【摘要】：目的:在中醫(yī)基礎(chǔ)理論的指導(dǎo)下,采用雌孕激素負(fù)荷法結(jié)合多因素刺激法建立氣滯血瘀型子宮肌瘤病證結(jié)合動物模型。通過觀察子宮形態(tài)和病理,分析大鼠子宮組織、卵巢組織和血清中的雌激素、孕激素、雌激素受體、孕激素受體、成纖維細(xì)胞活化蛋白的表達(dá),基于“方病證、藥病證、有效組分與病證、有效成分與病證”創(chuàng)新藥物發(fā)現(xiàn)模式,從整體、器官、組織、分子多層次探究三棱-莪術(shù)組分配伍水煎液、三棱-莪術(shù)組分及組分配伍對氣滯血瘀型子宮肌瘤的防治作用與作用機(jī)制及三棱莪術(shù)相須配伍規(guī)律,為子宮肌瘤的科學(xué)研究、方劑配伍規(guī)律研究提供新方法、新思路,為臨床應(yīng)用提供一定科學(xué)依據(jù)。方法:1、大鼠分組、造模和給藥。將大鼠隨機(jī)分為空白組、模型組、陽藥組、三棱-莪術(shù)組分配伍(1:1)高劑量組、三棱-莪術(shù)組分配伍(1:1)中劑量組、三棱-莪術(shù)組分配伍(1:1)低劑量組、三棱-莪術(shù)組分配伍(1:2)組、三棱-莪術(shù)組分配伍(2:1)組、三棱總黃酮組、莪術(shù)揮發(fā)油組、三棱-莪術(shù)水煎液組。除空白組外,其他各組每日灌胃給予己烯雌酚藥液1.35mg/kg,另每周一、三、五下肢外側(cè)肌肉注射黃體酮注射液1.0mg/只,連續(xù)5周;從第四周開始皮下注射鹽酸腎上腺素注射液0.9mg/kg·d~(-1),四小時后給予慢性不可預(yù)見性刺激((1)60db噪音刺激連續(xù)3h,(2)晝夜顛倒,(3)5-10℃冰水浴游泳4min,(4)懸尾10min,(5)50℃烘箱烘10min,每日隨機(jī)給予1種刺激,并保證整個周期中每種刺激不少于2次),連續(xù)2周�？瞻捉M每日給予生理鹽水2ml,另每周一、三、五下肢外側(cè)肌肉注射生理鹽水0.05ml/只,連續(xù)5周。從造模第一周開始,在造模后2小時即給予藥物治療,各組分別灌胃給予生理鹽水、生理鹽水、9%的宮瘤消膠囊藥液、66.7%、33.3%、16.7%的三棱莪術(shù)(1:1)配伍組藥液、100%的三棱莪術(shù)(1:2)配伍組藥液、100%的三棱莪術(shù)(2:1)配伍組藥液、66.7%的三棱總黃酮藥液、66.7%的莪術(shù)揮發(fā)油藥液、三棱-莪術(shù)水煎液,連續(xù)5周。2、大鼠各指標(biāo)的觀察和檢測。(1)大鼠一般行為學(xué)觀察。試驗過程中觀察各組大鼠的一般行為學(xué)狀態(tài)。(2)子宮形態(tài)和病理組織學(xué)。各組大鼠最后一次給藥后,禁食12h,稱重后,解剖,取出子宮組織,剔除脂肪,清除血跡,拍照記錄子宮形態(tài)。然后取子宮分角上有較明顯病變(水腫、結(jié)節(jié)、囊腫、空泡變性等)組織,制作病理切片。(3)子宮、卵巢系數(shù)和子宮橫豎徑的檢測。大鼠解剖后,取出子宮和卵巢,剔除脂肪,清除血跡,稱取各臟器濕重,計算子宮、卵巢臟器系數(shù)(臟器系數(shù)=臟器濕重/大鼠體重×100)。子宮橫徑,游標(biāo)卡尺選取子宮體最寬處進(jìn)行測量。子宮豎徑,游標(biāo)卡尺選取子宮分角上,較長的一側(cè)子宮的長度。(4)大鼠血清中各指標(biāo)的檢測。大鼠股動脈取血,15ml離心管儲存,室溫血液自然凝固10-20min,3000r/min,離心20min,仔細(xì)收集血清。4℃冰箱保存,盡快用酶聯(lián)免疫試劑盒測定血清中的E_2、ER、P、PR的含量。(5)卵巢、子宮組織中各指標(biāo)的檢測。剪取適量組織,稱重后放入勻漿管中,1:9比例加入PBS,勻漿機(jī)2000r/min,1min進(jìn)行勻漿。然后取出勻漿管離心3000r/min,20min,仔細(xì)收集上清,采用酶聯(lián)免疫試劑盒檢測子宮、卵巢中的E_2、ER、P、PR的含量。剪取子宮組織,稱重,剪碎后置于勻漿機(jī)中,加入RIPA細(xì)胞裂解液30min,后12000rpm/min離心10 min,收集上清液,用蛋白質(zhì)印跡法(Western Blot)測定大鼠子宮組織中成纖維細(xì)胞活化蛋白(FAP)的含量。