發(fā)布時間：2020-08-09 02:50

【摘要】：糖尿病腎病是糖尿病嚴重的微血管并發(fā)癥之一,也是目前全球導致終末期腎病最危險的因素之一。所以在糖尿病腎病和慢性腎臟病中需要有效及創(chuàng)新的治療阻止其病理進程。晚近已證實氧化應激和炎癥反應是導致糖尿病腎病腎臟損害的重要因素,因此通過抑制氧化應激和炎癥反應可作為治療的新靶向。臨床研究證實單味中草藥、經方等在糖尿病腎病治療中的有效性。本研究通過應用經方加減治療糖尿病腎病,旨在對中醫(yī)藥延緩糖尿病腎病病理進程進行深入的分子機制研究。研究內容分為四個部分:1.糖尿病腎病大鼠模型建立及組織形態(tài)學觀察目的:采用單側腎切除及一次性腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ)的方法構建大鼠糖尿病腎病(DN)模型,通過觀察大鼠一般情況及腎組織病理形態(tài)變化來驗證栝樓瞿麥湯對糖尿病腎病有治療效果,且能延緩其病程進一步進展方法:100只SD大鼠購回后適應性飼養(yǎng)1周,除正常組外,所有大鼠以單側腎切除及腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ)(45mg·kg-1)的方法誘導制作大鼠糖尿病腎病(DN)模型。注射STZ72h后,測定隨機血糖≥16.7mmol·L-1者,確定造模成功。按隨機數字法將其分為DN模型組、栝樓瞿麥湯高劑量組(GLQM-H)、栝樓瞿麥湯中劑量組(GLQM-M)、栝樓瞿麥湯低劑量組(GLQM-L)、陽性藥物(纈沙坦)對照組。從第四周起,GLQM-L、GLQM-M、GLQM-H 分別予以 1.4 g·kg-1,2.8 g·kg-1,5.6g·kg-1 中藥,纈沙坦組予 4.8×10-3g·kg-1,正常組及模型組均給予2.8g·kg-1蒸餾水連續(xù)灌胃12周,分別在治療第4周、第12周時稱量大鼠體質量、予大鼠空腹8小時后尾尖采血0.5mL左右,測定大鼠空腹血糖值。末次給藥12h后,頸椎脫位法處死大鼠,觀察大鼠一般情況、取大鼠腎組織進行常規(guī)石蠟切片以進行H E、PAS染色并在光鏡下觀察各組大鼠病理組織形態(tài)學變化。其余腎組織儲存于液氮中備用,余石蠟切片常溫保存?zhèn)溆�。結果:正常組大鼠的毛發(fā)均勻,毛色正常,活動正常,一般情況如常;模型組大鼠毛發(fā)稀疏,毛色枯黃,并出現多飲、多食、多尿、消瘦、精神萎靡、弓背等表現;各治療組大鼠在實驗過程中,毛色及毛發(fā)分布情況較模型組均有不同程度改善;DN模型組大鼠與正常組大鼠比較,腎組織出現明顯的病理進展;各治療組與DN模型組比較,腎組織病理變化均有不同程度的改善。結論:栝樓瞿麥湯對糖尿病腎病大鼠損傷的腎組織有修復作用。2.栝樓瞿麥湯對糖尿病腎病大鼠炎癥因子的影響目的:探討栝樓瞿麥湯對糖尿病腎病大鼠炎癥因子的作用機制方法:取第一部分儲存于液氮中的備用腎組織,取組織勻漿提取的上清液用酶聯(lián)免疫吸附試驗法(ELISA)測定各組大鼠腎組織中堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)、胰島素生長因子(IGF)及單核細胞趨化蛋白-1(MCP-1)的含量。結果:DN模型組大鼠腎組織bFGF、IGF、MCP-1含量均高于正常組,差異顯著(P0.01);GLQM-H、GLQM-M 的 bFGF、GLQM-M 組的 MCP-1、纈沙坦組 bFGF、IGF、MCP-1 含量均低于DN組,有顯著性差異(P0.01);GLQM-L的bFGF、GLQM-M的IGF、GLQM-H的MCP-1均低于DN組,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。結論:栝樓瞿麥湯通過調控bFGF,IGF,MCP-1等炎癥因子的表達來改善糖尿病腎病大鼠表現及其腎組織病理狀態(tài)。3.栝樓瞿麥湯干預糖尿病腎病大鼠p38 MAPK炎癥信號通路機制研究目的:研究栝樓瞿麥湯對糖尿病腎病大鼠p38MAPK信號通路影響,探討其對糖尿病腎病的作用機制及治療效果方法:取第一部分儲存于液氮中的備用腎組織,分別提取大鼠腎組織蛋白及RNA,Western Blot法檢測大鼠腎組織p-p38 MAPK、p-CREB、FN蛋白表達情況。逆轉錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)法檢測大鼠腎組織FNmRNA基因表達情況。結果:DN模型組大鼠與正常組大鼠比較,p-p38MAPK、p-CREB、FN蛋白表達水平顯著上調(P0.05);FN mRNA基因表達水平顯著上升(P0.05);經栝樓瞿麥湯干預后,DN大鼠腎組織中p-p38 MAPK、p-CREB、FN蛋白表達水平均有不同程度下調且FN mRNA基因表達水平也隨之下調,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05或P0.01)。結論:栝樓瞿麥湯通過抑制p38 MAPK炎癥信號通路中關鍵信號分子的激活,使損傷的DN大鼠腎組織得以修復,從而延緩DN的進程。4.栝樓瞿麥湯干預糖尿病腎病大鼠TGF-β1/Smad炎癥信號通路機制研究目的:研究栝樓瞿麥湯對糖尿病腎病大鼠TGF-β1/Smad信號通路影響,探討其對糖尿病腎病的作用機制及治療效果方法:取第一部分儲存于液氮中的備用腎組織及備用的預處理組織切片,組織勻漿液分別提取其全組織蛋白及RNA,免疫組織化學法檢測大鼠腎組織Smad2、Smad3蛋白表達;逆轉錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)法檢測大鼠腎組織TGF-β1mRNA1、Smad2mRNA和Smad7 mRNA基因表達情況;Western Blot法檢測大鼠腎組織Smad2、Smad3、Smad7蛋白表達情況。結果:DN模型組大鼠與正常組大鼠比較,TGF-β1mRNA、Smad2mRNA基因表達顯著上調、Smad7 mRNA基因表達顯著下調(P0.01),Smad2及Smad3蛋白表達明顯增加,Smad7蛋白表達顯著下調(P0.01)。各治療組與模型組相比較,TGF-β1mRNA及Smad2 mRNA基因表達下調(P0.01),Smad7mRNA基因表達上調,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05),Smad2及Smad3蛋白表達下降、Smad7蛋白表達升高。結論:栝樓瞿麥湯能能通過抑制TGF-β1/Smad炎癥信號通路中關鍵信號分子的激活,使DN大鼠損傷的腎組織得以修復,從而延緩DN的進程。
【學位授予單位】：揚州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R285.5
【圖文】：

