【摘要】：惡性腫瘤是威脅我國人民健康和生命安全的隱形殺手,是造成全球死亡人數(shù)最多的高發(fā)性疾病之一。因此,有效預(yù)防及控制癌癥的發(fā)生和發(fā)展成為了全世界所關(guān)注的共同問題。然而傳統(tǒng)的治療手段依然存在許多弊端,如治療藥物毒副作用大,病灶易復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移,患者預(yù)后不良等,所以急需尋找安全有效的癌癥治療藥物。鼠尾草屬迷迭香植物具有廣泛的藥用、工業(yè)和食用價(jià)值,其枝葉中含量極為豐富的鼠尾草酸(CA)是一種重要的酚二萜類天然產(chǎn)物,具備抗氧化、抗腫瘤、抗炎等多種活性功能。為了充分利用迷迭香資源,使其有效成分發(fā)揮出最大功效和作用,本文選擇對(duì)鼠尾草酸體內(nèi)外抗肝癌活性及相關(guān)作用機(jī)制進(jìn)行深入研究。首先,本研究充分利用HepG2和SMMC-7721肝癌細(xì)胞模型,分別通過細(xì)胞活力檢測、細(xì)胞增殖抑制實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞內(nèi)ROS水平檢測、線粒體膜電位測量和western blot等一系列體外實(shí)驗(yàn)對(duì)鼠尾草酸進(jìn)行了抗腫瘤活性評(píng)價(jià)及相關(guān)凋亡機(jī)制分析。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,鼠尾草酸作用于肝癌細(xì)胞HepG2和SMMC-7721的半抑制濃度分別為43.7和74.8μM(P0.001),增殖抑制實(shí)驗(yàn)結(jié)果和MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果相一致,說明鼠尾草酸能夠發(fā)揮腫瘤抑制作用。同時(shí)鼠尾草酸不僅能誘導(dǎo)G2/M期周期阻滯,增加細(xì)胞內(nèi)caspase-3,-8和-9的酶活力,還將誘發(fā)細(xì)胞內(nèi)活性氧積累,改變線粒體膜電位。Western blot分析也顯示肝癌細(xì)胞中促凋亡蛋白Bax和Bad表達(dá)水平升高,而Bcl-2蛋白表達(dá)水平降低,表明鼠尾草酸是通過調(diào)節(jié)凋亡蛋白的表達(dá)量來誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生凋亡。其次,為了考察ROS在鼠尾草酸誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡過程中的作用。選擇在實(shí)驗(yàn)中加入了1 mM活性氧抑制劑NAC預(yù)處理細(xì)胞30 min,再與60μM CA共孵育24 h后重復(fù)上述實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,與單獨(dú)的CA處理組相比,NAC預(yù)處理組將HepG2和SMMC-7721細(xì)胞活力分別提高了81.9%和29.3%(P0.05),并相應(yīng)降低了細(xì)胞內(nèi)ROS水平,逆轉(zhuǎn)MMP耗散,以及改變了促凋亡蛋白和對(duì)抗凋亡蛋白的表達(dá)水平。因此,鼠尾草酸在體外的腫瘤抑制作用與細(xì)胞內(nèi)ROS的累積密切相關(guān)。最后,為了進(jìn)一步探究鼠尾草酸在線粒體凋亡途徑中涉及的體內(nèi)抗腫瘤機(jī)制,本實(shí)驗(yàn)又建立了HepG2-和SMMC-7721-異種移植腫瘤小鼠模型。經(jīng)過兩周藥物治療后,發(fā)現(xiàn)CA給藥組和空白組的小鼠體重變化不明顯,肝臟病理切片結(jié)果中也未出現(xiàn)顯著差異,表明其對(duì)正常細(xì)胞和器官的安全性。與空白組相比,CA給藥組腫瘤體積分別減少了88.8%和83.0%(P0.05)。鼠尾草酸還降低了兩種類型腫瘤組織中mTOR和NF-κB的磷酸化作用,且腫瘤組織內(nèi)線粒體相關(guān)蛋白表達(dá)水平也與體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果保持一致。研究還發(fā)現(xiàn)經(jīng)鼠尾草酸治療后能增加腫瘤組織中IL-2的表達(dá)水平,說明鼠尾草酸對(duì)腫瘤生長的抑制作用可能還與其免疫系統(tǒng)的調(diào)節(jié)有關(guān),但具體涉及的調(diào)控機(jī)制還有待大量實(shí)驗(yàn)證實(shí)。綜上所述,鼠尾草酸作為天然活性提取物,表現(xiàn)出良好的抗肝癌作用,是一種極具潛力的腫瘤治療藥物,其作用機(jī)制主要是通過ROS介導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)源性線粒體信號(hào)通路引發(fā)肝癌細(xì)胞凋亡,本研究也為鼠尾草酸進(jìn)一步治療和預(yù)防人類癌癥疾病提供了理論依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R285
【圖文】：

