【摘要】：目的:通過觀察具有益氣養(yǎng)陰、活血化痰功效的通絡(luò)糖泰方對高糖培養(yǎng)SD大鼠施萬細(xì)胞(Schwann Cells,SCs)增殖和分化的影響,從髓鞘再生修復(fù)的角度探討通絡(luò)糖泰治療糖尿病周圍神經(jīng)病變的可能機(jī)理,為臨床用藥提供一定的理論依據(jù)。方法:1.用新生3-5天SD大鼠坐骨神經(jīng)組織,進(jìn)行體外原代培養(yǎng)SCs,用S-100免疫熒光鑒定其純度。2.用CCK-8法檢測50mmol/L(mM)的葡萄糖培養(yǎng)組分別在24h、48h、72h、96h的SCs增殖;實時熒光定量PCR法檢測50mM葡萄糖培養(yǎng)組分別在24h、48h、72h的SCs髓鞘調(diào)控基因P0、MAG、krox-20 mRNA表達(dá)。3.CCK-8法檢測高糖含極低(2.5%)、低(5%)、中(10%)、高(20%)濃度通絡(luò)糖泰血清培養(yǎng)組分別在24h、48h、72h、96h的SCs增殖;實時熒光定量PCR法檢測高糖含極低(2.5%)、低(5%)、中(10%)、高(20%)濃度通絡(luò)糖泰血清培養(yǎng)組分別在24h、48h、72h的SCs髓鞘調(diào)控基因P0、MAG、krox-20 m RNA表達(dá)。結(jié)果:1.S-100免疫熒光鑒定SCs的純度達(dá)94.4%,可確保后期實驗數(shù)據(jù)可靠。2.CCK-8法檢測結(jié)果證實:與對照培養(yǎng)組相比,50mM葡萄糖培養(yǎng)組分別在24h、48h、72h、96h的SCs增殖下降,且具有時間相關(guān)性(隨時間的增加,細(xì)胞增殖逐漸下降),在72h差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01),且該趨勢可維持至96h。與高糖培養(yǎng)組相比,高糖含極低(2.5%)、低(5%)、中(10%)濃度通絡(luò)糖泰血清培養(yǎng)組分別在24h、48h、72h、96h的SCs增殖上升,在72h差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01),該趨勢可持續(xù)至96h。與高糖培養(yǎng)組相比,高糖含高(20%)濃度通絡(luò)糖泰血清培養(yǎng)組在24h、48h、72h、96h的SCs增殖下降,該差異在48h具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01),且該趨勢可維持至72h、96h。3.實時熒光定量PCR檢測結(jié)果證實:與對照培養(yǎng)組相比,50mM葡萄糖培養(yǎng)組分別在24h、48h、72h的SCs髓鞘調(diào)控基因P0、MAG、Krox-20 mRNA表達(dá)值均下調(diào),但MAG mRNA表達(dá)的差異在48h具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01);Krox-20、P0 mRNA表達(dá)的差異在48h、72h均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)。與高糖培養(yǎng)組相比,高糖含極低(2.5%)、低(5%)、中(10%)濃度通絡(luò)糖泰血清培養(yǎng)組分別在24h、48h、72h的SCs髓鞘調(diào)控基因P0、MAG、Krox-20 mRNA表達(dá)均上調(diào),其中高糖含低(5%)、中(10%)濃度通絡(luò)糖泰血清培養(yǎng)組SCs Krox-20、P0 mRNA表達(dá)的差異在48h、72h具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),而高糖含中(10%)濃度通絡(luò)糖泰血清培養(yǎng)組SCs MAG m RNA表達(dá)的差異在48h具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。與高糖培養(yǎng)組相比,高糖含高(20%)濃度通絡(luò)糖泰血清培養(yǎng)組分別在24h、48h、72h的SCs P0、MAG、Krox-20 mRNA表達(dá)的差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:1.本實驗體外原代培養(yǎng)SCs的方案可行。2.高糖可使SCs增殖及髓鞘調(diào)控基因P0、MAG、Krox-20 mRNA表達(dá)下調(diào),即高糖可抑制SCs增殖及成髓化。3.通絡(luò)糖泰可改善高糖對SCs增殖及成髓化的抑制作用,促使SCs增殖及髓鞘調(diào)控基因P0、MAG、Krox-20 mRNA表達(dá)上調(diào),即通絡(luò)糖泰可促進(jìn)SCs增殖及成髓化,其可能的機(jī)制與通絡(luò)糖泰上調(diào)IGF-I m RNA表達(dá)相關(guān),進(jìn)而改善DPN髓鞘再生障礙的病理特征,防治DPN。
【學(xué)位授予單位】：成都中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R285.5
【圖文】：

β-actin擴(kuò)增曲線

β-actin溶解曲線

BAX擴(kuò)增曲線

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2796184