結(jié)果:1、基于“方病證”、“有效組分與病證”研究三棱莪術(shù)及其組分配伍對大鼠外觀、子宮形態(tài)與病理組織學(xué)的影響。與空白組比較,模型組和各用藥組大鼠造模后,外觀呈現(xiàn)毛色暗淡無光、皮毛凌亂、脫落、毛根不固等改變。與空白組相比,模型組大鼠雙側(cè)子宮形態(tài)發(fā)生改變,宮體出現(xiàn)囊腫、結(jié)節(jié)、水腫,雙側(cè)子宮出現(xiàn)大小不一、形狀不對稱等病理改變,其他各組大鼠子宮出現(xiàn)不同程度的水腫、結(jié)節(jié)、囊腫、質(zhì)地不均等病理改變。與空白組比較,其他各組大鼠病理切片分析結(jié)果顯示有肌纖維排列紊亂、增厚,肌細(xì)胞增生、炎細(xì)胞浸潤等病理表現(xiàn)。其中三棱莪術(shù)水煎液組和S-E(1:1)高劑量組大鼠的外觀和子宮病理改變較其他用藥組輕。2、基于“方病證”、“有效組分與病證”研究三棱莪術(shù)及其組分配伍對子宮、卵巢系數(shù)和子宮橫豎徑的影響與空白組比較,模型組大鼠子宮、卵巢系數(shù)和子宮橫豎徑均升高。與模型組比較,各用藥組大鼠子宮、卵巢系數(shù)和子宮橫豎徑均有不同程度的降低,其中三棱莪術(shù)水煎液和S-E(1:1)高劑量組大鼠子宮、卵巢系數(shù)和子宮橫豎徑降低較明顯。3、基于“方病證”、“有效組分與病證”研究三棱莪術(shù)及其組分配伍對大鼠血清中E_2、ER、P、PR含量的影響與空白組比較,模型組大鼠血清中E_2、ER、P、PR的含量明顯升高。與模型組比較,各用藥組大鼠血清中的E_2、ER、P、PR含量均有所降低,其中三棱莪術(shù)水煎液組大鼠血清中E_2、ER、P、PR的含量降低明顯。三棱-莪術(shù)組分配伍(1:1)高劑量組大鼠血清中E_2、P、PR含量降低明顯,ER含量也有所降低。4、基于“方病證”、“有效組分與病證”研究三棱莪術(shù)及其組分配伍對大鼠卵巢組織中E_2、ER、P、PR含量的影響與空白組比較,模型組大鼠卵巢組織中E_2、ER、P、PR的含量明顯升高。與模型組比較,其他各組阿叔卵巢組織中的E_2、ER、P、PR均有所降低,其中三棱莪術(shù)水煎液組能明顯抑制卵巢組織ER和P的表達(dá),三棱-莪術(shù)組分配伍(1:1)高劑量組大鼠卵巢組織中ER、P、PR含量降低明顯,E_2含量也有所降低。較其他用藥組效果好。5、基于“方病證”、“有效組分與病證”研究三棱莪術(shù)及其組分配伍對大鼠子宮組織中E_2、ER、P、PR、FAP含量的影響與空白組比較,模型組大鼠子宮組織中E_2、ER、P、PR、FAP的表達(dá)明顯升高。與模型組比較,各用藥組子宮組織中E_2、ER、P、PR、FAP的表達(dá)均有所降低,其中三棱莪術(shù)水煎液組能明顯抑制子宮中ER、P、PR、FAP的表達(dá),三棱-莪術(shù)組分配伍(1:1)高劑量組子宮組織中E_2、ER、P、PR、FAP含量降低明顯,較其他用藥組效果好。結(jié)論:以上結(jié)果表明,三棱莪術(shù)水煎液能改善氣滯血瘀型子宮肌瘤大鼠外觀、子宮形態(tài),減輕子宮病理改變,明顯降低大鼠血清、卵巢和子宮組織中E_2、ER、P、PR、FAP的含量。三棱總黃酮、莪術(shù)揮發(fā)油和三棱莪術(shù)組分配伍不同比例對大鼠子宮形態(tài)、病理改變、血清E_2、ER、P、PR、卵巢E_2、ER、P、PR、子宮E_2、ER、P、PR、FAP均有不同程度的抑制作用,但三棱-莪術(shù)組分配伍(1:1)高劑量組對子宮肌瘤有更好的抑制作用,該其藥理作用機(jī)制可能是,同時抑制雌孕激素、雌孕激素受體以及成纖維細(xì)胞活化蛋白的表達(dá)。此外,實驗結(jié)果表明大鼠子宮組織中的雌激素與成纖維細(xì)胞活化蛋白的表達(dá)呈現(xiàn)一定程度的正相關(guān)關(guān)系,我們推測成纖維細(xì)胞活化蛋白的高表達(dá)可能是由過荷的雌激素刺激造成的。
【學(xué)位授予單位】：成都中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5;R-332
【圖文】：

