【摘要】：姜黃素(Cur)是一種天然的強(qiáng)抗氧化劑,對(duì)腫瘤、炎癥、老年癡呆癥等各種惡性疾病具有預(yù)防治療作用。但由于姜黃素極差的穩(wěn)定性和水難溶性降低了其在體內(nèi)的生物利用度,嚴(yán)重限制了其在臨床的應(yīng)用。CB和FE是課題組合成的兩個(gè)新型姜黃素類(lèi)似物,較姜黃素具有更好的抗氧化和抗腫瘤功效,而且生物穩(wěn)定性更佳。目的:利用Caco-2細(xì)胞考察Cur、CB和FE的細(xì)胞攝取情況,并利用體外Caco-2細(xì)胞單層模型研究Cur、CB和FE的腸道轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程及轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制。方法:首先考察了Cur、CB和FE在Caco-2細(xì)胞中的攝取情況。之后建立Caco-2細(xì)胞單層模型并對(duì)其完整性及緊密性進(jìn)行評(píng)價(jià),用評(píng)價(jià)合格的模型對(duì)Cur、CB和FE進(jìn)行模擬腸道轉(zhuǎn)運(yùn)研究,用HPLC法測(cè)定藥物的轉(zhuǎn)運(yùn)量并計(jì)算Papp值,推測(cè)藥物的轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制。結(jié)果:(1)細(xì)胞攝取的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,Cur、CB和FE在Caco-2細(xì)胞中的攝取在一定濃度條件下均具有顯著的時(shí)間和濃度依賴(lài)性。給藥濃度為50μM,攝取時(shí)間為2 h時(shí),Caco-2細(xì)胞對(duì)Cur、CB和FE的攝取量分別為1.60±0.15 nmol/mg protein、4.65±0.23 nmol/mg protein、6.64±0.27 nmol/mg protein;(2)吸收轉(zhuǎn)運(yùn)的結(jié)果表明,Cur、CB和FE在Caco-2單層細(xì)胞模型中的雙向轉(zhuǎn)運(yùn)量均隨時(shí)間的延長(zhǎng)呈升高趨勢(shì),具有顯著的時(shí)間依賴(lài)性。AP→BL的表觀(guān)滲透系數(shù)數(shù)據(jù)表明,相同濃度(25μM)時(shí),CB(3.18±0.31×10~(-6) cm/s)和FE(5.28±0.83×10~(-6)cm/s)在Caco-2細(xì)胞單層模型中的吸收轉(zhuǎn)運(yùn)都明顯大于Cur(1.13±0.11×10~(-6) cm/s);(3)雙向轉(zhuǎn)運(yùn)的P_(app)數(shù)據(jù)表明,三個(gè)化合物的ER值均在1.0-1.5范圍內(nèi),提示三者的腸道轉(zhuǎn)運(yùn)均沒(méi)有明顯的主動(dòng)外排現(xiàn)象。(4)CB和FE的轉(zhuǎn)運(yùn)量具有明顯的濃度依賴(lài)性,表明這兩者的轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制主要為被動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)。結(jié)論:綜上所述,CB和FE在Caco-2細(xì)胞單層模型中的腸道通透性均較Cur本身具有明顯的提高,故這兩者在體內(nèi)可能表現(xiàn)出更高的生物利用度,在臨床用藥和食品保健品方面表現(xiàn)出更高的應(yīng)用潛力。
【學(xué)位授予單位】：浙江工業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R285
【圖文】：

