【摘要】：姜黃素(Cur)是一種天然的強抗氧化劑,對腫瘤、炎癥、老年癡呆癥等各種惡性疾病具有預(yù)防治療作用。但由于姜黃素極差的穩(wěn)定性和水難溶性降低了其在體內(nèi)的生物利用度,嚴重限制了其在臨床的應(yīng)用。CB和FE是課題組合成的兩個新型姜黃素類似物,較姜黃素具有更好的抗氧化和抗腫瘤功效,而且生物穩(wěn)定性更佳。目的:利用Caco-2細胞考察Cur、CB和FE的細胞攝取情況,并利用體外Caco-2細胞單層模型研究Cur、CB和FE的腸道轉(zhuǎn)運過程及轉(zhuǎn)運機制。方法:首先考察了Cur、CB和FE在Caco-2細胞中的攝取情況。之后建立Caco-2細胞單層模型并對其完整性及緊密性進行評價,用評價合格的模型對Cur、CB和FE進行模擬腸道轉(zhuǎn)運研究,用HPLC法測定藥物的轉(zhuǎn)運量并計算Papp值,推測藥物的轉(zhuǎn)運機制。結(jié)果:(1)細胞攝取的實驗結(jié)果表明,Cur、CB和FE在Caco-2細胞中的攝取在一定濃度條件下均具有顯著的時間和濃度依賴性。給藥濃度為50μM,攝取時間為2 h時,Caco-2細胞對Cur、CB和FE的攝取量分別為1.60±0.15 nmol/mg protein、4.65±0.23 nmol/mg protein、6.64±0.27 nmol/mg protein;(2)吸收轉(zhuǎn)運的結(jié)果表明,Cur、CB和FE在Caco-2單層細胞模型中的雙向轉(zhuǎn)運量均隨時間的延長呈升高趨勢,具有顯著的時間依賴性。AP→BL的表觀滲透系數(shù)數(shù)據(jù)表明,相同濃度(25μM)時,CB(3.18±0.31×10~(-6) cm/s)和FE(5.28±0.83×10~(-6)cm/s)在Caco-2細胞單層模型中的吸收轉(zhuǎn)運都明顯大于Cur(1.13±0.11×10~(-6) cm/s);(3)雙向轉(zhuǎn)運的P_(app)數(shù)據(jù)表明,三個化合物的ER值均在1.0-1.5范圍內(nèi),提示三者的腸道轉(zhuǎn)運均沒有明顯的主動外排現(xiàn)象。(4)CB和FE的轉(zhuǎn)運量具有明顯的濃度依賴性,表明這兩者的轉(zhuǎn)運機制主要為被動轉(zhuǎn)運。結(jié)論:綜上所述,CB和FE在Caco-2細胞單層模型中的腸道通透性均較Cur本身具有明顯的提高,故這兩者在體內(nèi)可能表現(xiàn)出更高的生物利用度,在臨床用藥和食品保健品方面表現(xiàn)出更高的應(yīng)用潛力。
【學(xué)位授予單位】：浙江工業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R285
【圖文】：

圖 1-2 藥物的吸收轉(zhuǎn)運途徑Figure 1-2 Transport routes of drugs藥物的吸收機制又可分為：① 被動轉(zhuǎn)運（transcellular passive transport）。生物膜兩側(cè)存在濃度差或電位差時，藥物順化學(xué)濃度梯度或順電位梯度從一側(cè)向另一側(cè)遷移的過程。包括以給藥部位與血液中藥物濃度差為擴散動力的單純擴散和直接通過細胞膜上 0.4-0.8 nm 大小微孔的膜孔轉(zhuǎn)運。此過程不需要載體或能量，也不存在競爭抑制和飽和現(xiàn)象，直到膜兩側(cè)濃度達到平衡，轉(zhuǎn)運即保持動態(tài)平衡② 載體媒介轉(zhuǎn)運（carrier-mediated transport）。藥物借助生物膜上的化學(xué)載體蛋白與藥物結(jié)合，并將藥物遷移至膜的另一側(cè)，使藥物得到吸收的過程。包括藥物借助載體順濃度梯度遷移的促進擴散和逆濃度梯度遷移的主動轉(zhuǎn)運。此過程需要載體的參與，具有競爭抑制和飽和現(xiàn)象。③ 膜動轉(zhuǎn)運（membrane-mobiltransport）。膜動轉(zhuǎn)運包括攝入過程（胞飲和吞噬）和外排過程（胞吐），是一種通過細胞膜的內(nèi)陷，形成小胞，將藥物包裹住，轉(zhuǎn)移到細胞內(nèi)的過程；或在細胞

