【摘要】：【目的】以中醫(yī)藥理論為基礎(chǔ),運用生藥學(xué)鑒定方法對藥典所載陳皮進(jìn)行性狀比較研究,通過薄層鑒別建立四種陳皮的薄層鑒定方法,通過建立陳皮有效成分的含量測定方法及結(jié)合藥理藥效實驗,以及通過GC-MS對四種陳皮揮發(fā)油進(jìn)行測定及結(jié)合藥理實驗進(jìn)行比較研究,對藥典四種陳皮進(jìn)行比較研究,以期為找尋廣陳皮有效替代品提供參考和為開發(fā)陳皮臨床應(yīng)用以及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供科學(xué)依據(jù)�！痉椒ā�1、運用生藥學(xué)鑒定方法,對藥典所載四個品種陳皮進(jìn)行性狀鑒別和顯微鑒定,分析四個品種陳皮性狀和顯微差異。2、通過藥典所載對陳皮、枳殼和化橘紅等柑橘屬的薄層鑒定方法,分別對上述三種藥材進(jìn)行薄層鑒定,使用聚酰胺薄膜層析方法對三種中藥材的薄層進(jìn)行檢識,比較兩種方法。3、建立陳皮中主要活性成分的HPLC含量測定方法,并結(jié)合正常小鼠小腸推進(jìn)和止咳祛痰實驗,分析比較藥典所載四種陳皮的差異。4、運用現(xiàn)代提取分析技術(shù),提取藥典所載四種陳皮中的揮發(fā)油,通過GC-MS分析,分析不同陳皮間揮發(fā)油中的成分的差異性。5、以藥典所載四大陳皮中的揮發(fā)油為供試品,對兔離體小腸平滑肌的影響,以找尋與陳皮功能主治相吻合的活性成分,探討其對兔離體小腸平滑肌的量效曲線關(guān)系,并初步探討其藥效作用機(jī)制�！窘Y(jié)果】1、在性狀鑒別方面,可以通過果皮厚度、氣味差異以及對光透視的油室大小和密集程度對其進(jìn)行區(qū)分,而其他方面的特征對陳皮品種的鑒別也起到一定的輔助作用;在顯微鑒定方面,可以通過橙皮苷結(jié)晶和草酸鈣結(jié)晶形態(tài)和數(shù)量進(jìn)行區(qū)分。2、照2015版《中華人民共和國藥典》第四部:薄層色譜法(通則0502)試驗,藥典所載薄層方法無法將三種藥材中的橙皮苷、新橙皮苷和柚皮苷完全區(qū)分,聚酰胺薄膜層析法可同時鑒別三種藥材中的橙皮苷、新橙皮苷和柚皮苷。3、建立了陳皮主要活性成分含量測定的方法,并對藥典所載四個品種來源陳皮中的橙皮苷、川陳皮素、七甲氧基黃酮和橘皮素進(jìn)行了含量測定。結(jié)合正常小鼠小腸推進(jìn)和止咳祛痰實驗,大紅袍、茶枝柑、溫州蜜柑和福橘水煎液均對小鼠小腸推進(jìn)有促進(jìn)作用,且均具有一定的止咳祛痰的作用。其中大紅袍和茶枝柑中橙皮素、川陳皮素、七甲氧基黃酮和橘皮素的含量相近,但茶枝柑的小腸推進(jìn)的促進(jìn)作用最為顯著且止咳祛痰效果最佳。4、陳皮揮發(fā)油的提取作用實驗結(jié)果表明,大紅袍的揮發(fā)油得率為3.47%,茶枝柑的揮發(fā)油得率為4.54%,溫州蜜柑的揮發(fā)油得率為3.57%,福橘的揮發(fā)油得率為6.14%;通過GC-MS得到江西新干產(chǎn)大紅袍陳皮樣品揮發(fā)油的總離子流圖,發(fā)現(xiàn)藥典所載四種陳皮均含有α-蒎烯、檜烯、β-蒎烯、β-月桂烯、α-萜品烯、D-檸檬烯、g-萜品烯、萜品油烯、香茅醛、b-欖香烯、(Z)-石竹烯、大根香葉烯、g-欖香烯等13種共有成分。通過使用past軟件對GC-MS數(shù)據(jù)進(jìn)行主成分分析和聚類分析大致可將陳皮分為廣東新會茶枝柑樣品與其它地區(qū)樣品兩類。5、藥理試驗不同濃度的揮發(fā)油對不同部位離體小腸平滑肌大體都有一定的舒張作用,其中終濃度為1×10~-55 mL/mL陳皮揮發(fā)油對離體小腸的舒張作用最為明顯,可以該濃度作為離體小腸的最大抑制濃度;相比較其他兩種陳皮而言,福橘與蜜柑揮發(fā)油對十二指腸的抑制作用較為顯著,且具有成一定量效關(guān)系(*P0.05,**P0.01)。乙酰膽堿能使離體兔腸肌痙攣,且乙酰膽堿對兔離體腸肌的最大致痙攣終濃度為5.0×10-7 mol/L(即給藥濃度1.0×10-3mol/L,10μL);磷酸組胺能使離體兔腸肌痙攣,磷酸組胺對兔離體腸肌的最大致痙攣濃度為1.5×10-5 mol/L(即1.5×10-2mol/L,20μL);陳皮揮發(fā)油能有效抑制乙酰膽堿、磷酸組胺所導(dǎo)致的小腸痙攣�！窘Y(jié)論】1、可以通過性狀鑒別和顯微鑒定的方法,比較藥典所載四種陳皮的性狀和顯微特征,初步對藥典所載四種陳皮進(jìn)行區(qū)分鑒別。2、照2015版《中華人民共和國藥典》第四部:薄層色譜法(通則0502)試驗,藥典所載薄層方法無法將三種藥材中的橙皮苷、新橙皮苷和柚皮苷完全區(qū)分,聚酰胺薄膜層析法可同時鑒別三種藥材中的橙皮苷、新橙皮苷和柚皮苷。以氯仿-甲醇-丙酮=15:3.5:1.5為展開劑,10%三氯化鋁乙醇溶液為顯色劑,對陳皮、枳殼和化橘紅提取物中的橙皮苷、新橙皮苷和柚皮苷等黃酮苷類成分進(jìn)行聚酰胺薄膜層析定性鑒別效果較好,且分離效果良好,斑點圓潤。表明該方法簡便、快捷、清晰、準(zhǔn)確可靠,專屬性強,通用性好,可作為枳殼、陳皮和化橘紅中的橙皮苷、新橙皮苷和柚皮苷的定性鑒別。3、通過建立陳皮有效成分的含量測定方法,結(jié)合藥理實驗,對藥典所載四種陳皮進(jìn)行比較研究,找出與廣陳皮相近的其他品種陳皮。4、通過使用past軟件對GC-MS數(shù)據(jù)進(jìn)行主成分分析和聚類分析大致可將陳皮分為廣東新會茶枝柑樣品與其它地區(qū)樣品兩類,可用于新會陳皮和其它不同品種來源陳皮的鑒別。5、陳皮揮發(fā)油能夠抑制乙酰膽堿與磷酸組胺所造成的離體腸痙攣,表明了陳皮揮發(fā)油對胃腸道抑制作用可能是通過影響神經(jīng)遞質(zhì)乙酰膽堿、組胺的分泌來抑制胃腸蠕動或是直接作用于胃腸平滑肌來減少胃腸運動頻率的。
【學(xué)位授予單位】：江西中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R284.1
【圖文】：

