【摘要】：目的本實(shí)驗(yàn)通過(guò)基因芯片技術(shù)建立基因功能表達(dá)譜數(shù)據(jù)庫(kù),篩選與哮喘大鼠免疫功能相關(guān)基因,為白芥子貼治療哮喘提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法將雄性清潔SD大鼠30只,4~6周齡,體重(150±20)g,按均衡隨機(jī)法(按體重分層)分為3組,分別為正常組(A組)、模型組(B組)、治療組(C組),每組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物10只。第1天,模型組、治療組兩組分別用新鮮配制的OVA,100mg輔以氫氧化鋁凝膠200mg及生理鹽水1ml的混懸液在大鼠兩腹股溝、后足跖,共4點(diǎn)做皮下注射,每點(diǎn)0.2ml,同時(shí)腹腔注射0.2ml,正常組不做任何處理。第15天處死模型組中的5只大鼠,收集并保存需檢測(cè)部位的標(biāo)本,以便于確認(rèn)造模是否成功,其余5只留用作為治療對(duì)照。第15~24天治療組開(kāi)始進(jìn)行白芥子貼貼敷治療,穴位貼敷前用8%硫化鈉在穴位處脫毛,將藥丸放在醫(yī)用脫敏膠貼上,分別貼于大鼠肺俞(雙)、定喘、膻中、膏肓(雙)處,每天1次,每次貼敷2~4h,貼敷治療后,將實(shí)驗(yàn)組致敏的大鼠置于密閉容器內(nèi)用超聲霧化器霧化吸入1%OVA生理鹽水懸液,每天30min,進(jìn)行激發(fā)誘喘1次,連續(xù)10天。模型組剩余5只予以空白貼敷,處理方法同治療組。正常組自由進(jìn)食常規(guī)飼料和水。第25天處死大鼠,采集肺組織標(biāo)本。進(jìn)行RNA的提取及鑒定、基因芯片的檢測(cè)。結(jié)果1.哮喘大鼠在行為學(xué)以及病理學(xué)方面均有明顯改變,揭示白芥子貼治療療效顯著。2.從散點(diǎn)圖、火山圖中可以得出,正常組與模型組相比,上調(diào)、下調(diào)基因表達(dá)差異顯著;模型組與治療組相比,下調(diào)基因表達(dá)差異顯著;治療組與正常組相比,上調(diào)基因表達(dá)差異顯著。3.送檢9只大鼠的肺組織中提取的基因,將所得基因結(jié)果根據(jù)基因庫(kù)等數(shù)據(jù)進(jìn)行剔除,按照p0.05,以基因表達(dá)倍數(shù)值的絕對(duì)值≥2.0為閾值來(lái)確定差異表達(dá)基因。結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,這些基因與哮喘的發(fā)病相關(guān)。正常組與模型組差異表達(dá)基因結(jié)果中,下調(diào)基因有:gavor、MTA-TC1900000、MTA-TC0800002、RGD7740611-1、Dbp、blykly、Scd1;上調(diào)基因有:Loc100909700、MTA_TC0200000、Ccr3、derchoy、barsar、Srpx、Ccl2、Fcamr、Sele;模型組與治療組差異基因表達(dá)中,下調(diào)基因有Sele、Fcamr、derchoy;上調(diào)基因有g(shù)logey、Mzbl;正常組與治療組差異基因表達(dá)中,上調(diào)基因有Loc100909700、Ccr3;下調(diào)基因有Dbp,差異基因表達(dá)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。4.將正常組、模型組和給藥組的差異表達(dá)基因進(jìn)行比較,通過(guò)熱圖可以發(fā)現(xiàn),基因的上調(diào)下調(diào)維持著大鼠的免疫功能,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,與哮喘有關(guān)的上調(diào)基因有9個(gè)分別是:LOC100909700、Sele、Srpx、derchoy、barsar、Ccr3、Fcamr、Ccl2、MTA-TC0200000;下調(diào)的基因有8個(gè)分別是:RGD7740611-1、blykly、MTA-TC1900000、gavor、Scd1、Meyflo、MTA-TC0800002、Dbp。結(jié)論1.本次實(shí)驗(yàn)大鼠在行為學(xué)上有明顯變化,在病理學(xué)改變中,變化顯著。研究證明本實(shí)驗(yàn)造模成功,經(jīng)白芥子貼貼敷治療后,氣道免疫-炎癥及氣道重塑有所改善,白芥子貼貼敷治療療效顯著。2.差異表達(dá)基因的上下調(diào)變化,與哮喘免疫學(xué)發(fā)病機(jī)制相符合,其中參與免疫調(diào)節(jié)的基因有:MTA-TC1900000、RGD7740611-1、Srpx、Fcamr、Ccl2;參與氣道免疫-炎癥的基因有:Loc100909700Ccr3;參與神經(jīng)免疫調(diào)節(jié)的基因有:MTA-TC0800002、參與遺傳免疫的基因有:MTA-TC0200000。3.根據(jù)實(shí)驗(yàn)研究表明,差異表達(dá)基因在哮喘時(shí)和治療后差異顯著,通過(guò)散點(diǎn)圖、火山圖、熱圖比較可以發(fā)現(xiàn),大鼠致敏后基因改變明顯,參與氣道炎癥反應(yīng)的基因原本下調(diào)變?yōu)樯险{(diào),參與機(jī)體免疫功能的基因原本上調(diào)變?yōu)橄抡{(diào),部分不表達(dá)或低表達(dá)基因開(kāi)始表達(dá);經(jīng)過(guò)治療后基因上調(diào)、下調(diào)改變與正常組相一致,但是數(shù)值仍有相差,說(shuō)明白芥子貼有一定的治療效果,為哮喘免疫方面的治療研究奠定基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：山西中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R285.5
【圖文】：

