【摘要】：樺褐孔菌在俄羅斯,日本,荷蘭和芬蘭等國家的部分地區(qū)作為偏方緩解疼痛和炎癥已經(jīng)超過4個(gè)世紀(jì)。大量研究表明,樺褐孔菌多糖(Inonotus obliquus polysaccharide)具有抗氧化和抗炎活性,可以緩解結(jié)腸炎、艾滋病和癌癥等疾病。慢性胰腺炎(chronic pancreatitis)是一種由遺傳因素或環(huán)境因素引起的伴隨有疼痛、纖維化、炎癥反應(yīng)及細(xì)胞壞死的疾病。而多糖可以有效緩解代謝疾病并作為益生源調(diào)節(jié)腸道菌群。本研究通過水提-醇沉法提取樺褐孔菌多糖,并使用DEAE-纖維素層析柱和Sephadex G-200層析柱進(jìn)一步純化樺褐孔菌多糖。采用物理和化學(xué)方法分析多糖的結(jié)構(gòu)特征及抗氧化活性。使用二乙基二硫代氨基甲酸鹽(diethyldithiocarbamate,DDC)腹腔注射獲得慢性胰腺炎小鼠,通過小鼠體重變化、胰腺組織切片、羥脯氨酸水平、組織抗氧化能力、代謝相關(guān)酶含量以及細(xì)胞因子水平揭示多糖對(duì)慢性胰腺炎的緩解作用。通過小鼠糞便高通量測序結(jié)果分析慢性胰腺炎小鼠腸道菌群變化。本研究獲得以下結(jié)果:(1)采用水提-醇沉法提取獲得樺褐孔菌粗多糖,經(jīng)DEAE-纖維素層析柱純化獲得IOP-Ⅰ、IOP-Ⅱ和IOP-Ⅲ三個(gè)組分,得率分別為38.2%,9.3%和10.5%。IOP-Ⅰ組分得率和多糖含量均最高,故將該組分經(jīng)Sephadex G-200層析柱再次純化。最終獲得IOP的多糖含量為98.6%。(2)IOP為均質(zhì)性的β-吡喃型多糖,分子量為32.5 kDa,單糖組成為甘露糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖、木糖和阿拉伯糖,其摩爾比為9.8:13.6:29.1:20.5:21.6:5.4。(3)IOP濃度為1-5 mg/m L時(shí),鐵還原能力、DPPH自由基清除活性和羥自由基清除活性都隨IOP濃度的增加而增強(qiáng),且當(dāng)濃度達(dá)到5 mg/m L時(shí)IOP的DPPH自由基清除活性和羥自由基清除活性均趨近于抗壞血酸。(4)IOP可以提高慢性胰腺炎小鼠體重增長率、SOD、GSH-Px、TAOC以及代謝相關(guān)酶含量,降低羥脯氨酸、MDA和細(xì)胞因子水平,改善小鼠胰腺組織病理程度。這些結(jié)果表明IOP對(duì)DDC引誘的慢性胰腺炎小鼠有明顯的緩解作用,且IOP-L、IOP-M和IOP-H三個(gè)劑量組隨著IOP濃度的增加對(duì)慢性胰腺炎的緩解作用逐漸增強(qiáng),IOP-H組效果最好。(5)高通量測序結(jié)果表明,IOP可以有效調(diào)節(jié)腸道菌群的結(jié)構(gòu)及多樣性。聚類分析和主成分分析結(jié)果直觀的說明了DDC引誘擾亂了腸道菌群的結(jié)構(gòu)。在門水平上,DDC引誘減少了Bacteroidetes含量,增加了Firmicutes含量。在屬水平上,減少了Lactobacillus,Bacteroides,unclassified S24-7,unclassified Lachnospiraceae,unclassified Prevotellaceae,Roseburia和Prevotella的含量,而增加了Alistipes,Incertae_Sedis,Helicobacter,Parabacteroides和Rikenella。但I(xiàn)OP可以有效調(diào)節(jié)這些菌群的變化,使它們向正常小鼠方向轉(zhuǎn)變。這些結(jié)果表明IOP能夠有效調(diào)節(jié)慢性胰腺炎小鼠的腸道菌群。
【學(xué)位授予單位】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R285.5
【圖文】：

研究技術(shù)路線

圖 3-1 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig. 3-1 Standard curves of glucose與純化的樺褐孔菌粗多糖提取率為 9.83%，多糖含量為 23.6

3-2 DEAE-纖維素層析柱（a）和 Sephadex G-200 柱（b）洗脫 IOP 曲3-2 Chromatogram of IOP on the anion-exchange DEAE cellulose column Sephadex G-200 column (a)儀分析獲得的 IOP 紅外光譜如圖 3-3 所示，在 3390 cm-1附近出現(xiàn)了一峰，表明該多糖含有 OH 基團(tuán)[100]。而在 2934 cm-1附近出現(xiàn)了一個(gè)伸

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2770266