【摘要】：作為天然藥物資源的重要組成部分,食藥用真菌發(fā)揮著重要的作用�，F(xiàn)已從食藥用真菌的子實(shí)體內(nèi)分離出多種具有生理活性的物質(zhì),如:多糖、多肽、蛋白質(zhì)、萜類、固醇類、凝集素等,經(jīng)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證具有抗氧化、抗炎、抗腫瘤、降血糖、降血壓以及免疫調(diào)節(jié)等生物學(xué)功能。黃傘菌作為一種藥食性真菌,是目前最具開發(fā)潛力的食藥用真菌,具有豐富的食用價值和藥用價值。隨著研究的深入,已有部分研究發(fā)現(xiàn)黃傘菌次級代謝產(chǎn)物能夠提高機(jī)體的免疫系統(tǒng),以及對某些腫瘤細(xì)胞能夠起到一定的抑制作用,為黃傘菌的進(jìn)一步研究提供了有利的證據(jù)。本文旨在提取黃傘菌次級代謝物中的抗腫瘤活性物質(zhì),對其進(jìn)行分離鑒定,為天然代謝產(chǎn)物的研究與開發(fā)提供新的思路。通過乙酸乙酯萃取的方法提取液氮研磨的新鮮黃傘菌子實(shí)體粉末中的次級代謝物,經(jīng)過反復(fù)的過濾、旋蒸、甲醇溶解、干燥等一系列方法,最終得到浸膏狀的黃傘菌次級代謝產(chǎn)物。用四甲基偶氮唑鹽(MTT)比色法測定抗腫瘤活性,采用體外抗腫瘤活性跟蹤與化學(xué)分離相結(jié)合的方法來分離黃傘菌次級代謝產(chǎn)物。利用高效液相色譜(HPLC)分離次級代謝產(chǎn)物中的抗腫瘤活性成分,根據(jù)理化性質(zhì)和圖譜數(shù)據(jù)鑒定化學(xué)結(jié)構(gòu),主要利用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(GC-MS)、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(LC-MS)和核磁共振(NMR)對收集得到的抗腫瘤活性成分進(jìn)行鑒定。具體研究結(jié)果如下:1.乙酸乙酯搖床提取最終得到黃傘菌次級代謝物浸膏。液氮研磨的新鮮黃傘菌子實(shí)體粉末加入1.5~2倍的乙酸乙酯搖床提取72 h,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸干共得到黃傘菌次級代謝產(chǎn)物浸膏凈重為7.59 g。2.C18半制備色譜柱和C18分析色譜柱分離黃傘菌次級代謝物分別得到5個峰譜和3個活性峰譜。高效液相色譜分離甲醇充分溶解后的黃傘菌次級代謝物浸膏,首先C18半制備色譜柱按照甲醇:超純水=20%:80%的比例分離得到5個峰譜,所處的時間段分別為2~4 min、4~4.5 min、4.5~7 min、7~10 min以及10~14 min;其次C18分析色譜柱根據(jù)MTT法的結(jié)果對半制備色譜柱中的2個活性較高的峰譜再次分離,共得到3個活性峰譜,第一個峰譜所處的時間段分別為6.8~9.8 min,第二個峰譜為4.2~8 min,第三個峰譜為18~20.5 min。3.MTT比色法體外測定黃傘菌次級代謝物的抗腫瘤活性,最終確定HPLC兩次分離得到的所有峰譜中共有5個具有較高的抗腫瘤活性。MTT被活細(xì)胞線粒體內(nèi)的脫氫酶還原成結(jié)晶狀的深紫色的產(chǎn)物formazan,該產(chǎn)物能夠被特定溶劑完全溶解,然后用酶標(biāo)儀測定其在570 nm波長附近的吸光度(OD值)。HPLC兩次分離得到的峰進(jìn)行MTT實(shí)驗(yàn),檢測到其中5個具有較高的抗腫瘤活性。4.HPLC分離得到的純品進(jìn)行鑒定,得到3號峰中活性物質(zhì)可能的相對分子質(zhì)量及結(jié)構(gòu)式。利用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(GC-MS)、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(LC-MS)和核磁共振(NMR)對HPLC分離得到的具有抗腫瘤活性的純品進(jìn)行鑒定,得出其分子式和化學(xué)結(jié)構(gòu)等特征,經(jīng)過上述方法初步確定3號峰中的活性物質(zhì)的相對分子質(zhì)量和結(jié)構(gòu)式。
【學(xué)位授予單位】：山東師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R284.2
【圖文】：

黃傘Figure2-1Pholiotaadiposa

圖 2-2 黃傘次級代謝產(chǎn)物Figure 2-2 The secondary metabolite of P. adipos分離黃傘菌子實(shí)體粉末經(jīng)乙酸乙酯萃取，甲醇

