【摘要】：許多研究表明,多糖作為一類重要的生物活性大分子,具有多種功能活性,例如抗氧化,抗腫瘤,降血糖以及提高機(jī)體免疫力等。對(duì)多糖進(jìn)行特定的修飾,可以極大提高多糖的生物學(xué)活性。本實(shí)驗(yàn)室的前期工作已經(jīng)證明,硫酸化馬尾松花粉多糖SPPM60可以顯著抑制肝癌細(xì)胞HepG2的增殖,而未硫酸化的多糖PPM60則對(duì)HepG2的增殖無(wú)顯著性影響。此外,SPPM60可以顯著降低HepG2胞內(nèi)鈣離子濃度,而PPM60則對(duì)[Ca~(2+)]i無(wú)顯著性影響。大量實(shí)驗(yàn)表明,用適當(dāng)?shù)姆椒▽?duì)多糖進(jìn)行降解,可以提高多糖的生物活性。目前,鮮有對(duì)馬尾松花粉多糖的降解以及降解后多糖構(gòu)效關(guān)系等方面的研究。因此本實(shí)驗(yàn)在結(jié)合實(shí)驗(yàn)室前期工作的基礎(chǔ)上,對(duì)馬尾松花粉多糖組分進(jìn)行降解,并通過(guò)細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)和NMR技術(shù)探究降解后多糖與未降解時(shí)相比構(gòu)效關(guān)系的不同。實(shí)驗(yàn)主要分為以下幾部分內(nèi)容:一、采用水煮醇沉法從破壁馬尾松花粉中提取多糖,并采用三氯乙酸法除去雜蛋白,用TOYOPEARL HW-65S中壓凝膠柱層析對(duì)80%乙醇沉淀的多糖進(jìn)行分離純化,多次重復(fù)得到較為均一多糖組分,將其命名為PPM80-B。采用高效凝膠色譜法對(duì)多糖組分PPM80-B進(jìn)行相對(duì)分子量的測(cè)定,結(jié)果測(cè)得PPM80-B的相對(duì)分子量為317.8K。二、采用酸解法對(duì)松花粉多糖PPM80-B進(jìn)行降解,得到降解后的低分子量多糖組分,命名為DPPM80-B。在與實(shí)驗(yàn)一相同的色譜條件下對(duì)DPPM80-B進(jìn)行相對(duì)分子量的測(cè)定,測(cè)得其分子量為3.131K,表明降解是成功的。采用氯磺酸-吡啶法分別對(duì)PPM80-B和DPPM80-B進(jìn)行硫酸酯化修飾,得到酯化后多糖,并分別命名為SPPM80-B和DSPPM80-B。采用氯化鋇-明膠比濁法分別對(duì)SPPM80-B和DSPPM80-B進(jìn)行硫酸根取代度的測(cè)定,結(jié)果測(cè)得兩者的取代度分別為1.08和1.26。三、MTT法分別探究四種多糖(PPM80、SPPM80、DPPM80和DSPPM80)對(duì)肝癌細(xì)胞HepG2增殖的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,SPPM80和DSPPM80對(duì)HepG2II的增殖具有抑制作用,且具有時(shí)間和劑量依賴性。SPPM80對(duì)HepG2增殖的抑制作用要強(qiáng)于DSPPM80。200μg/m L作用72h SPPM80對(duì)HepG2的抑制率達(dá)到31.47%,而相同條件下DSPPM80對(duì)HepG2的抑制率則為15.38%。PPM80和DPPM80對(duì)HepG2的增殖沒(méi)有顯著地影響。四、應(yīng)用fura-2探針采用雙波長(zhǎng)熒光法測(cè)定四種多糖(PPM80、SPPM80、DPPM80和DSPPM80)對(duì)肝癌細(xì)胞HepG2胞內(nèi)鈣離子濃度的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,SPPM80和DSPPM80可以降低HepG2胞內(nèi)鈣離子濃度,且SPPM80的作用效果更加顯著。PPM80和DPPM80對(duì)HepG2胞內(nèi)鈣離子濃度沒(méi)有顯著地影響。五、采用核磁共振波譜法對(duì)松花粉多糖的結(jié)構(gòu)進(jìn)行解析,主要從~1HNMR(氫譜)和~(13)CNMR(碳譜)兩方面進(jìn)行考察。結(jié)果顯示,構(gòu)成該多糖的單糖以吡喃環(huán)的形式存在,且該多糖是一種中性多糖,不含GalN殘基,可能含有乙�；屑谆鶜浠虬被侵杏贜-乙酰氨基中的甲基氫,有C-6脫氧糖甲基的存在。綜上所述,本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明馬尾松花粉硫酸酯化多糖可以抑制肝癌細(xì)胞HepG2的增殖,且未降解的多糖組分對(duì)HepG2增殖的抑制作用要強(qiáng)于降解后的多糖組分。另外,松花粉硫酸酯化多糖可以顯著降低HepG2胞內(nèi)鈣離子濃度,而這也可能是松花粉硫酸酯化多糖調(diào)節(jié)HepG2細(xì)胞活性的一種方式。
【學(xué)位授予單位】：山東師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R284;R285
【圖文】：

