【摘要】：當(dāng)歸是我國傳統(tǒng)中藥之一,但針對(duì)其藥理作用研究主要集中于當(dāng)歸多糖及小分子等,對(duì)其含量豐富的當(dāng)歸蛋白質(zhì)的研究卻很少。本研究從當(dāng)歸飲片中分離出當(dāng)歸蛋白(ASPR),探究了ASPR的自組裝效應(yīng)及其對(duì)難溶性藥物阿魏酸(FA)的裝載能力,繼而初步探索了納米顆粒的各項(xiàng)生物活性,以期得到一種能夠包埋藥物并具有生物安全性的新型納米載體。通過硫酸銨沉淀及Sephadex G-50凝膠過濾層析從當(dāng)歸飲片中得到當(dāng)歸糖蛋白ASPR,該蛋白分子量為18.33kDa,于溶液中主要以單體形式存在且會(huì)部分形成二聚體。通過動(dòng)態(tài)光散射檢測(cè)pH、溫度及處理時(shí)間對(duì)ASPR自組裝效應(yīng)的影響。研究結(jié)果表明,0.5mg/mL ASPR在pH 8.0條件下,經(jīng)過100 ℃加熱15 min后可自組裝形成粒徑均一的納米顆粒ASPR-NP。本研究發(fā)現(xiàn),加熱可使ASPR的ANS熒光的波長移動(dòng),熒光強(qiáng)度下降,α-螺旋含量降低,β-折疊含量升高。這些結(jié)構(gòu)變化表明ASPR結(jié)構(gòu)展開,疏水基團(tuán)暴露,從而聚集形成ASPR-NP納米顆粒。ASPR熱處理前先加入阿魏酸甲醇溶液(20mg/mL),可進(jìn)一步得到包埋FA的納米顆粒ASPR-FA-NP。應(yīng)用100kDa超濾管純化得到當(dāng)歸蛋白自組裝顆粒ASPR-NP及當(dāng)歸蛋白裝載FA顆粒ASPR-FA-NP,ASPR-NP平均粒徑為129.76±3.28 nm,Zeta電勢(shì)為-11.64±2.66mV;ASPR-FA-NP平均粒徑為 226.3±18.3nm,Zeta電勢(shì)為-14.65±5.01mV。二者在掃描電鏡下均呈不規(guī)則球形。最終得到的納米顆�？芍糜�4 ℃短期保存,-20 ℃長期保存。與同等組裝含量的ASPR相比,ASPR-NP的DPPH自由基清除率顯著提高150%(P0.05),ASPR-NP的ABTS自由基清除率極顯著提高398%(P0.01)。ASPR-NP能夠裝載FA,本研究中FA包埋率約為30%,ASPR-FA-NP載藥率約為65%。與參與裝載的等量ASPR相比,ASPR-FA-NP清除自由基能力顯著提高155%(P0.05),與空載體ASPR-NP相比,ASPR-FA-NP清除ABTS自由基能力則極顯著提高79%(P0.01)。MTT試驗(yàn)表明,ASPR、ASPR-NP及ASPR-FA-NP皆具有促進(jìn)正常肝細(xì)胞L-02增殖作用,與空載體ASPR-NP相比,ASPR-FA-NP能夠選擇性保護(hù)正常肝細(xì)胞并抑制肝癌細(xì)胞增殖。將ASPR和ASPR-NP進(jìn)行FITC標(biāo)記后,通過激光共聚焦顯微鏡顯示ASPR及ASPR-NP可跨膜進(jìn)入Hep G2細(xì)胞的線粒體。最后,通過溶血實(shí)驗(yàn)檢驗(yàn)ASPR、ASPR-NP及ASPR-FA-NP的生物相容性,發(fā)現(xiàn)三者對(duì)健康紅細(xì)胞均無明顯的溶血現(xiàn)象。綜上所述,ASPR具有裝載難溶性藥物FA能力,制備方法簡(jiǎn)便,形成的顆粒具有多方面的生物活性且安全性高。本課題的研究結(jié)果進(jìn)一步拓寬了當(dāng)歸蛋白的應(yīng)用價(jià)值,同時(shí)為納米藥物載體的設(shè)計(jì)提供了新的方向。
【學(xué)位授予單位】：福州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R284
【圖文】：

逡逑線衍射和核磁共振光譜學(xué)，己經(jīng)確定了一些ＰＲ－１０蛋白質(zhì)的晶體結(jié)構(gòu)，如圖１－３逡逑所示。ＰＲ－１０蛋白三維結(jié)構(gòu)由Ｃ末端三個(gè)ａ螺旋（ｃｔｌ至《３），七股反平行的爐折逡逑疊包圍（／？１至Ｗ）和九個(gè)接合環(huán)（Ｌ１至Ｌ９）組成［６５］，將兩個(gè)折疊（＃１，熾）逡逑中間間隔著兩個(gè)較短的螺旋結(jié)構(gòu)（《１，ａ２），連續(xù)的片折疊鏈（＾２－＾７）通過五個(gè)逡逑發(fā)夾環(huán)連接，使鏈＾７返回與灼的氫鍵連接。六個(gè)＾凸起扭曲了邋＾片的規(guī)律性，逡逑賦予它高度彎曲的形狀。ＰＲ－１０蛋白結(jié)構(gòu)的另一個(gè)重要特征是在

本文編號(hào)：2763123