圖 2-3 20%甲醇流動相 HPLC 分離圖譜Figure 2-3 20% methanol flow phase HPLC separation map（2）圖 2-4 為 5%甲醇流動相 HPLC 分離圖譜，該圖譜分離的是圖 2-3 中大量收集干燥后的第 3 個峰(4.5-7 min)，流動相比例為甲醇:超純水=5%:95%（為了保證峰型更加清晰，超純水中加入了 0.1%/L 的三氟乙酸）。每針進(jìn)樣體積為 50 μ

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 灑榮波;孫繼政;高艷霞;唐瑜菁;;黃傘多糖的研究進(jìn)展[J];中國釀造;2015年10期

2 沈亮;邢建新;曾強(qiáng)成;王吉華;;德州地區(qū)野生黃傘生態(tài)環(huán)境及初步馴化栽培[J];德州學(xué)院學(xué)報;2009年06期

3 鄧衍領(lǐng);菌中新秀——黃傘[J];現(xiàn)代農(nóng)業(yè);2001年05期

4 丁湖廣;珍稀菇黃傘的特性及栽培[J];云南農(nóng)業(yè)科技;2001年05期

5 ;珍稀品種“黃傘”栽培成功[J];北京農(nóng)業(yè);2000年10期

6 韓育才;;黃傘(Pholjcta adiposa)生態(tài)習(xí)性初探[J];微生物學(xué)雜志;1987年02期

7 劉澤斌;;過滬州黃傘壩村居[J];岷峨詩稿;1994年01期

8 蘇新宏;;大黃傘(油畫)[J];滇池;1996年01期

9 徐方媛;王霞;陳濤;李寶通;;新疆野生黃傘菌生物學(xué)特性研究[J];新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報;2018年06期

10 況丹;曾告生;程新;;營養(yǎng)成分對黃傘生長的影響[J];北方園藝;2018年03期

相關(guān)會議論文 前1條

1 上官舟建;吳鶴群;王勇;;黃傘多糖對力竭運(yùn)動大鼠抗氧化能力及胃黏膜屏障保護(hù)機(jī)制的研究[A];2010年中國菌物學(xué)會學(xué)術(shù)年會論文摘要集[C];2010年

相關(guān)重要報紙文章 前10條

1 記者 郎花;人工栽培黃傘菇 科學(xué)管理最重要[N];新疆科技報(漢);2013年

2 山東省種子管理總站 周新國;我省新審定的黃傘新品種——黃傘LD——1[N];山東科技報;2010年

3 吳健;菌中新秀——黃傘及其栽培[N];中國特產(chǎn)報;2002年

4 ;黃傘[N];山西科技報;2007年

5 鄧衍領(lǐng);黃傘的栽培[N];河南科技報;2001年

6 邱小文;珍稀食用菌—黃傘[N];福建科技報;2004年

7 記者 付超;野生食用黃傘菌人工馴化栽培技術(shù)[N];新疆科技報(漢);2010年

8 張婷婷;堅(jiān)持“和諧改造” 贏得居民支持[N];成都日報;2009年

9 鄧衍領(lǐng);菌中新秀——苗傘的栽培技術(shù)[N];云南科技報;2002年

10 沈毅;文化的溫度與力量[N];涼山日報(漢);2018年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 王常榮;黃傘中抗氧化成分的分離鑒定及其抗HIV-1作用機(jī)制研究[D];南開大學(xué);2013年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 吳煒;黃傘菌次級代謝物抗腫瘤活性物質(zhì)的分離鑒定[D];山東師范大學(xué);2019年

2 周聰;黃傘多糖的制備及抗腫瘤活性研究[D];東北林業(yè)大學(xué);2017年

3 郝興霞;H公司黃傘菌工廠化生產(chǎn)基地建設(shè)項(xiàng)目可行性研究[D];齊魯工業(yè)大學(xué);2016年

4 鄧鵬;黃傘胞內(nèi)與胞外多糖提取優(yōu)化與抗氧化活性研究[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

5 張俊剛;黃傘深層發(fā)醇及其應(yīng)用研究[D];河北大學(xué);2006年

6 張靜;西寧黃傘生物學(xué)特性及馴化的研究[D];青海師范大學(xué);2008年

7 劉淼;新疆野生分布的黃傘和褐頂環(huán)柄菇的生長適應(yīng)特征[D];新疆農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

8 宮春宇;野生菌黃傘的培養(yǎng)及多糖研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2006年

9 全艷玲;黃傘菌種選育及發(fā)酵產(chǎn)物富集與純化[D];東北師范大學(xué);2006年

10 王曉巖;黃傘化學(xué)成分及藥理活性研究[D];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

本文編號：2785822