【摘要】：目的本實驗通過建立水負荷大鼠模型,以尿量為指標,并通過免疫組化技術(shù)、RT-PCR、Western Blot方法對大鼠腎臟AQP2蛋白及mRNA的表達情況進行檢測和定位、定量分析,以呋塞米為對照藥物,觀察五苓散低劑量組、五苓散中劑量組、五苓散高劑量組對水負荷模型大鼠水液代謝的影響作用,從而探究其機制,為臨床治療水液代謝類疾病,在中藥復方制劑的應(yīng)用方面提供有效的理論基礎(chǔ)和實驗依據(jù)。方法取水負荷實驗合格的大鼠40只,隨機分為5組(n=5),即正常組(NG組)、呋塞米組(F組)、五苓散低劑量組(WLS-L組)、五苓散中劑量組(WLS-M組)、五苓散高劑量組(WLS-H組)。水負荷實驗結(jié)束后,立即將大鼠放入代謝籠內(nèi)(每籠一只)。正式實驗前,大鼠禁食不禁水,第二天各組大鼠分別按20ml·kg-1的灌胃體積灌服,后分別于灌胃后的第1、2、4、6、8、24h收集并測量大鼠尿量每天按時喂食,期間大鼠正常喂食。連續(xù)灌胃7d。實驗結(jié)束后,立即處死大鼠,迅速摘除腎臟。一只腎臟放入甲醛中以備免疫組化實驗使用,另一只用錫箔紙包好放入液氮中冷凍,后放入零下80℃的超低溫冰箱中以備Western Blot實驗及RT-PCR實驗使用。結(jié)果用藥后,通過對大鼠24h總尿液量的測量,發(fā)現(xiàn)與正常組相比,五苓散低劑量組和五苓散高劑量組24h總尿量變化無統(tǒng)計學意義(P0.05),而五苓散中劑量組及呋塞米組24h尿量變化存在明顯差異(P0.05);與呋塞米組比較,五苓散中劑量組24h尿量變化無差異性(P0.05)。與正常對照組相比,呋塞米組、五苓散中劑量組腎臟AQP2表達顯著降低,經(jīng)統(tǒng)計學分析,有統(tǒng)計學意義(P0.05),五苓散低劑量組以及五苓散高劑量組腎臟AQP2表達的改變無意義(P0.05)。與正常對照組相比,呋塞米組、五苓散中劑量組腎臟AQP2mRNA表達顯著降低,經(jīng)統(tǒng)計學分析,有統(tǒng)計學意義(P0.05),五苓散低劑量組以及五苓散高劑量組腎臟AQP2mRNA表達的改變無意義(P0.05)。結(jié)論1.本實驗通過建立水負荷大鼠模型,觀察傳統(tǒng)利尿藥五苓散與常用西藥速尿的區(qū)別,結(jié)果表現(xiàn)為五苓散有明顯的利尿作用,且具有長時性。2.呋塞米組及五苓散中劑量組(0.26g/kg),對水負荷模型大鼠有較好的利尿作用,且能有效降低大鼠腎臟組織中AQP2和AQP2mRNA的表達。3.五苓散低劑量組(0.13g/kg)、五苓散高劑量組(0.52g/kg)對水負荷模型大鼠利尿作用不明顯。
【學位授予單位】：黑龍江中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5
【圖文】：

黑龍江中醫(yī)藥大學碩士學位論文Ｉ邐逡逑表１各組大鼠連續(xù)給藥后第７ｄ的２４ｈ尿量（ｍｌ）變化（＾±八ｎ二８）逡逑分組邐組數(shù)邐２４ｈ總尿量逡逑ＮＧ邐８邐１２．７９±０．５８逡逑ＷＬＳ－Ｌ邐８邐１３．８８±０．邋３７＊逡逑ＷＬＳ－Ｍ邐８邐１９．０６±０．７０ａ逡逑ＷＬＳ－Ｈ邐８邐１４．邋０１邋±０．５９＊逡逑Ｆ邐８邐１９．４１±０．７６ａ逡逑ｂ邋ＮＧ邋組比較，＊Ｐ＞０．０５，ＡＰｃＯ．ＯＳ，▲Ｐ＜０．０５；丨ｉＦ邋比較，ＡＰ＞０．０５逡逑

——■［逡逑圖１大鼠第７ｄ的２４ｈ尿量逡逑邐表２各組大鼠給藥Ｉｄ各時間點尿最（ｍｌ邋）變化（，邋ｎ邋＝邋８）邐逡逑分組邐ｌｈ邐２ｈ邐４ｈ邐６ｈ邐８ｈ逡逑ＮＧ邐２．０４±０．３７邐３．３５±０．５６邐４．１１邋±０．５７邐５．９８±０．４８邐６．８５±０．９Ｉ逡逑ＷＬＳ－Ｌ邐２．６１邋±０．４４邋‘邐４．１３±０．３８＊邐５．２１邋土邋０．３９＊邐６．７３±０．５８’邐８．３８±０．５３‘逡逑ＷＬＳ－Ｍ邐３．５３±０．３７ａ邐６．１３±０．４８ａ邐８．６８±０．５５ａ邐１Ｉ．２６±０．９１ａ邐１３．２３邋±０．７８＇＇逡逑ＷＬＳ－Ｈ邐２．２１±０．３６‘邐４．０９±０．５１＊邐５．１５±０．３８＊邐７．０８邋士邋０．７５＊邐８．５邋丨土邋０．７８＊逡逑Ｆ邐４．２０±０．７５Ａ邐６．１９±０＿６４＆邐８．７６±０＿７１Ａ邐１２．Ｉ６±０．８９Ａ邐Ｉ４＿２５±０．６Ａ逡逑ｂ＇ＮＧａｉ邋比較，ａＰ＜０．０５，邋▲ＰＣ０．０５，邋＊Ｐ＞０．０５；邋ＳＦ邋比較，ａＰ＞０．０５．逡逑３３逡逑

圖５邋ＡＱＰ２ｍＲＮＡ的表達逡逑

【參考文獻】

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本文編號：2774670