圖 1-2 藥物的吸收轉(zhuǎn)運(yùn)途徑Figure 1-2 Transport routes of drugs藥物的吸收機(jī)制又可分為：① 被動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)（transcellular passive transport）。生物膜兩側(cè)存在濃度差或電位差時(shí)，藥物順化學(xué)濃度梯度或順電位梯度從一側(cè)向另一側(cè)遷移的過(guò)程。包括以給藥部位與血液中藥物濃度差為擴(kuò)散動(dòng)力的單純擴(kuò)散和直接通過(guò)細(xì)胞膜上 0.4-0.8 nm 大小微孔的膜孔轉(zhuǎn)運(yùn)。此過(guò)程不需要載體或能量，也不存在競(jìng)爭(zhēng)抑制和飽和現(xiàn)象，直到膜兩側(cè)濃度達(dá)到平衡，轉(zhuǎn)運(yùn)即保持動(dòng)態(tài)平衡② 載體媒介轉(zhuǎn)運(yùn)（carrier-mediated transport）。藥物借助生物膜上的化學(xué)載體蛋白與藥物結(jié)合，并將藥物遷移至膜的另一側(cè)，使藥物得到吸收的過(guò)程。包括藥物借助載體順濃度梯度遷移的促進(jìn)擴(kuò)散和逆濃度梯度遷移的主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)。此過(guò)程需要載體的參與，具有競(jìng)爭(zhēng)抑制和飽和現(xiàn)象。③ 膜動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)（membrane-mobiltransport）。膜動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)包括攝入過(guò)程（胞飲和吞噬）和外排過(guò)程（胞吐），是一種通過(guò)細(xì)胞膜的內(nèi)陷，形成小胞，將藥物包裹住，轉(zhuǎn)移到細(xì)胞內(nèi)的過(guò)程；或在細(xì)胞

5.2.1 細(xì)胞單層模型的建立細(xì)胞的培養(yǎng)方法參照第三章的 3.2.2。待細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中達(dá)到 80-90% 的融合時(shí)，用胰蛋白酶-EDTA（0.02%）將細(xì)胞消化下來(lái)。將細(xì)胞以 2 × 105cell/mL的密度接種到 transwell 培養(yǎng)板上培養(yǎng)（Figure 5-1）。向 transwell 板的 AP 側(cè)加入0.5 mL 細(xì)胞懸浮液（留兩個(gè)孔加入新鮮 DMEM 完全培養(yǎng)基作為空白對(duì)照），BL側(cè)加入 1.5 mL 新鮮 DMEM 完全培養(yǎng)基，將 Transwell 培養(yǎng)板放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。第 3 d 換液，先吸去 Transwell 培養(yǎng)板 BL 側(cè)的舊培養(yǎng)基，再小心地吸去 Transwell培養(yǎng)板 AP 側(cè)的舊培養(yǎng)基，加入適量的 HBSS 緩沖液清洗細(xì)胞層和底端，吸去后迅速向每個(gè)Transwell 培養(yǎng)板小室的BL側(cè)加入 1.5 mL 新鮮 DMEM 完全培養(yǎng)基，AP 側(cè)加入 0.5 mL 新鮮 DMEM 完全培養(yǎng)基，然后將 Transwell 培養(yǎng)板放入培養(yǎng)箱中。第一周，每?jī)商鞊Q一次培養(yǎng)基，之后，每天換培養(yǎng)基直至第 21 d。

.5 mL 和 1.5 mL 的 HBSS 緩沖液，轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)箱 培養(yǎng)板，吸棄 HBSS 緩沖液，再往 AP 側(cè)及 BL 側(cè)S 緩沖液，再轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 20 min。測(cè)儀表功能，之后打開(kāi)電阻儀電源開(kāi)關(guān)，將 STT”接口，將儀表模式按至“Ohms”一側(cè)，將電極養(yǎng)板的各個(gè)孔中（短端浸入培養(yǎng)板 AP 側(cè)，長(zhǎng)端浸入90°），檢測(cè)跨膜電阻值（Figure 5-2），穩(wěn)定后開(kāi)始，每孔測(cè)三次，三組數(shù)據(jù)的平均值即為該孔的電阻值按式 Equation 5-1 計(jì)算： -(cm2 cm) TEER( Ω)TEER(Ω) 面積2樣品孔空白孔ER樣品孔為含有細(xì)胞孔的跨膜電阻值；TEER空白孔為所用 Transwell 板的薄膜面積為 1.12 cm2。

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2779203