鼠尾草酸的化學(xué)結(jié)構(gòu)式

圖 3.1 CA 對(duì)肝癌細(xì)胞 HepG2 和 SMMC-7721 細(xì)胞活力的影響Figure 3.1 Effects of CA on the cell viability of hepatocellular carcinoma cells.3.1.2 CA 對(duì)細(xì)胞增殖的影響

圖 3.3 CA 對(duì)肝癌細(xì)胞 HepG2 和 SMMC-7721 遷移能力的影響（10×）Figure 3.3 Effects of CA on the migration of hepatocellular carcinoma cells. (10×)在 30 或 60 μM CA 作用 24 h 后，HepG2 和 SMMC-7721 細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)遷移能

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 李艷;譚新敏;羅成;;鼠尾草酸的神經(jīng)保護(hù)作用[J];生命的化學(xué);2018年01期

2 夏田娟;畢良武;趙振東;;鼠尾草酸的生物活性研究進(jìn)展[J];天然產(chǎn)物研究與開發(fā);2014年09期

3 劉佳;于浩飛;張榮平;胡煒彥;魏靜;姜曉楠;張勇;張?zhí)m春;;乙酰化鼠尾草酸的穩(wěn)定性及對(duì)海馬神經(jīng)元的保護(hù)作用[J];中藥藥理與臨床;2018年03期

4 楊磊;劉芳;王化;王涵;張瑩;祖元?jiǎng)?;鼠尾草酸的抗氧化活性及對(duì)魚油的氧化穩(wěn)定性[J];中國食品學(xué)報(bào);2010年03期

5 李顥;陳學(xué)良;侯明;;鼠尾草酸和促進(jìn)白血病細(xì)胞分化凋亡及逆轉(zhuǎn)維甲酸耐藥的研究[J];中國實(shí)用內(nèi)科雜志;2007年S1期

6 馬征;胡春生;楊智;馬曉寧;;鼠尾草酸的遺傳毒性研究[J];藥物評(píng)價(jià)研究;2015年06期

7 魏靜;王尚文;于浩飛;趙榮華;王扣;張榮平;;迷迭香葉中鼠尾草酸的提取工藝研究[J];昆明醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2015年01期

8 李大偉;畢良武;趙振東;;鼠尾草酸提取和純化方法研究進(jìn)展[J];林產(chǎn)化學(xué)與工業(yè);2010年05期

9 ;微波輻射預(yù)處理對(duì)迷迭香(Rosmarinus officinalis L.)貯藏過程中抗氧化成分含量的影響及微波提取精油的研究[J];保鮮與加工;2012年03期

10 陶萍華;文曉林;王雅珍;毛根祥;;鼠尾草酸延緩人胚肺二倍體成纖維2BS細(xì)胞衰老的實(shí)驗(yàn)研究[J];營養(yǎng)學(xué)報(bào);2014年03期