圖 1 為造模后大鼠外觀圖。注：A 為空白組大鼠，B、C、D 為其他組外觀改變較典型的大鼠3.2 三棱-莪術(shù)藥物及組分配伍對大鼠子宮外觀的影響空白組（圖 2-A），可見兩側(cè)子宮左右對稱，呈 Y 形，橫豎徑正常，質(zhì)地均

圖 2 為各組大鼠子宮大體觀。注：A：空白組；B：模型組；C：陽藥組；D：S-E 1：1 高劑量組；E：S-E 1：1 中劑量組；F：S-E 1：1 低劑量組；G：S-E 1：2 組；H：S-E 2：1 組；I：S 組；J：E 組；K：S-E 水煎液組

可見少量粘膜上皮細(xì)胞空泡變性，肌纖維稍有增厚；S-E 1：2 組（圖3-G），可見粘膜上皮細(xì)胞空泡變性，肌層少量炎性細(xì)胞浸潤，肌纖維排列紊亂；S-E 2：1 組（圖 3-H），可將肌纖維排列紊亂，稍有增厚，肌間炎性細(xì)胞浸潤，偶見少量粘膜上皮細(xì)胞空泡變性；S 組（圖 3-I），可見肌纖維稍有增厚，少量粘膜細(xì)胞水腫，肌間稍有炎性細(xì)胞浸潤；E 組（圖 3-J），可見肌纖維排列紊亂，肌間炎性細(xì)胞浸潤，黏膜上皮細(xì)胞空泡變性；S-E 水煎液組（圖 3-K），可見肌纖維排列紊亂，偶見少量細(xì)胞水腫、充血，偶見少量炎性細(xì)胞浸潤。圖 3 為各組大鼠子宮病理切片（ 200）。注：A：空白組；B：模型組；C：陽藥組；D：S-E 1：1 高劑量組；E：S-E 1：1 中劑量組；F：S-E 1：1 低劑量組；G：S-E 1：2 組；H：S-E 2：1 組；I：S 組；J：E 組；K：S-E 水煎液組

【參考文獻(xiàn)】

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1 汪典;劉亞娟;劉丹;羅堯岳;王敏;盧青;陳旭;謝海波;;不同劑量活血、破血藥對動脈粥樣硬化小鼠主動脈Bcl-2及Bax基因表達(dá)的影響[J];中國中醫(yī)急癥;2015年10期

2 劉維;劉美燕;吳沅v

本文編號：2779705