發(fā)布時間：2020-07-19 11:56

【摘要】：目的:本研究以冠狀動脈粥樣硬化發(fā)生、發(fā)展的兩個關(guān)鍵點——動脈壁脂質(zhì)沉積及細胞的異常增殖為切入點,通過冠心清化散在防治兔動脈粥樣硬化作用研究,探討其抗動脈粥樣硬化的作用機制,為“瘀能化水”理論提供可靠地實驗證據(jù)。方法:1、動脈粥樣硬化家兔模型建立與評價:16只普通級純種雄性新西蘭家兔,適應性飼養(yǎng)2周后,隨機分為空白組(8只)及模型組(8只),繼空白組給予普通飼料喂養(yǎng);模型組給予高脂飼料喂養(yǎng)+免疫損傷以制備實驗性動脈粥樣硬化模型。連續(xù)喂養(yǎng)10周。檢測血清總膽固醇(Total cholesterol,TC)、甘油三酯(Triglyceride,TG)、低密度脂蛋白膽固醇(Low density lipoprotein-cholesterol,LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(High density lipoprotein-cholesterol,HDL-C)水平;觀察主動脈弓整體油紅O染色結(jié)果,以此判定造模成功與否。2、冠心清化散對動脈硬化家兔血脂及斑塊的影響:60只普通級純種雄性新西蘭家兔,適應性飼養(yǎng)2周后,隨機分為空白組、模型組、陽性藥物組、中藥低劑量組、中藥中劑量組、中藥高劑量組,各10只。除空白組外,其余組給予高脂飼料喂養(yǎng)+免疫損傷制備實驗性動脈粥樣硬化模型。同時中藥低、中、高劑量組分別以6.7g/kg/d、13.4g/kg/d、26.8g/kg/d,予冠心清化散懸液灌胃;陽性藥物組予辛伐他汀懸液灌胃3mg/kg/d灌胃,連續(xù)灌胃觀察12周。檢測TC、TG、LDL-C、HDL-C水平;觀察主動脈弓整體油紅O染色結(jié)果。3、冠心清化散抗動脈粥樣硬化機理研究采用雙抗夾心ELISA酶聯(lián)免疫吸附法檢測血清超氧化物歧化酶活性(Superoxide Dismutase,SOD)、丙二醛(Malondialdehyde,MDA)。采用Western blot法檢測還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(Nox4)、氧化酶p22phox蛋白、過氧化物酶體增殖物激活受體γ(PPARγ)、ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運蛋白A1(ABCA1)、ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運蛋白G1(ABCG1)、B族I型清道夫受體(SR-B1)、CD36表達。采用RT-PCR法檢測Nox4、p22phox蛋白、PPARγ、ABCA1、ABCG1、SR-B1、caveolin-1 mRNA表達。4、冠心清化散對血管內(nèi)皮細胞的保護作用采用Western blot方法檢測堿性成纖維細胞生長因子(basic Fibroblast Growth Factor,bFGF)與細胞外信號調(diào)節(jié)激酶1/2(extracellular regulated kinase1/2,ERK1/2)、成纖維細胞生長因子受體1(Fibroblast growth factor receptors 1,FGFR1)、p21ras蛋白的表達。結(jié)果:1、采用高脂飼養(yǎng)加免疫損傷法成功建立兔動脈粥樣硬化模型。2、冠心清化散中、高劑量組可降低動脈粥樣硬化兔的TC、TG、LDL-C水平,升高HDL-C的水平。其降脂效果同辛伐他汀(P0.05)。陽性藥物組與高、中、低劑量組雖見到脂質(zhì)條紋形成,但陽性藥物組與中、高劑量組較模型組相比,內(nèi)膜紅色斑片狀區(qū)明顯減少,與模型組的紅色粥樣斑塊形成鮮明對比。3、冠心清化散可有效升高SOD含量、降低MDA含量(P0.05),但中劑量組效佳;可有效減少Nox4和p22phox等胞膜NADPH氧化酶活性,降低動脈氧化應激水平。4、冠心清化抑制CD36的表達;提高ABCA1、ABGA1、SR-B1;減少PPARγ表達。5、冠心清化散可降低FGFR1、bFGF、p21ras、ERK1/2的蛋白表達。結(jié)論:1、冠心清化散可明顯改善動脈粥樣硬化兔的血脂水平;減少內(nèi)膜脂質(zhì)條紋、動脈粥硬化斑塊的形成。2、冠心清化散抗動脈粥樣硬化機制之一可能為抗氧化應激:調(diào)控Nox4和p22phox等胞膜NADPH氧化酶活性,降低動脈氧化應激水平可能是冠心清化散發(fā)揮抗氧化應激的重要機制。3、冠心清化散抗動脈粥樣硬化機制之二可能為調(diào)節(jié)巨噬細胞內(nèi)膽固醇平衡:抑制CD36的表達,減少巨噬細胞膽固醇的攝入;提高ABCA1、ABGA1、SR-B1、caveolin-1表達,加強膽固醇的逆轉(zhuǎn)運,其機制考慮與激活或增加PPARγ表達有關(guān)。4、冠心清化散可抑制Ras/Raf/MEK/ERK信號通路,從而減少細胞增殖與分化,起到保護細胞的作用。
【學位授予單位】：長春中醫(yī)藥大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R285.5
【圖文】：

