【摘要】：隨著城市化進程的推進,人們生活愈加便捷、物質(zhì)生活極大豐富,但同時也帶來了一系列負(fù)面影響,例如高熱量飲食、缺乏運動、熬夜等,這些不良的生活習(xí)慣加劇了慢性疾病在全球范圍內(nèi)的蔓延。糖尿病是一種典型的慢性代謝性疾病,其發(fā)病率逐年增加,給各個國家?guī)砹顺林氐尼t(yī)療與經(jīng)濟負(fù)擔(dān)。盡管目前臨床上已經(jīng)開發(fā)了不少有效的降糖藥物,但隨著糖尿病病情的惡化,已上市的藥物未能控制并發(fā)癥的產(chǎn)生,糖尿病人的生活質(zhì)量也未得到明顯改善。開發(fā)更為有效的新型降糖藥品是當(dāng)前糖尿病研究領(lǐng)域中亟待解決的重大問題之一。隨著人們的健康意識逐漸增強,越來越意識到防病勝于治病,更傾向于采用健康的方式防治疾病,例如運動,食療等。茶飲作為人們?nèi)粘ｏ嬈?有望成為防治慢性疾病的可選方式之一。兩色金雞菊(Coreopsis tinctoria Nutt.)屬于菊科(Asteraceae)金雞菊屬(Coreopsis),其頭狀花序在民間多作茶飲,常用于改善高血壓、高血脂、糖尿病等慢性疾病,但其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)與作用機制尚不清楚。課題組前期的研究發(fā)現(xiàn)兩色金雞菊茶飲能夠顯著改善高脂飲食誘導(dǎo)的大鼠胰島素抵抗;兩色金雞菊70%乙醇總提物能夠明顯改善高糖誘導(dǎo)的HepG2細(xì)胞的胰島素抵抗。眾所周知,胰島素抵抗是糖尿病等慢性代謝疾病的重要病理基礎(chǔ),故可以推測兩色金雞菊具有改善糖尿病的潛力。為進一步探索兩色金雞菊的物質(zhì)基礎(chǔ)和作用機理,本文在前期研究基礎(chǔ)上開展以下研究:首先,建立兩色金雞菊質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn):應(yīng)用大孔樹脂富集兩色金雞菊總黃酮部位,通過UPLC-DAD建立了 9個黃酮類化合物(異奧卡寧-7-O-β-D-葡萄糖苷、槲皮萬壽菊素-7-O-β-D-葡萄糖苷、異奧卡寧、槲皮素-7-O-葡萄糖苷、馬里苷、金雞菊查爾酮、奧卡寧、圣草酚、紫鉚花素)和1個苯丙素類化合物(對羥基桂皮酸甲酯-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷)的多成分含量測定方法,為兩色金雞菊總黃酮質(zhì)量控制提供了參考依據(jù),為之后的藥理研究提供了基礎(chǔ)。其次,采用兩種糖尿病動物藥效學(xué)評價模型進一步研究兩色金雞菊總黃酮(The total flavonoids of Coreopsis tinctoria,CT)對糖尿病的改善作用。(1)鏈脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)和高糖高脂飼料共同誘導(dǎo)的wistar糖尿病大鼠模型:結(jié)果表明CT高劑量組能夠顯著降低血清中的空腹血糖(Glucose,GLU)、甘油三酯(Triglyceride,TG)與游離脂肪酸(Nonestesterified fatty acid,NEFA)水平,提高高密度脂蛋白膽固醇(High density lipoprotein-Cholesterol,HDL-C)水平,改善糖耐量與胰島素耐量。(2)db/db自發(fā)性2型糖尿病模型:實驗結(jié)果表明CT能夠明顯降低血脂相關(guān)指標(biāo)(TG,低密度脂蛋白膽固醇(Lowdensity lipoprotein-Cholesterol LDL-C),總膽固醇(Total cholesterol,CHO))的水平,降低胰島素抵抗(降低GLU、胰島素抵抗指數(shù)(Insulin resistance index,HOMA-IR)、胰高血糖素(Glucagon PG)與胰島素(Insulin,INS)水平,提高胰島素敏感指數(shù)(Insulin sensitivity index,ISI)水平)。其中,CT低劑量組藥效比CT中高劑量組更好,其肝臟脂肪變性較模型組明顯減輕,并且胰島明顯增生,提示著低劑量組的胰島分泌功能增強。以上兩種動物實驗結(jié)果表明,CT具有很好的降血糖的潛力,有望開發(fā)成輔助降糖藥或者輔助降糖的保健品。結(jié)合轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析方法初步探索CT改善糖尿病的作用機制:采用RNA-seq技術(shù)對db/db小鼠的肝臟組織進行轉(zhuǎn)錄組分析,通過對比CT組與模型組(CT vs.Model)、Model組與正常組(Model vs.Control)兩個組合的差異基因,找到了大量的重疊差異基因;對這些差異基因進行GO功能注釋和KEGG通路富集分析,發(fā)現(xiàn)CT干預(yù)后,調(diào)節(jié)了檸檬酸循環(huán)(TCA循環(huán))、磷酸戊糖途徑、PI3K-Akt信號通路、糖酵解/糖異生、PPAR信號通路、果糖和甘露糖代謝等多條通路,其中最顯著的是檸檬酸循環(huán),涉及能量代謝、糖代謝、脂代謝等多個復(fù)雜生物過程,提示著兩色金雞菊能夠多靶點、多層次、多環(huán)節(jié)地改善糖尿病。根據(jù)GO與KEGG富集分析結(jié)果,挑選出11個與糖尿病相關(guān)的關(guān)鍵基因進行實時熒光定量(realtime fluorescence quantitative PCR,qPCR)驗證。結(jié)果發(fā)現(xiàn),兩色金雞菊可能通過調(diào)控Slc2a2、Cd36 Fabp4、Prkca、Ugtla5、Slc27a4、Pygl、Aldob、Ogt、Pik3c2b、Sdhb等關(guān)鍵基因,調(diào)控胰島素抵抗、糖脂代謝、能量代謝等經(jīng)典通路,從而達到改善糖尿病的目的。最后,通過計算機反向?qū)ぐ屑夹g(shù)輔助探究兩色金雞菊的藥理活性:找到了 208個靶點,發(fā)現(xiàn)其主要與癌癥、心血管疾病、神經(jīng)性疾病、糖脂代謝障礙等疾病相關(guān)。通過統(tǒng)計分析,確定了 15個潛在靶點和20個活性化合物(包括19個黃酮類成分和1個苯丙素類成分),涉及激素調(diào)節(jié)、抗炎、抗氧化、胰島素抵抗、能量代謝等代謝通路,發(fā)現(xiàn)兩色金雞菊具有治療癌癥、心血管疾病、神經(jīng)疾病和糖脂代謝紊亂等疾病的潛在活性,具有深入開發(fā)的潛力本文通過以上研究系統(tǒng)評價了兩色金雞菊總黃酮改善糖尿病的藥理活性,并為兩色金雞菊后續(xù)的機制研究提供了科學(xué)依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5
【圖文】：

