮石斛的體內(nèi)抗氧化活性差異;制備得到鮮、干鐵皮石斛多糖,考察鮮、干鐵皮石斛多糖體內(nèi)外抗氧化活性差異;為探究活性差異的原因,對鮮、干鐵皮石斛中的總多糖、甘露糖進行了含量測定,結(jié)合高效凝膠滲透色譜法和氣相色譜-液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)對多糖的分子量排布和單糖組成差異進行了比較分析。結(jié)果:1.相對于干鐵皮石斛,鮮品及其多糖具有更好的體外抗氧化活性鮮、干鐵皮石斛對DPPH·、ABTS~+·和·OH自由基都有較強的清除能力,且鮮品對各自由基的最大清除率分別達到了52.56%、61.24%、28.71%,干品的的最大清除率僅為41.34%、48.01%、15.84%,鮮品的抗氧能力顯著強于其干品(p0.05);提取分離得到鮮、干鐵皮石斛多糖,體外抗氧化結(jié)果表明:鮮多糖對自由基的最大清除率分別為45.7%、42.4%、28.71%,干多糖的最大清除率分別為40.09%、35.13%、21.98%,鮮鐵皮石斛多糖的抗氧化能力顯著強于其干品多糖(p0.05)。2.鮮鐵皮石斛及其多糖體內(nèi)抗氧化活性優(yōu)于干品構(gòu)建CCl_4所致急性肝損傷小鼠模型,考察鮮、干鐵皮石斛對小鼠血液及肝臟T-AOC、GSH、CAT、MDA和SOD生化指標的影響,探討鮮、干鐵皮石斛的體內(nèi)抗氧化活性差異。結(jié)果表明:鮮、干鐵皮石斛均具有提高由CCl_4所致肝損傷模型小鼠肝組織和血清中的T-AOC、GSH、CAT和SOD水平,和降低MDA水平的能力,且鐵皮石斛鮮品明顯優(yōu)于其干品(p0.05);對鮮、干鐵皮石斛多糖體內(nèi)抗氧化研究結(jié)果表明,鮮多糖的體內(nèi)抗氧化作用也明顯優(yōu)于(p0.05)干多糖。3.鮮鐵皮石斛多糖、甘露糖含量均高于干品,兩者多糖組成存在顯著差異為探究活性差異產(chǎn)生的原因,對鮮、干鐵皮石斛中多糖和甘露糖進行了含量測定,鐵皮石斛鮮品中多糖和甘露糖含量分別為512 mg·g~(-1)、489.5 mg·g~(-1),均明顯高于其干品(348.7 mg·g~(-1)和291.3 mg·g~(-1))(p0.05);HPLC-GPC結(jié)果顯示,鮮石斛多糖的分子量為1572 KDa,且排布較均一,而干多糖被降解成了三個不同分子量的多糖片段,分別為1572 KDa、583 KDa和8 KDa;GC-MS結(jié)果表明,鮮、干石斛多糖的單糖組成成分相同,但是單糖相對含量的比重存在明顯的差異。鮮石斛多糖中葡萄糖、甘露糖、鼠李糖的相對含量分別為1.000、0.830和0.008,而干多糖中三者的相對含量分別為0.719、1.000和0.001。結(jié)論:本研究表明,鮮鐵皮石斛的體內(nèi)外抗氧化活性均優(yōu)于干品,具有顯著性差異;活性差異原因主要有兩個方面:一是鐵皮石斛鮮藥中多糖的含量明顯高于干品;二是鐵皮石斛在加工過程中多糖結(jié)構(gòu)發(fā)生了改變,造成其活性降低。
【學(xué)位授予單位】：安徽中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R284
【圖文】：

第一章 鮮、干鐵皮石斛及多糖體外抗氧化活性研究圍內(nèi)，隨著樣品濃度增大，清除作用也逐漸增強，且都是呈線性關(guān)系的（R98）。由圖可知，在 DPPH·自由基清除方面，VitC 的作用明顯強于（p < 0.0O 和 DDO 樣品，最大清除率高達 95%。并且，F(xiàn)DO 和 DDO 對 DPPH·自由除作用相比較下，F(xiàn)DO 的最大清除率達到了 52.56%；而 DDO 在相同濃度下除率只有 41.34%。所以，本實驗結(jié)果表明，在清除 DPPH·自由基能力方面O 優(yōu)于（p < 0.05）DDO。

圖 2-2 FDO 和 DDO 對 ABTS·+自由基清除活性的影響(x s)Fig2-2 The scavenging effects of FDO and DDO onABTS free radical4.1.3 FDO 和 DDO 對·OH 自由基清除的能力比較·OH 自由基是由生物機體產(chǎn)生的高活性、毒性強的一種自由基，對生物大子、細胞等具有極大的損傷作用，·OH 自由基的清除能力是常見的評價和衡量氧化物質(zhì)的抗氧化能力強弱的重要指標之一。如圖 2-3 所示，F(xiàn)DO 和 DDO 對·O自由基都具有較強的清除能力，但是清除作用明顯低于 VitC。且 FDO 的清除用顯著高于（p < 0.05）DDO。所以，本實驗的結(jié)果表明，在·OH 自由基清除用方面，F(xiàn)DO 優(yōu)于 DDO。

圖 2-3 FDO 和 DDO 對·OH 自由基清除活性的影響(x s)Fig2-3 The scavenging effects of FDO and DDO on hydroxyl free radical4.2 鮮、干鐵皮石斛多糖體外抗氧化能力的比較4.2.1 FDOP 和 DDOP 對 DPPH·自由基清除的能力比較圖 2-4 結(jié)果顯示，在一定的濃度范圍內(nèi)，F(xiàn)DOP 和 DDOP 樣品對 DPPH·自由基都有一定的清除作用，清除效率隨著濃度的增大逐漸增強，但是在相同濃度下，清除效果存在一定的差異，且清除能力均都低于 VitC。在對 DPPH·自由基清除的能力方面的比較，F(xiàn)DOP 的自由基清除率在 33.72-45.70%，而 DDOP 的清除率僅在 30.24-40.10%。因此，本試驗結(jié)果表明，F(xiàn)DOP 對 DPPH·自由基清除的能力強于 DDOP（p < 0.05）。

【參考文獻】

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本文編號：2796705