【摘要】：目的:觀察燈盞乙素(scutellarin,Scu)對(duì)β淀粉樣蛋白(amyloid-beta,Aβ)_(1-42)誘導(dǎo)的細(xì)胞模型中線粒體膜通透性轉(zhuǎn)換的幾個(gè)病理因素的影響,探討其對(duì)抗Aβ毒性損害的作用機(jī)制。方法:選用神經(jīng)母細(xì)胞瘤(SH-SY5Y)細(xì)胞分為對(duì)照組、Scu處理組、Aβ處理組和Scu+Aβ處理組,用CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞存活率篩選藥物濃度;用激光共聚焦顯微鏡觀察各組細(xì)胞的Ca~(2+)濃度和線粒體膜電位的變化;用熒光定量法測(cè)定各組細(xì)胞的活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;用化學(xué)發(fā)光法測(cè)定各組細(xì)胞的三磷酸腺苷(adenosine tripahosphate,ATP)含量;用蛋白印跡法檢測(cè)各組細(xì)胞中腺嘌呤核苷酸轉(zhuǎn)位酶2(adenine nucleotide translocase 2,ANT2)的表達(dá);用流式細(xì)胞儀測(cè)定各組細(xì)胞的總凋亡率。結(jié)果:與對(duì)照組相比,Scu處理組各指標(biāo)均無(wú)顯著性差異。(1)選取1.0μmol/L的Aβ_(1-42)和10μmol/L的Scu為后續(xù)實(shí)驗(yàn)藥物濃度。(2)與對(duì)照組(1.05±0.24)和Scu處理組細(xì)胞的Ca~(2+)平均光密度值(1.16±0.24)相比,Aβ處理組細(xì)胞的Ca~(2+)平均光密度值(2.33±0.10)升高(P0.05);Scu干預(yù)后,經(jīng)Aβ處理的細(xì)胞Ca~(2+)平均光密度值(1.77±0.06)有所降低(P0.05)。(3)與對(duì)照組(8.87±0.33)和Scu處理組細(xì)胞中的ROS含量(9.27±1.46)相比,Aβ處理組細(xì)胞的ROS含量(17.04±0.27)明顯升高(P0.05);Scu干預(yù)后,經(jīng)Aβ處理的細(xì)胞中的ROS含量(9.34±1.61)降低(P0.05)。(4)與對(duì)照組(0.85±0.07)和Scu處理組細(xì)胞中的ANT2蛋白相對(duì)表達(dá)量(0.93±0.05)相比,Aβ處理組細(xì)胞中ANT2蛋白相對(duì)表達(dá)量(0.19±0.04)明顯降低(P0.05);Scu干預(yù)后,經(jīng)Aβ處理的細(xì)胞內(nèi)ANT2表達(dá)量(0.69±0.14)有所升高(P0.05)。(5)與對(duì)照組(10.23±1.67)nmol/mg和Scu處理組細(xì)胞的ATP含量(10.85±1.82)nmol/mg相比,Aβ處理組細(xì)胞中的ATP含量(7.74±1.20)nmol/mg減少(P0.05);Scu干預(yù)后,經(jīng)Aβ處理的細(xì)胞ATP含量(9.42±1.84)nmol/mg有所增加(P0.05)。(6)與對(duì)照組(13.79±2.19)和Scu處理組細(xì)胞中線粒體內(nèi)JC-1綠紅熒光比值(14.44±1.45)相比,Aβ處理組細(xì)胞的熒光比值(51.23±0.58)增加(P0.05);Scu干預(yù)后,經(jīng)Aβ處理的細(xì)胞中線粒體內(nèi)JC-1熒光比值(37.72±0.75)降低(P0.05)。(7)與對(duì)照組(0.95±0.05)%相比和Scu處理組細(xì)胞的總凋亡率(1.44±0.08)%相比,Aβ處理組細(xì)胞的總凋亡率(26.20±2.32)%增加(P0.05);Scu干預(yù)后,經(jīng)Aβ處理的細(xì)胞總凋亡率(11.60±0.63)%降低(P0.05)。結(jié)論:Scu能夠改善ATP代謝和鈣超載,調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)ROS水平和線粒體膜電位異常,上調(diào)ANT2的蛋白表達(dá),可能通過(guò)介導(dǎo)線粒體膜通透性轉(zhuǎn)換孔的開(kāi)放來(lái)抑制凋亡的發(fā)生,減輕Aβ毒性所致的細(xì)胞損傷。
【學(xué)位授予單位】：貴州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R285
【圖文】：

圖1）表 3 不同濃度 Aβ1-42對(duì) SH-SY5Y 細(xì)胞存活率的影響Tab.3 The effect of different concentrations of Aβ1-42on the survival rate of SH-SY5Y cellsAβ1-42濃度（μmol/L） 細(xì)胞存活率（%）0 100.000.1 99.25±3.060.2 100.45±8.350.5 75.76±4.11*1.0 59.83±3.21△1.5 44.00±3.16△2.0 29.71±3.20△注：*與空白組相比，P<0.05；△與空白組相比，P<0.01。注：*與空白組相比，P<0.05；△與空白組相比，P<0.01。圖 1 不同濃度 Aβ1-42對(duì) SH-SY5Y 細(xì)胞存活率的影響Fig. 1 The effect of different concentrations of Aβ1-42on the survival rate of SH-SY5Y cells

細(xì)胞存活率分別為（99.62±3.04）%、（108.65±1.95±2.72）%、（82.18±3.08）%和（65.28±3.51）%。選用 10μmol/L實(shí)驗(yàn)的加藥濃度。（表 4，圖 2）表 4 不同濃度 Scu 對(duì) SH-SY5Y 細(xì)胞存活率的影響Tab.4 The effect of different concentrations of Scuon the survival rate of SH-SY5Y cellsScu 濃度（μmol/L） 細(xì)胞存活率（%）0 1005 99.62±3.0410 108.65±1.9520 94.91±2.7250 82.18±3.08*100 65.28±3.51△白組相比，P<0.05；△與空白組相比，P<0.01。

貴州醫(yī)科大學(xué) 2019 屆科學(xué)學(xué)位碩士研究生學(xué)位論文2.3 激光共聚焦檢測(cè)各組細(xì)胞內(nèi) Ca2+濃度各組細(xì)胞內(nèi) Ca2+濃度變化：與對(duì)照組 Ca2+平均光密度（1.05±0.24）相比，Scu 處理組細(xì)胞的平均光密度值（1.16±0.24）未見(jiàn)明顯變化（P>0.05）；與對(duì)照組和 Scu 處理組相比，Aβ 處理組細(xì)胞 Ca2+平均光密度值（2.33±0.10）升高（P<0.05）；Scu 干預(yù)后，經(jīng) Aβ 處理的 Ca2+平均光密度值（1.77±0.06）有所降低（P<0.05）。（圖 3，4）

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本文編號(hào)：2775715