【摘要】：糖尿病腎病是糖尿病嚴(yán)重的微血管并發(fā)癥之一,也是目前全球?qū)е陆K末期腎病最危險(xiǎn)的因素之一。所以在糖尿病腎病和慢性腎臟病中需要有效及創(chuàng)新的治療阻止其病理進(jìn)程。晚近已證實(shí)氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)是導(dǎo)致糖尿病腎病腎臟損害的重要因素,因此通過抑制氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)可作為治療的新靶向。臨床研究證實(shí)單味中草藥、經(jīng)方等在糖尿病腎病治療中的有效性。本研究通過應(yīng)用經(jīng)方加減治療糖尿病腎病,旨在對中醫(yī)藥延緩糖尿病腎病病理進(jìn)程進(jìn)行深入的分子機(jī)制研究。研究內(nèi)容分為四個(gè)部分:1.糖尿病腎病大鼠模型建立及組織形態(tài)學(xué)觀察目的:采用單側(cè)腎切除及一次性腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ)的方法構(gòu)建大鼠糖尿病腎病(DN)模型,通過觀察大鼠一般情況及腎組織病理形態(tài)變化來驗(yàn)證栝樓瞿麥湯對糖尿病腎病有治療效果,且能延緩其病程進(jìn)一步進(jìn)展方法:100只SD大鼠購回后適應(yīng)性飼養(yǎng)1周,除正常組外,所有大鼠以單側(cè)腎切除及腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ)(45mg·kg-1)的方法誘導(dǎo)制作大鼠糖尿病腎病(DN)模型。注射STZ72h后,測定隨機(jī)血糖≥16.7mmol·L-1者,確定造模成功。按隨機(jī)數(shù)字法將其分為DN模型組、栝樓瞿麥湯高劑量組(GLQM-H)、栝樓瞿麥湯中劑量組(GLQM-M)、栝樓瞿麥湯低劑量組(GLQM-L)、陽性藥物(纈沙坦)對照組。從第四周起,GLQM-L、GLQM-M、GLQM-H 分別予以 1.4 g·kg-1,2.8 g·kg-1,5.6g·kg-1 中藥,纈沙坦組予 4.8×10-3g·kg-1,正常組及模型組均給予2.8g·kg-1蒸餾水連續(xù)灌胃12周,分別在治療第4周、第12周時(shí)稱量大鼠體質(zhì)量、予大鼠空腹8小時(shí)后尾尖采血0.5mL左右,測定大鼠空腹血糖值。末次給藥12h后,頸椎脫位法處死大鼠,觀察大鼠一般情況、取大鼠腎組織進(jìn)行常規(guī)石蠟切片以進(jìn)行H E、PAS染色并在光鏡下觀察各組大鼠病理組織形態(tài)學(xué)變化。其余腎組織儲存于液氮中備用,余石蠟切片常溫保存?zhèn)溆�。結(jié)果:正常組大鼠的毛發(fā)均勻,毛色正常,活動正常,一般情況如常;模型組大鼠毛發(fā)稀疏,毛色枯黃,并出現(xiàn)多飲、多食、多尿、消瘦、精神萎靡、弓背等表現(xiàn);各治療組大鼠在實(shí)驗(yàn)過程中,毛色及毛發(fā)分布情況較模型組均有不同程度改善;DN模型組大鼠與正常組大鼠比較,腎組織出現(xiàn)明顯的病理進(jìn)展;各治療組與DN模型組比較,腎組織病理變化均有不同程度的改善。結(jié)論:栝樓瞿麥湯對糖尿病腎病大鼠損傷的腎組織有修復(fù)作用。2.栝樓瞿麥湯對糖尿病腎病大鼠炎癥因子的影響目的:探討栝樓瞿麥湯對糖尿病腎病大鼠炎癥因子的作用機(jī)制方法:取第一部分儲存于液氮中的備用腎組織,取組織勻漿提取的上清液用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法(ELISA)測定各組大鼠腎組織中堿性成纖維細(xì)胞生長因子(bFGF)、胰島素生長因子(IGF)及單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1)的含量。結(jié)果:DN模型組大鼠腎組織bFGF、IGF、MCP-1含量均高于正常組,差異顯著(P0.01);GLQM-H、GLQM-M 的 bFGF、GLQM-M 組的 MCP-1、纈沙坦組 bFGF、IGF、MCP-1 含量均低于DN組,有顯著性差異(P0.01);GLQM-L的bFGF、GLQM-M的IGF、GLQM-H的MCP-1均低于DN組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:栝樓瞿麥湯通過調(diào)控bFGF,IGF,MCP-1等炎癥因子的表達(dá)來改善糖尿病腎病大鼠表現(xiàn)及其腎組織病理狀態(tài)。3.栝樓瞿麥湯干預(yù)糖尿病腎病大鼠p38 MAPK炎癥信號通路機(jī)制研究目的:研究栝樓瞿麥湯對糖尿病腎病大鼠p38MAPK信號通路影響,探討其對糖尿病腎病的作用機(jī)制及治療效果方法:取第一部分儲存于液氮中的備用腎組織,分別提取大鼠腎組織蛋白及RNA,Western Blot法檢測大鼠腎組織p-p38 MAPK、p-CREB、FN蛋白表達(dá)情況。逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)法檢測大鼠腎組織FNmRNA基因表達(dá)情況。結(jié)果:DN模型組大鼠與正常組大鼠比較,p-p38MAPK、p-CREB、FN蛋白表達(dá)水平顯著上調(diào)(P0.05);FN mRNA基因表達(dá)水平顯著上升(P0.05);經(jīng)栝樓瞿麥湯干預(yù)后,DN大鼠腎組織中p-p38 MAPK、p-CREB、FN蛋白表達(dá)水平均有不同程度下調(diào)且FN mRNA基因表達(dá)水平也隨之下調(diào),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05或P0.01)。結(jié)論:栝樓瞿麥湯通過抑制p38 MAPK炎癥信號通路中關(guān)鍵信號分子的激活,使損傷的DN大鼠腎組織得以修復(fù),從而延緩DN的進(jìn)程。4.栝樓瞿麥湯干預(yù)糖尿病腎病大鼠TGF-β1/Smad炎癥信號通路機(jī)制研究目的:研究栝樓瞿麥湯對糖尿病腎病大鼠TGF-β1/Smad信號通路影響,探討其對糖尿病腎病的作用機(jī)制及治療效果方法:取第一部分儲存于液氮中的備用腎組織及備用的預(yù)處理組織切片,組織勻漿液分別提取其全組織蛋白及RNA,免疫組織化學(xué)法檢測大鼠腎組織Smad2、Smad3蛋白表達(dá);逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)法檢測大鼠腎組織TGF-β1mRNA1、Smad2mRNA和Smad7 mRNA基因表達(dá)情況;Western Blot法檢測大鼠腎組織Smad2、Smad3、Smad7蛋白表達(dá)情況。結(jié)果:DN模型組大鼠與正常組大鼠比較,TGF-β1mRNA、Smad2mRNA基因表達(dá)顯著上調(diào)、Smad7 mRNA基因表達(dá)顯著下調(diào)(P0.01),Smad2及Smad3蛋白表達(dá)明顯增加,Smad7蛋白表達(dá)顯著下調(diào)(P0.01)。各治療組與模型組相比較,TGF-β1mRNA及Smad2 mRNA基因表達(dá)下調(diào)(P0.01),Smad7mRNA基因表達(dá)上調(diào),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),Smad2及Smad3蛋白表達(dá)下降、Smad7蛋白表達(dá)升高。結(jié)論:栝樓瞿麥湯能能通過抑制TGF-β1/Smad炎癥信號通路中關(guān)鍵信號分子的激活,使DN大鼠損傷的腎組織得以修復(fù),從而延緩DN的進(jìn)程。
【學(xué)位授予單位】：揚(yáng)州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R285.5
【圖文】：

