發(fā)布時(shí)間：2020-07-25 07:20

【摘要】：目的觀察雷公藤多苷(Tripterygium glycosides,TG)和腫瘤壞死因子(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)抑制劑晝夜不同時(shí)間給藥對(duì)大鼠膠原誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎(Collagen-induced arthritis,CIA)的治療作用及其炎性細(xì)胞因子、生物鐘基因蛋白表達(dá)的影響,為臨床開展類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)的時(shí)間治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法1 CIA造模及分組:Wistar大鼠,雄性80只,飼養(yǎng)于時(shí)間生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室,明期為08:00~20:00,暗期為20:00~08:00,馴化10天后進(jìn)行CIA造模,造模成功的大鼠通過進(jìn)行隨機(jī)分組,TG組分為早8:00(ZT0)組與晚8:00(ZT12)組;TNF抑制劑為早8:00(ZT0)組與晚8:00(ZT12)組,TG組灌胃(10mg/kg),1/日;TNF抑制劑組皮下注射(6mg/kg),1/周,持續(xù)給藥28天;空白組與模型組等量的羧甲基纖維素鈉灌胃。干預(yù)結(jié)束后,留取標(biāo)本。2實(shí)驗(yàn)方法:在治療開始后每周使用足趾容積測(cè)量?jī)x測(cè)量大鼠關(guān)節(jié)容積變化;在治療28天后,拍各組大鼠雙足或前爪正位X線片,處死大鼠,留取血清,檢測(cè)TNF-α和白介素-6(interleukin-6,IL-6)表達(dá)水平;留取各組大鼠踝關(guān)節(jié),在顯微鏡下觀察大鼠踝關(guān)節(jié)滑膜組織病理形態(tài),并采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)關(guān)節(jié)滑膜TNF-α、IL-6、IL-17 A、BMAL1及CLOCK表達(dá)水平;藥物干預(yù)結(jié)束后,對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。3統(tǒng)計(jì)方法:使用IBM SPSS21.0軟件進(jìn)行分析,符合正態(tài)分布計(jì)量資料均采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示。多組間比較采用單因素方差分析(one-way ANOVA)處理;兩兩比較,方差齊時(shí)采用LSD法檢驗(yàn);方差不齊時(shí)采用Dunnett’s T3法檢驗(yàn),檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)為α=0.05。結(jié)果1各組大鼠足趾容積的變化:空白組大鼠足趾容積無明顯變化,模型組大鼠足趾容積呈增長(zhǎng)趨勢(shì)。TG組比較,發(fā)現(xiàn)TG-ZT12組的足趾容積小于TG-ZT0組,治療4周后,TG-ZT12組的足趾容積小于模型組(P0.05);TNF抑制劑-ZT0組足趾容積則小于TNF抑制劑-ZT12組,治療4周后,TNF抑制劑-ZT0組足趾容積則小于模型組(P0.05)。2各組大鼠踝關(guān)節(jié)X線觀察:空白組大鼠踝關(guān)節(jié)的X線未見異常。模型組雙踝關(guān)節(jié)關(guān)節(jié)面骨質(zhì)不均,可見明顯缺損,掌指關(guān)節(jié)可見塊狀骨缺損,關(guān)節(jié)間隙明顯變窄。TG兩組比較,ZT12組關(guān)節(jié)損傷輕于T0組。TNF抑制劑兩組比較,ZT0組關(guān)節(jié)損傷輕于ZT12組。3各組大鼠血清TNF-α和IL-6水平:干預(yù)結(jié)束后,與模型組相比,TG兩組與TNF抑制劑兩組血清TNF-α和IL-6水平顯著下降(P0.05)。TG-ZT12組血清TNF-α和IL-6水平顯著低于TG-ZT0組(P0.05)。TNF抑制劑-ZT0組血清TNF-α和IL-6水平顯著低于TNF抑制劑-ZT12組(P0.05)。4各組CIA大鼠踝關(guān)節(jié)病理學(xué)觀察:空白組大鼠踝關(guān)節(jié)病理染色未見異常。模型組大鼠踝關(guān)節(jié)病理染色可見滑膜細(xì)胞嚴(yán)重增生,出現(xiàn)炎細(xì)胞大量浸潤(rùn)及乳頭狀突起。TG-ZT12組與TG-ZT0組比較,炎細(xì)胞浸潤(rùn)少見和滑膜細(xì)胞增生較輕;TNF抑制劑ZT0組與TNF抑制劑ZT12組比較,炎細(xì)胞浸潤(rùn)少見和滑膜細(xì)胞增生較輕。5免疫組織化學(xué)檢測(cè)TNF-α、IL-6、IL-17A、BMAL1及CLOCK在大鼠踝關(guān)節(jié)的表達(dá)觀察:免疫組織化學(xué)法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)模型組大鼠踝關(guān)節(jié)滑膜細(xì)胞的炎性細(xì)胞因子TNF-α、IL-6及IL-17 A表達(dá)水平均顯著高于空白組;同時(shí)TG-ZT12組比TG-ZT0組及TNF抑制劑ZT0組與TNF抑制劑ZT12組比較,滑膜細(xì)胞TNF-α、IL-6及IL-17 A表達(dá)均有不同程度下降。晝夜節(jié)律蛋白BMAL1和CLOCK表達(dá)與炎性細(xì)胞因子相似,TG-ZT12組比TG-ZT0組及TNF抑制劑ZT0組與TNF抑制劑ZT12組比較,表達(dá)均有不同程度下降。結(jié)論1 TG和TNF抑制劑均能有效減輕關(guān)節(jié)腫脹,抑制炎性細(xì)胞因子,減輕CIA大鼠踝關(guān)節(jié)影像學(xué)進(jìn)展,減少晝夜節(jié)律蛋白BMAL1和CLOCK表達(dá)。2多靶點(diǎn)抗風(fēng)濕藥-TG與單靶點(diǎn)抗風(fēng)濕藥-TNF抑制劑早晚最佳療效時(shí)間存在差異。
【學(xué)位授予單位】：華北理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R285.5
【圖文】：

圖 1 TG-ZT0 組大鼠 X 線,分別為左足、右足、前爪Fig.1 TG-ZT0 rats X-ray, respectively, left foot, right foot, front paw

圖 2 TG-ZT12 組大鼠 X 線,分別為左足、右足Fig.2 TG-ZT12 rats X-ray, respectively, left and right foot

- 9 -圖 3 TNF 抑制劑 ZT0 組大鼠 X 線,分別為左足、右足Fig.3 TNF inhibitor ZT0 group X-ray rats, respectively, the left foot and right foot

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2769502