【摘要】：目的:研究人參皂苷Rd對兩種人胃癌SGC-7901和MKN-45細胞增殖及凋亡的影響,并初步探討其作用機制。方法:1.采用MTT法,觀察GS-Rd對于人胃癌細胞SGC-7901和MKN-45在不同濃度和不同作用時間下對其細胞增殖的影響;2.利用平板克隆法驗證人胃癌細胞在不同濃度GS-Rd的干預(yù)下對于細胞集落形成的影響;3.流式細胞術(shù)檢測GS-Rd在不同濃度不同時間段內(nèi)對于兩種人胃癌細胞凋亡率和細胞周期的影響;4.Western blot法檢測GS-Rd對于人胃癌SGC-7901和MKN-45細胞系凋亡相關(guān)蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3和Caspase-9以及周期重要蛋白Cyclin D1的表達情況。結(jié)果:1.對人胃癌細胞SGC-7901和MKN-45給與濃度為40、80、120、160、200μg/mL的人參皂苷Rd作用不同的時間(24 h、48 h、72 h)之后發(fā)現(xiàn),人參皂苷Rd在不同濃度不同的時間段內(nèi)對人胃癌細胞SGC-7901和MKN-45均有抑制作用,且隨著給藥濃度的增加和作用時間的延長其抑制效果也明顯的增強,具有明顯的時間-劑量依賴性,48 h的IC_(50)是SGC-7901為86.963±0.230μg/mL,MKN-45為71.698±2.162μg/mL,在72 h時GS-Rd對于兩種細胞的抑制率分別達到最高;2.利用平板克隆法檢測GS-Rd對人胃癌細胞增殖的影響后發(fā)現(xiàn):Rd對兩種胃癌細胞集落的形成均有明顯的抑制作用,與Control組相比,給藥組克隆的體積和數(shù)量隨Rd濃度升高而逐漸減少,具有劑量依賴性;3.流式細胞術(shù)檢測結(jié)果顯示GS-Rd對人胃癌細胞SGC-7901和MKN-45凋亡具有較明顯的促進作用,凋亡以晚凋為主,與Control組相比,兩種細胞的凋亡率均逐漸升高,具有時間-劑量依賴性;4.細胞周期檢測結(jié)果顯示GS-Rd作用于人胃癌細胞48 h后G0/G1期的比率上升,而S期和M期的比率變化沒有顯著趨勢。5.Western blot法檢測結(jié)果顯示凋亡相關(guān)蛋白Bax的表達水平升高、Bcl-2表達水平下降、Caspase-3和Caspase-9表達水平都升高,而周期蛋白cyclin D1的表達水平下降。結(jié)論:實驗結(jié)果表明:人參皂苷Rd對人胃癌細胞SGC-7901和MKN-45都具有較為明顯的抑制作用,具有顯著的時間-劑量依賴性;Rd可促進胃癌細胞的凋亡,并可能通過阻滯細胞周期于G1期來抑制增殖,其作用機制可能是通過上調(diào)促凋亡蛋白Bax的表達,降低凋亡抑制蛋白Bcl-2的表達,降低Bcl-2/Bax的比率,進而調(diào)控下游蛋白分子Caspase家族中Caspase-3的活化,激活凋亡受體Caspase-9的表達,使細胞發(fā)生凋亡。
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5
【圖文】：

大學(xué)碩士學(xué)位論文 人參皂苷 Rd 對胃癌細胞增殖和凋亡的影響及分子 平板克隆法分析 GS-Rd 對人胃癌細胞 SGC-7901 和 MKN-45 細胞增殖的平板克隆試驗結(jié)果顯示，兩種胃癌細胞陰性組和給藥組的細胞克隆形成顯的差異，給藥組的細胞集落數(shù)明顯要小于陰性組的集落數(shù)，且集落的顯的小于陰性組；在給藥組之間，隨著藥物濃度的增加，其集落的數(shù)量著減少和縮小，呈現(xiàn)出明顯的劑量依賴性，如圖 3-3，實驗組與對照組著性差異（P < 0.05），各實驗組之間比較也有顯著性差異（P < 0.05），察到 GS-Rd 對胃癌 MKN-45 細胞克隆數(shù)的影響最大，如圖 3-4 和圖 3-5

人參皂苷 Rd 對胃癌細胞增殖和凋亡的癌細胞 SGC-7901 和 MKN-45 相關(guān)蛋白表達的影響C-7901 和 MKN-45 細胞中 Bcl-2 家族蛋白的影響 3-11，Western Blot 檢測結(jié)果顯示，和 Control 組相比KN-45 和 SGC-7901 細胞中 Bax 的相對表達量顯著少，Bcl-2/Bax的比率隨Rd濃度的增加而減少如（表6顯著性（P＜0.05），濃度越高顯著性越大。

顯著性（P＜0.05），濃度越高顯著性越大。Rd對人胃癌細胞MKN-45中Bax和Bcl-2表達量的影響（Me：*P ＜ 0.05，**P ＜ 0.01，***P ＜ 0.001

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本文編號：2791041