α-蒎烯（α-Pinene） γ-松油烯（γ- terpinene）圖 2 陳皮揮發(fā)油中四種主要成分Figure 2 Four main components in the volatile oil of dried tan2.2 黃酮類黃酮類化合物是陳皮的一大類生理活性成分，包括黃酮苷類和苷類主要為橙皮苷（hesperidin）、新橙皮苷（neohesperidin）、柚皮皮苷（narirutin）等。皮達(dá)等[13]對陳皮的黃酮苷類成分進(jìn)行了薄層有橙皮苷、新橙皮苷和柚皮苷。以上四種黃酮苷類化合物的結(jié)構(gòu)OOOH OOOHOOHHH2CCH3OHOOH3OOOOHOHOHOOCH3OHOH HO

陳皮素、七甲氧基黃酮和橘皮素）含量測定方法，并結(jié)合現(xiàn)代藥理實驗（小腸推進(jìn)試驗、止咳化痰實驗），最后通過 GC-MS 分析比較四者揮發(fā)油的含量，結(jié)合藥理實驗（兔離體腸實驗），從活性成分（橙皮苷、川陳皮素、七甲氧基黃酮和橘皮素）及揮發(fā)油含量差異，藥理作用的差異方面，開展四大陳皮的比較研究，找尋與廣陳皮成分療效相近的陳皮樣品，為開發(fā)陳皮的臨床應(yīng)用和建立其客觀評價的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供科學(xué)依據(jù)。技術(shù)路線圖如圖 1。

15圖 7 四種陳皮的性狀鑒定圖Figure 7 Character identification of four tangerine peels（1：大紅袍；2：茶枝柑；3：溫州蜜柑；4：福橘）表 4 四種陳皮性狀特征表Tab 4 Identification and Contrast Results of Four Peel Characters of Citrus tangerine

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