圖 2-1 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.2-1 standard curve of glucose通過(guò)以上標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算出 PPM80 組分中的多糖含量是 46.7%。4.3PPM80-B 組分相對(duì)分子量的測(cè)定利用 excel 軟件，以右旋糖酐標(biāo)準(zhǔn)品相對(duì)分子量的對(duì)數(shù)值為縱坐標(biāo)，相應(yīng)洗脫峰的保留時(shí)間為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性擬合，得到右旋糖酐標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖2-2所示。

圖 2-3 PPM80-C 高效凝膠色譜圖Fig.2-3 HPGPC chromatogram of PPM80-B重復(fù)進(jìn)樣三次，記錄三次洗脫峰的保留時(shí)間，計(jì)算平均值，然后代入標(biāo)準(zhǔn)曲線公式 y=-0.2582x+11.757，計(jì)算得出 PPM80-B 的相對(duì)分子量為 317.76K。5. 討論水提醇沉法是實(shí)驗(yàn)室提取植物多糖的經(jīng)典方法。該方法提取條件比較溫和，成本較低，而且避免酸、堿或有機(jī)溶劑的污染，但是操作費(fèi)時(shí)費(fèi)力，且多糖得率不高。根據(jù)多糖在不同濃度的乙醇中溶解度不同的原理，本實(shí)驗(yàn)通過(guò)乙醇分級(jí)沉淀得到了四種不同的多糖組分。因 80%乙醇沉淀得到的多糖質(zhì)量最高，考慮到后續(xù)試驗(yàn)的多糖用量，故本實(shí)驗(yàn)采用 80%乙醇沉淀的多糖組分進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。水提醇沉法得到的粗多糖中除多糖組分外還會(huì)含有一些雜質(zhì)，如一些雜質(zhì)離子、單糖、小分子寡糖和蛋白質(zhì)。為了保證后續(xù)試驗(yàn)的精確性，需要通過(guò)適當(dāng)?shù)?

山東師范大學(xué)碩士學(xué)位論文在第二章實(shí)驗(yàn)的色譜條件下，將配置好的 DPPM80-B 糖溶液注入高效液相色譜儀，得到如下凝膠色譜圖（圖 3-1）4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果4.1 DPPM80-B 相對(duì)分子量的測(cè)定結(jié)果

【參考文獻(xiàn)】

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2 馬玉;呂建云;孫豐霞;耿越;楊長(zhǎng)軍;王桐;;馬尾松花粉提取物對(duì)小鼠前列腺肥大的預(yù)防作用[J];食品安全質(zhì)量檢測(cè)學(xué)報(bào);2016年08期

3 時(shí)瀟麗;姚春霞;林曉;沈嵐;馮怡;;多糖藥物應(yīng)用與研究進(jìn)展[J];中國(guó)新藥雜志;2014年09期

4 朱科學(xué);聶少平;宋丹;李川;林素麗;謝明勇;;黑靈芝多糖對(duì)Ⅱ型糖尿病大鼠血糖、血脂及腸系膜上動(dòng)脈病變改善作用[J];食品科學(xué);2013年23期

5 羅艷紅;于沛濤;陳源紅;;松花粉對(duì)肝癌細(xì)胞株HepG2增殖和凋亡的影響[J];廣東醫(yī)學(xué);2013年09期

6 徐建;李敬東;李強(qiáng);田云鴻;李德新;莫洪偉;楊剛;堯洋;王宇;;肝臟良性腫瘤的臨床診治分析[J];中國(guó)普外基礎(chǔ)與臨床雜志;2013年03期

7 王恒禹;劉s

本文編號(hào)：2790622