．．逡逑ＧＬＱＭ－Ｈ邐ＧＬＱＭ－Ｍ邐ＧＬＱＭ－Ｌ逡逑圖１．各組ＤＮ大鼠腎組織病理形態(tài)（ＨＥ，ｘ４００）逡逑Ｆｉｇｌ．Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ邋ｃｈａｎｇｅｓ邋ｏｆ邋ｒｅｎａｌ邋ｔｉｓｓｕｅ邋ｉｎ邋ＤＮ邋ｒａｔｓ（ＨＥ，ｘ４００）逡逑

ＧＬＱＭ－Ｈ邐ＧＬＱＭ－Ｍ邐ＧＬＱＭ－Ｌ逡逑圖２？各組ＤＮ大鼠腎組織病理形態(tài)（ＰＡＳ，ｘ４００）逡逑Ｆｉｇ２．Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ邋ｃｈａｎｇｅｓ邋ｏｆ邋ｒｅｎａｌ邋ｔｉｓｓｕｅ邋ｉｎ邋ＤＮ邋ｒａｔｓ（ＰＡＳ，ｘ４００）逡逑０）逡逑

第４周之后較ＤＮ模型組大鼠體質量均有不同程度增加（Ｐ＜０．０５），且ＧＬＱＭ－Ｈ大鼠體質逡逑量較纈沙坦組大鼠相當（Ｐ＞0．0５）；而ＧＬＱＭ－Ｌ大鼠體質量在治療第４周及第１２周后體質逡逑量仍持續(xù)下降，但下降速度較ＤＮ模型組緩慢。（見圖３及表１）。逡逑正常組大鼠空腹血糖（ＦＢＧ）在整個實驗過程中均維持在６ｍｍｏｌ／Ｌ左右；ＤＮ模型組大逡逑鼠在造模成功后的ＦＢＧ持續(xù)偏高，而經ＧＬＱＭ干預后的治療組大鼠ＦＢＧ在第４周之后較逡逑ＤＮ模型組大鼠ＦＢＧ均有不同程度下降，尤以ＧＬＱＭ－Ｈ為甚（Ｐ＜０．０１）（見圖４及表２）。逡逑正常組邐模型組邐纈沙坦組逡逑．逡逑＃？＇邐／■邐１邐賽？’逡逑１邐？邐＾邋Ｉ＂邐ｆｔｒ－邐ｆｌ．ｒ．逡逑ＧＬＱＭ－Ｈ邐ＧＬＱＭ－Ｍ邐ＧＬＱＭ－Ｌ逡逑圖１．各組ＤＮ大鼠腎組織病理形態(tài)（ＨＥ，ｘ４００）逡逑Ｆｉｇｌ．Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ邋ｃｈａｎｇｅｓ邋ｏｆ邋ｒｅｎａｌ邋ｔｉｓｓｕｅ邋ｉｎ邋ＤＮ邋ｒａｔｓ（ＨＥ，ｘ４００）逡逑

【參考文獻】

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本文編號：2786491