模型組 21.52±2.52* 4.54±1.36* 12.43±2.69* 4.28±0.64*注：VS正常組*P<0.05。圖1-1 兩組血脂水平情況2 主動脈弓整體油紅O染色正常組主動脈大體觀察呈乳白色，彈性較好，內(nèi)膜較光滑平整，油紅著色極少。模型組，其主動脈油紅O染色結(jié)果與正常組比較其主動脈彈性差，內(nèi)膜多處可見斑片狀紅色區(qū)域，即脂質(zhì)條紋形成。見圖1-2。

空白組對照組圖1-2 主動脈弓整體油紅O染色討 論對于動脈粥硬化病因病機的探討、治療方法的探索、防治藥物的研發(fā)，等等研究的重要工具及前提是，建立穩(wěn)定、可靠、可重復性高的動脈粥硬化動物模型。1 模型動物的選擇1.1 鼠該模型的病變特點為，病變的形態(tài)及斑塊的破裂位置與人類相似。但有別于人類，斑塊破裂處缺乏纖維蛋白和血栓形成[4]。鼠科中常被用于建立動脈粥樣硬化模型的有小鼠和大鼠。1.1.1 小鼠小鼠，在生物分類學上屬脊椎動物門、哺乳動物綱、嚙齒目、鼠科、鼷鼠屬、小家鼠種。根據(jù)遺傳可以分為近交系、封閉群和突變系。小鼠具有繁殖快、易于控制、體積小等特點；同時對小鼠質(zhì)量控制已有明確標準；現(xiàn)已擁有大量近交系、封閉群和突變系；加之遺產(chǎn)工程小鼠的培育迅速增加，因此在哺乳類各種實驗動物研究中，用量最多，用途亦最廣。在動脈粥樣硬化模型中，小鼠因其取血不便、動態(tài)觀察較難，故很少采用。但隨著轉(zhuǎn)基因技術(shù)和基因敲除技術(shù)的出現(xiàn)，已成功研制出不少新的AS模型小鼠

50圖2-1 血脂水平情況2 主動脈弓整體油紅O染色正常組主動脈大體觀察呈乳白色，彈性較好，內(nèi)膜較光滑平整，未見油紅著色。模型組，其主動脈油紅O染色結(jié)果與正常組比較其主動脈彈性差，血管內(nèi)膜表面不平，可見彌漫性、融合成片的紅色粥樣斑塊隆起凸出于表面。陽性藥物組與高、中、低劑量組雖見到脂質(zhì)條紋形成，但陽性藥物組與中、高劑量組較模型組相比，內(nèi)膜紅色斑片狀區(qū)明顯減少。見附圖1。討 論1 藥物選擇1.1 冠心清化散立方依據(jù)及組方來源動脈粥樣硬化是導致冠心病的重要因素，貫穿于心絞痛、心肌梗死、支架術(shù)后、搭橋術(shù)后、冠心病心衰等系列心血管事件鏈的始終。目前冠心病的治療側(cè)重于穩(wěn)定斑塊，認為動脈內(nèi)粥樣斑塊越穩(wěn)定越好。黃永生教授在多年的臨床實踐中，對斑塊的逆轉(zhuǎn)和消退進行了大量的探索

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