相關(guān)會(huì)議論文 前6條

1 劉潔;屈秋民;;鼠尾草酸對(duì)Aβ25-35誘導(dǎo)SH-SY5Y細(xì)胞損傷的保護(hù)作用及其與自噬的關(guān)系[A];第四屆全國癡呆與認(rèn)知障礙學(xué)術(shù)研討會(huì)及高級(jí)講授班論文匯編[C];2015年

2 劉潔;屈秋民;;鼠尾草酸對(duì)Aβ神經(jīng)毒性的保護(hù)作用及其與自噬的關(guān)系[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十八次全國神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編（上）[C];2015年

3 邵薈竹;黃鸝;周琴;姚繼紅;;鼠尾草酸在HepG_2細(xì)胞中對(duì)醌氧化還原酶1(NQO1)的誘導(dǎo)作用及其與轉(zhuǎn)錄因子Nrf2之間的關(guān)系[A];中國藥理學(xué)會(huì)第十次全國學(xué)術(shù)會(huì)議�？痆C];2009年

4 陳雙懂;王均爐;;鼠尾草酸在大鼠神經(jīng)病理性疼痛中的鎮(zhèn)痛作用及機(jī)制研究[A];浙江省神經(jīng)科學(xué)學(xué)會(huì)2015年會(huì)暨第七屆寧波大學(xué)神經(jīng)科學(xué)高級(jí)論壇摘要集[C];2015年

5 信紅亞;曾貴榮;劉學(xué)武;羅桂芳;周應(yīng)軍;姜德建;陳方平;;鼠尾草酸抑制ox-LDL誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞組織因子表達(dá)及機(jī)制研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)血液學(xué)分會(huì)第十三屆全國血栓與止血學(xué)術(shù)會(huì)議暨“血栓栓塞性疾病（血栓與止血）基礎(chǔ)與臨床研究進(jìn)展”論文摘要匯編及學(xué)習(xí)班講義[C];2011年

6 王冉;李顥;陳學(xué)良;侯明;;鼠尾草酸誘導(dǎo)白血病細(xì)胞凋亡的體內(nèi)研究[A];第11次中國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)會(huì)議論文匯編[C];2007年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前5條

1 祖歌;迷迭香主要活性成分的綠色分離技術(shù)及其應(yīng)用研究[D];東北林業(yè)大學(xué);2012年

2 王化;迷迭香天然活性成分的提取及應(yīng)用研究[D];東北林業(yè)大學(xué);2011年

3 相啟森;鼠尾草酸抗氧化、抗腫瘤生物學(xué)功能及其分子機(jī)制研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2013年

4 閆海霞;鼠尾草酸在大鼠體內(nèi)的藥物動(dòng)力學(xué)及代謝研究[D];沈陽藥科大學(xué);2008年

5 王魯群;鼠尾草酸逆轉(zhuǎn)白血病細(xì)胞多藥耐藥的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究[D];山東大學(xué);2015年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前7條

1 李欣;鼠尾草酸抗肝癌活性及作用機(jī)制研究[D];吉林大學(xué);2018年

2 劉芳;迷迭香鼠尾草酸的分離純化及抗氧化作用研究[D];東北林業(yè)大學(xué);2010年

3 李大偉;迷迭香葉活性成分超聲輔助提取與分離的研究[D];中國林業(yè)科學(xué)研究院;2012年

4 劉明家;迷迭香組織培養(yǎng)及體內(nèi)迷迭香酸和鼠尾草酸含量測定[D];東北林業(yè)大學(xué);2012年

5 馬一駿;鼠尾草酸通過抑制炎癥相關(guān)的血腦屏障破壞減輕蛛網(wǎng)膜下腔出血后的早期腦損傷[D];浙江大學(xué);2017年

6 劉振國;鼠尾草酸對(duì)四氯化碳誘導(dǎo)肝細(xì)胞損傷的作用研究[D];中南大學(xué);2011年

7 魏靜;迷迭香中鼠尾草酸活性成分及其藥理作用[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2015年

本文編號(hào)：2765105