【摘要】：目的:我們前期研究發(fā)現(xiàn)雷公藤內(nèi)酯醇(triptolide,TP)可抑制耐順鉑人上皮性卵巢癌細胞生長,促進細胞凋亡。但TP屬實驗用品尚未應(yīng)用于臨床,臨床上廣泛用于治療免疫性疾病的成品藥是雷公藤多苷(tripterygium glycosides,GTW),而TP是GTW的主要活性成分。GTW能抑制鼻咽癌細胞以及多種血液系統(tǒng)惡性腫瘤細胞生長,但GTW對耐順鉑人上皮性卵巢癌的作用未見文獻報道。因此,本課題通過體外實驗觀察雷公藤多苷對耐順鉑人上皮性卵巢癌SKOV3/DDP細胞株的順鉑增敏作用,探討其作用機制,為雷公藤多苷有望成為耐順鉑卵巢癌的輔助治療或順鉑增敏藥物提供實驗依據(jù)。方法:1.用不同濃度(0、0.625、1.25、2.5、5、10、20、40、80μg/ml)順鉑(DDP)分別處理SKOV3/DDP細胞24h后,Cell Counting Kit-8(CCK8)法檢測SKOV3/DDP細胞的存活率。2.用不同濃度(0、50、200、800、1600、3200μg/ml)GTW分別處理SKOV3/DDP細胞24h后,CCK8法檢測SKOV3/DDP細胞的存活率。3.將對數(shù)生長期SKOV3/DDP細胞隨機分為8組:(1)空白對照組、(2)10μg/ml DDP組、(3)50μg/ml GTW組、(4)800μg/ml GTW組、(5)3200μg/ml GTW組、(6)10μg/ml DDP+50μg/ml GTW組、(7)10μg/ml DDP+800μg/ml GTW組、(8)10μg/ml DDP+3200μg/ml GTW組,相應(yīng)藥物作用24h后,CCK8法檢測各組細胞的存活率。4.流式細胞術(shù)檢測上述各組細胞凋亡率。5.細胞劃痕實驗觀察以上8組細胞給藥前后細胞的平均遷移距離。6.Transwell遷移實驗觀察以上8組細胞遷移能力改變。7.Transwell侵襲實驗觀察以上8組細胞侵襲能力改變。8.Western blot技術(shù)分析以上8組細胞Gst-π、MDR1、STAT3、p-STAT3蛋白水平的表達變化。結(jié)果:1.不同濃度(0.625、1.25、2.5、5、10、20、40、80μg/ml)DDP作用SKOV3/DDP細胞24h后,細胞存活率分別為:96.119±3.467%、80.646±3.054%、66.808±3.705%、51.642±1.316%、43.712±1.533%、34.403±2.917%、31.156±1.193%、27.240±2.220%。0.625μg/ml DDP對細胞活性無影響(P0.05),最低有效抑制濃度為1.25μg/ml(P0.01),且隨DDP濃度增高,細胞存活率顯著降低(P0.01)。2.不同濃度(50、200、800、1600、3200μg/ml)GTW作用SKOV3/DDP細胞24h后,細胞存活率分別為:98.064±1.474%、93.942±2.756%、64.748±3.557%、27.883±2.841%、12.899±2.351%。50μg/ml GTW對細胞活性無影響(P0.05),最低有效抑制濃度為200μg/ml(P0.05),且隨GTW濃度增高,細胞存活率降低(P0.05)。3.GTW與DDP聯(lián)用對SKOV3/DDP細胞生長的影響:10μg/ml DDP+50μg/ml GTW組與10μg/ml DDP組相比,細胞存活率無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05);800μg/ml、3200μg/ml GTW與DDP聯(lián)合組與對應(yīng)單藥組相比,細胞存活率均顯著下降(P0.01),且GTW濃度愈高,細胞存活率越低(P0.01)。4.DDP、GTW及兩者聯(lián)合作用于SKOV3/DDP細胞后細胞凋亡率改變:各組細胞平均凋亡率分別為:(1)3.623±1.608%,(2)12.090±1.418%,(3)3.860±1.434%,(4)13.107±2.231%,(5)17.920±1.136%,(6)13.563±3.133%,(7)19.053±0.963%,(8)34.580±2.722%。