邐兩色金雞菊總黃酮改善２型糖yU病的藥效學(xué)機制研究邐逡逑取混合對照品儲備溶液，加８０％甲醇梯度稀釋成不同濃度的混合對照品溶液，逡逑取３４進樣分析。以峰面積值為縱坐標(biāo)（Ｙ軸），對照品濃度為橫坐標(biāo)（Ｘ軸），逡逑繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果見表１。結(jié)果表明各對照品在線性范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。逡逑２邐２８５ｍｎ逡逑

圖２兩色金雞菊總黃酮部位的ＵＰＬＣ圖逡逑表３兩色金雞菊總黃酮１０種成分化合物含量邐逡逑化合物邐含量（｜ｉｇ／ｍｇ）逡逑１邐２？／Ｓ－異奧卡寧－７－０－＾－Ｄ－葡萄糖苷邐２７８逡逑２邐對羥基桂皮酸甲酯－４－０－ｙ９－Ｄ－吡喃葡萄糖苷邐８．０４逡逑３邐槲皮萬壽菊素－７－０－Ｐ－Ｄ－葡萄糖苷邐５１．３逡逑４邐異奧卡寧邐６４．８逡逑５邐槲皮素－７－０－葡萄糖苷邐１１．１逡逑６邐馬里苷邐２３０逡逑７邐金雞菊查爾酮邐７．５４逡逑８邐奧卡寧邐４８．４逡逑９邐圣草酚邐６．０７逡逑１０邐紫鉚花素邐２Ｊ８邐逡逑

圖４邋Ｇ、Ｉ）

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本文編號：2786663