5.2.1 細胞單層模型的建立細胞的培養(yǎng)方法參照第三章的 3.2.2。待細胞在培養(yǎng)瓶中達到 80-90% 的融合時，用胰蛋白酶-EDTA（0.02%）將細胞消化下來。將細胞以 2 × 105cell/mL的密度接種到 transwell 培養(yǎng)板上培養(yǎng)（Figure 5-1）。向 transwell 板的 AP 側(cè)加入0.5 mL 細胞懸浮液（留兩個孔加入新鮮 DMEM 完全培養(yǎng)基作為空白對照），BL側(cè)加入 1.5 mL 新鮮 DMEM 完全培養(yǎng)基，將 Transwell 培養(yǎng)板放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。第 3 d 換液，先吸去 Transwell 培養(yǎng)板 BL 側(cè)的舊培養(yǎng)基，再小心地吸去 Transwell培養(yǎng)板 AP 側(cè)的舊培養(yǎng)基，加入適量的 HBSS 緩沖液清洗細胞層和底端，吸去后迅速向每個Transwell 培養(yǎng)板小室的BL側(cè)加入 1.5 mL 新鮮 DMEM 完全培養(yǎng)基，AP 側(cè)加入 0.5 mL 新鮮 DMEM 完全培養(yǎng)基，然后將 Transwell 培養(yǎng)板放入培養(yǎng)箱中。第一周，每兩天換一次培養(yǎng)基，之后，每天換培養(yǎng)基直至第 21 d。

.5 mL 和 1.5 mL 的 HBSS 緩沖液，轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)箱 培養(yǎng)板，吸棄 HBSS 緩沖液，再往 AP 側(cè)及 BL 側(cè)S 緩沖液，再轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 20 min。測儀表功能，之后打開電阻儀電源開關(guān)，將 STT”接口，將儀表模式按至“Ohms”一側(cè)，將電極養(yǎng)板的各個孔中（短端浸入培養(yǎng)板 AP 側(cè)，長端浸入90°），檢測跨膜電阻值（Figure 5-2），穩(wěn)定后開始，每孔測三次，三組數(shù)據(jù)的平均值即為該孔的電阻值按式 Equation 5-1 計算： -(cm2 cm) TEER( Ω)TEER(Ω) 面積2樣品孔空白孔ER樣品孔為含有細胞孔的跨膜電阻值；TEER空白孔為所用 Transwell 板的薄膜面積為 1.12 cm2。

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 張琴;施雯;韓麗妹;秦晶;王建新;;龍膽苦苷在Caco-2細胞模型中的攝取、轉(zhuǎn)運及外排研究[J];中國新藥雜志;2013年11期

2 蘇旬;賀秀麗;劉秀菊;郭京艷;翟光喜;;姜黃素的臨床研究進展[J];食品與藥品;2012年05期

3 商瑋;趙智明;趙凌杰;趙鵬;蔡輝;;姜黃素對佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠滑膜血管新生和低氧誘導(dǎo)因子1α表達的影響[J];臨床薈萃;2012年09期

4 王俊俊;廖曉歡;葉敏;陳勇;;Caco-2單層細胞模型上士的寧的體外吸收機制及其與甘草苷的轉(zhuǎn)運相互作用[J];藥學(xué)學(xué)報;2010年09期

5 楊文杰;榮蓉;張偉;許麥成;;姜黃素制劑的研究進展[J];中國藥師;2010年04期

6 張慶云;莫曾南;;姜黃素生物利用度研究進展[J];中國藥房;2009年33期

7 賈紹華;張舜堯;;姜黃素藥理作用研究進展[J];中國現(xiàn)代藥物應(yīng)用;2009年22期

8 邵靜萍;張善飛;陳淵成;楊文亮;柳曉泉;;丹酚酸B在心肌細胞和血管內(nèi)皮細胞內(nèi)的攝取特性[J];中國藥科大學(xué)學(xué)報;2009年03期

9 羅紅霞,方清茂,潘曉鷗;姜黃素的提取及其含量測定研究進展[J];中國藥業(yè);2004年06期

10 蔣學(xué)華,賈運濤,袁媛,陳鈞,周靜;Caco-2細胞模型在口服藥物吸收過程研究中的應(yīng)用[J];中國藥學(xué)雜志;2002年05期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 陳巍峰;姜黃素及其類似物的抗氧化活性研究[D];蘭州大學(xué);2006年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前2條

1 張玉梅;姜黃素苯胺類Schiff堿稀土配合物的合成、光致變色性能及其抑菌性研究[D];西北師范大學(xué);2012年

2 左克源;Caco-2細胞模型的建立及在口服藥物吸收中的應(yīng)用[D];華中科技大學(xué);2007年

本文編號：2779203