50μg/ml GTW組與空白對照組相比,細胞凋亡率無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05);其余藥物組與空白對照組相比,細胞凋亡率均增高(P0.05);10μg/ml DDP+50μg/ml GTW組與10μg/ml DDP組相比,細胞凋亡率無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05);800μg/ml、3200μg/ml GTW與DDP聯(lián)合組與對應(yīng)單藥組相比,細胞凋亡率增高(P0.05),且GTW濃度越高,細胞凋亡率越高(P0.05)。5.細胞劃痕實驗結(jié)果:各組細胞24h平均遷移距離為:(1)87.241±0.135μm,(2)29.266±1.252μm,(3)78.365±2.267μm,(4)24.324±1.947μm,(5)14.608±1.846μm,(6)25.606±1.191μm,(7)13.304±2.943μm,(8)2.901±1.005μm。各藥物組與空白對照組相比,細胞遷移距離均顯著縮短(P0.01);GTW單藥組中,隨著GTW濃度增高,細胞遷移距離減小(P0.05);GTW與DDP聯(lián)合組與相應(yīng)的單藥組相比,細胞遷移距離均縮小(P0.05)。6.GTW聯(lián)合DDP對SKOV3/DDP細胞遷移能力的影響:各組細胞穿膜個數(shù)平均值分別為:(1)82.200±1.732,(2)31.800±0.872,(3)73.600±1.039,(4)25.867±0.757,(5)21.067±0.611,(6)23.067±1.222,(7)17.267±0.808,(8)7.867±0.231。各藥物組與空白對照組相比,24h細胞穿膜個數(shù)均顯著減少(P0.01);GTW單藥組中,隨著GTW濃度增高,穿膜細胞數(shù)減少(P0.05);GTW與DDP聯(lián)合組與相應(yīng)的單藥組相比,24h細胞穿膜數(shù)減少(P0.05)。7.GTW聯(lián)合DDP對SKOV3/DDP細胞侵襲能力的影響:各組穿膜細胞數(shù)平均值分別為:(1)533.867±2.203,(2)32.733±0.462,(3)393.333±2.715,(4)161.467±0.902,(5)28.467±1.007,(6)29.467±1.102,(7)13.933±0.231,(8)8.600±0.346。各藥物組與空白對照組相比,48h細胞穿膜個數(shù)均顯著減少(P0.01);GTW單藥組中,隨著GTW濃度增高,穿膜細胞數(shù)減少(P0.05);GTW與DDP聯(lián)合組與相應(yīng)的單藥組相比,48h細胞穿膜數(shù)減少(P0.05)。8.DDP、GTW及兩者聯(lián)合作用于SKOV3/DDP細胞后Gst-π、MDR1、STAT3、p-STAT3蛋白表達水平變化:各組細胞Gst-π、MDR1、STAT3蛋白表達一致(P0.05)。p-STAT3的表達:800μg/ml、3200μg/ml GTW與DDP聯(lián)合組與對應(yīng)單藥組相比,表達下調(diào)(P0.05),且GTW濃度越高,p-STAT3表達呈逐漸下調(diào)趨勢(P0.05)。結(jié)論:1.GTW具有抑制耐順鉑人上皮性卵巢癌細胞SKOV3/DDP增殖,誘導(dǎo)細胞凋亡的作用。2.GTW具有抑制耐順鉑人上皮性卵巢癌細胞SKOV3/DDP細胞遷移、侵襲的作用。3.800μg/ml、3200μg/ml GTW能協(xié)同DDP抑制SKOV3/DDP細胞生長,誘導(dǎo)細胞凋亡,增加SKOV3/DDP細胞對順鉑的敏感性,且該作用呈濃度依賴性。4.GTW能協(xié)同DDP抑制SKOV3/DDP細胞遷移、侵襲,且該作用呈濃度依賴性。5.GTW可能通過抑制SKOV3/DDP細胞STAT3信號通路中p-STAT3表達,而發(fā)揮順鉑增敏作用。
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R285

【參考文獻】

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本文編號：2764379