白芥子貼對(duì)哮喘大鼠免疫功能基因表達(dá)調(diào)控的研究；C2，C4，C9，通過(guò) 3 組結(jié)果中篩選基因，進(jìn)行對(duì)比分析差異表達(dá)基因散點(diǎn)圖結(jié)果附圖，具體結(jié)果如下（圖 1-圖

模型組與治療組差異基因散點(diǎn)圖結(jié)果比較

圖 3 治療組與正常組差異基因散點(diǎn)圖結(jié)果比較于展示兩個(gè)樣本的分布集中程度，以及差異基因的信號(hào)值差異基因，藍(lán)色表示下調(diào)差異基因。落在圖形中 y=x 直，其代表這個(gè)探針點(diǎn)在兩張芯片中信號(hào)值差異（Fold Ch兩側(cè) 45°線之外的點(diǎn)，其代表這個(gè)探針點(diǎn)在兩張芯片中信號(hào)，而紅色代表 2 倍上調(diào)基因，藍(lán)色代表 2 倍下調(diào)基因。從與模型組比較中發(fā)現(xiàn)部分上、下調(diào)基因差異表達(dá)倍數(shù)大于發(fā)現(xiàn)部分下調(diào)基因差異表達(dá)倍數(shù)大于 2，顯著性較高；正調(diào)基因差異表達(dá)倍數(shù)大于 2，顯著性較高。

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 邱容;肖昌武;何正光;文富強(qiáng);;布地奈德福莫特羅吸入劑對(duì)支氣管哮喘緩解期炎癥因子及肺功能的影響[J];西部醫(yī)學(xué);2015年12期

2 潘亦林;朱燕亭;李滿祥;;支氣管哮喘氣道重塑的研究進(jìn)展[J];中華肺部疾病雜志(電子版);2015年06期

3 溫檸如;黃赫;范英蘭;張雅鳳;;小青龍湯加減治療支氣管哮喘寒哮型療效觀察[J];中華中醫(yī)藥學(xué)刊;2015年12期

4 陶嘉磊;汪受傳;;汪受傳從伏邪學(xué)說(shuō)論治小兒支氣管哮喘經(jīng)驗(yàn)[J];中醫(yī)雜志;2015年23期

5 郝盼盼;邵湘寧;張翔;湯偉;朱靜;王英;唐樂(lè)平;;劉氏小兒推拿調(diào)治哮喘緩解期機(jī)理及驗(yàn)案舉隅[J];中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào);2015年20期

6 梁祥祥;;生脈飲合枳術(shù)丸加減辨治小兒咳嗽變異性哮喘緩解期臨床研究[J];遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào);2015年10期

7 魏肖云;汪受傳;;汪受傳教授從風(fēng)論治小兒咳嗽變異型哮喘經(jīng)驗(yàn)[J];中華中醫(yī)藥雜志;2015年07期

8 叢舒;方利文;馮雅靖;包鶴齡;王麗敏;王臨虹;;我國(guó)成年人支氣管哮喘患病狀況及影響因素分析[J];中國(guó)健康教育;2015年05期

9 蔣寶安;屈斌;鄭輝;王志亮;焦波;;支氣管哮喘的發(fā)病機(jī)制及藥物治療研究進(jìn)展[J];中國(guó)當(dāng)代醫(yī)藥;2015年13期

10 楊月娥;韓新民;;再論哮喘必當(dāng)活血通腑[J];長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào);2015年01期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前2條

1 陳婷;王叔和《脈經(jīng)》文獻(xiàn)研究[D];中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院;2009年

2 成建軍;《靈樞經(jīng)》的文獻(xiàn)研究[D];山東中醫(yī)藥大學(xué);2005年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前7條

1 王達(dá);射干麻黃湯對(duì)支氣管哮喘模型小鼠氣道重塑及TGF-β_1、1L-17A表達(dá)的影響[D];黑龍江中醫(yī)藥大學(xué);2017年

2 郭建波;加味定喘湯治療小兒喘息性支氣管炎（痰熱壅肺證）療效觀察[D];黑龍江中醫(yī)藥大學(xué);2017年

3 樸榮慶;益氣疏風(fēng)方治療氣虛風(fēng)動(dòng)證咳嗽變異性哮喘的臨床療效觀察[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2017年

4 張文欣;《說(shuō)文解字注》“凡從某聲皆有某義”疏證[D];四川外國(guó)語(yǔ)大學(xué);2017年

5 郭冉冉;白芥子散穴位貼敷對(duì)哮喘大鼠氣道炎癥的影響及對(duì)IL-4和IFN-γ調(diào)控機(jī)制的研究[D];山西中醫(yī)學(xué)院;2016年

6 韓燕;白芥子散對(duì)哮喘大鼠氣道炎癥的影響和免疫調(diào)節(jié)機(jī)制的研究[D];山西中醫(yī)學(xué)院;2015年

7 顧希茜;兒童哮喘家庭管理方式測(cè)評(píng)量表的初步研制[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2014年

本文編號(hào)：2778682