．．逡逑ＧＬＱＭ－Ｈ邐ＧＬＱＭ－Ｍ邐ＧＬＱＭ－Ｌ逡逑圖１．各組ＤＮ大鼠腎組織病理形態(tài)（ＨＥ，ｘ４００）逡逑Ｆｉｇｌ．Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ邋ｃｈａｎｇｅｓ邋ｏｆ邋ｒｅｎａｌ邋ｔｉｓｓｕｅ邋ｉｎ邋ＤＮ邋ｒａｔｓ（ＨＥ，ｘ４００）逡逑

ＧＬＱＭ－Ｈ邐ＧＬＱＭ－Ｍ邐ＧＬＱＭ－Ｌ逡逑圖２？各組ＤＮ大鼠腎組織病理形態(tài)（ＰＡＳ，ｘ４００）逡逑Ｆｉｇ２．Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ邋ｃｈａｎｇｅｓ邋ｏｆ邋ｒｅｎａｌ邋ｔｉｓｓｕｅ邋ｉｎ邋ＤＮ邋ｒａｔｓ（ＰＡＳ，ｘ４００）逡逑０）逡逑

第４周之后較ＤＮ模型組大鼠體質(zhì)量均有不同程度增加（Ｐ＜０．０５），且ＧＬＱＭ－Ｈ大鼠體質(zhì)逡逑量較纈沙坦組大鼠相當(dāng)（Ｐ＞0．0５）；而ＧＬＱＭ－Ｌ大鼠體質(zhì)量在治療第４周及第１２周后體質(zhì)逡逑量仍持續(xù)下降，但下降速度較ＤＮ模型組緩慢。（見圖３及表１）。逡逑正常組大鼠空腹血糖（ＦＢＧ）在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中均維持在６ｍｍｏｌ／Ｌ左右；ＤＮ模型組大逡逑鼠在造模成功后的ＦＢＧ持續(xù)偏高，而經(jīng)ＧＬＱＭ干預(yù)后的治療組大鼠ＦＢＧ在第４周之后較逡逑ＤＮ模型組大鼠ＦＢＧ均有不同程度下降，尤以ＧＬＱＭ－Ｈ為甚（Ｐ＜０．０１）（見圖４及表２）。逡逑正常組邐模型組邐纈沙坦組逡逑．逡逑＃？＇邐／■邐１邐賽？’逡逑１邐？邐＾邋Ｉ＂邐ｆｔｒ－邐ｆｌ．ｒ．逡逑ＧＬＱＭ－Ｈ邐ＧＬＱＭ－Ｍ邐ＧＬＱＭ－Ｌ逡逑圖１．各組ＤＮ大鼠腎組織病理形態(tài)（ＨＥ，ｘ４００）逡逑Ｆｉｇｌ．Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ邋ｃｈａｎｇｅｓ邋ｏｆ邋ｒｅｎａｌ邋ｔｉｓｓｕｅ邋ｉｎ邋ＤＮ邋ｒａｔｓ（ＨＥ，ｘ４００）逡逑

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2786491