【摘要】：目的通過(guò)觀(guān)察高脂飼料誘導(dǎo)的SD大鼠腸道菌群分布特征,探討糖腎膠囊干預(yù)后對(duì)該模型大鼠腸道菌群的影響,提煉最有可能的靶向菌群類(lèi)別。方法1、模型建立及分組:將6周齡的SD大鼠90只進(jìn)行1周的適應(yīng)性喂養(yǎng),分為正常對(duì)照組(n=15)和高脂飼料組(n=75)。分別采用普通飼料、高脂飼料喂養(yǎng),喂養(yǎng)時(shí)間為8周。在以往多次實(shí)驗(yàn)結(jié)果基礎(chǔ)上,根據(jù)體重變化,評(píng)價(jià)是否成功復(fù)制代謝綜合征模型。8周結(jié)束后,高脂飼料組大鼠71只隨機(jī)分為高脂模型組、鹽酸小檗堿組、黃連水煎劑組、糖腎膠囊低劑量組、糖腎膠囊高劑量組。各組喂養(yǎng)飼料維持不變,藥物干預(yù)療程4周。2、代謝綜合征相關(guān)指標(biāo)測(cè)定:稱(chēng)取各組大鼠的體重,計(jì)算出體重變化量、變化率,取血測(cè)定血糖、血脂、游離脂肪酸、空腹胰島素,取附睪旁脂肪測(cè)量?jī)?nèi)臟脂肪質(zhì)量,觀(guān)察鹽酸小檗堿、黃連煎劑、糖腎膠囊干預(yù)后大鼠體重變化量、變化率及代謝綜合征相關(guān)指標(biāo)的變化,組間差異,計(jì)量資料使用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。3、12周后,腹腔注射3%戊巴比妥鈉麻醉處死,打開(kāi)腹腔,腹主動(dòng)脈取血,離心取血清,保存待用。分別從距離盲腸上端、下端約2cm處截取大鼠盲腸(整個(gè)盲腸包含其中,內(nèi)含新鮮糞便),并用錫箔紙包好,標(biāo)記后放到60ml便盒中,立即在干冰中冷凍,然后-80℃保存待用。各組隨機(jī)抽取6個(gè)樣本,委托華大基因有限公司對(duì)樣本(盲腸中的糞便)進(jìn)行16SrDNA檢測(cè)。使用flash/mothur等軟件將read1和read2進(jìn)行拼接、過(guò)濾低質(zhì)量數(shù)據(jù)、除出嵌合體序列等處理,在取得原始數(shù)據(jù)后對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行優(yōu)化、整理、分析,分析各樣本物種豐度及多樣性差異,并運(yùn)用OTU Venn圖、OTU豐度的PCA分析圖、OTU Rank曲線(xiàn)、物種熱圖、系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)圖等進(jìn)行展示。進(jìn)一步分析六組之間腸道菌群的門(mén)、綱、目、科、屬、種水平的菌群差異,通過(guò)物種profiling柱狀圖進(jìn)行展示。結(jié)果1、經(jīng)過(guò)高脂飼料喂養(yǎng)8周,高脂飼料組與正常對(duì)照組比較,體重呈現(xiàn)上升趨勢(shì);體重增加量、增加率的顯著上升。12周時(shí),高脂模型組與正常對(duì)照組比較,體重增加量、增加率呈現(xiàn)顯著更高,內(nèi)臟脂肪質(zhì)量顯著更高,HDL-C顯著下降,LDL-C顯著上升。與高脂模型組比較:糖腎膠囊高劑量組呈現(xiàn)體重增長(zhǎng)量和增長(zhǎng)率顯著降低,內(nèi)臟脂肪質(zhì)量顯著下降;HDL-C呈現(xiàn)顯著上升,LDL-C顯著下降。糖腎膠囊低劑量組體重增長(zhǎng)率呈下降趨勢(shì),HDL-C呈上升趨勢(shì)。鹽酸小檗堿組、黃連水煎劑組呈現(xiàn)體重增長(zhǎng)量、增長(zhǎng)率下降趨勢(shì);內(nèi)臟脂肪質(zhì)量顯示無(wú)顯著差異;HDL-C、LDL-C顯示無(wú)顯著差異。2、正常對(duì)照組與高脂模型組比較,OTU數(shù)目呈現(xiàn)顯著增多;在PC1維度和PC2維度均有顯著差異。正常對(duì)照組OTU Rank曲線(xiàn)呈現(xiàn)跨度更大、更平緩。高脂模型組大鼠呈現(xiàn)單個(gè)樣本多樣性顯著降低,Alpha多樣性顯著下降,Beta多樣性顯著下降。高脂模型組呈現(xiàn)阿克曼氏菌呈現(xiàn)減少趨勢(shì);丁酸球菌、羅斯拜瑞氏菌呈現(xiàn)明顯減少趨勢(shì);布勞特氏菌、埃氏擬桿菌、糞便普雷沃、伴生糞球菌顯著增加。藥物干預(yù)治療四組與高脂模型組比較:PC1維度、PC2維度上均呈現(xiàn)顯著差異。Alpha多樣性差異顯著,呈現(xiàn)正常對(duì)照組糖腎膠囊高劑量組糖腎膠囊低劑量組黃連水煎劑組高脂模型組組鹽酸小檗堿組。Beta多樣性差異顯著,糖腎膠囊高劑量組差異最顯著,最接近正常對(duì)照組;糖腎膠囊高、低劑量組及黃連水煎劑組均較高脂模型組OTU Rank曲線(xiàn)呈現(xiàn)跨度增大、坡度平緩;鹽酸小檗堿組則呈現(xiàn)曲線(xiàn)跨度、坡度減小。糖腎膠囊高、低劑量組均較高脂模型組呈現(xiàn)擬桿菌門(mén)顯著降低,高劑量組趨勢(shì)更顯著。厚壁菌門(mén)呈現(xiàn)糖腎膠囊高、低劑量組及黃連水煎劑組升高趨勢(shì),鹽酸小檗堿組呈現(xiàn)減少趨勢(shì)。α-變形菌綱、阿克曼氏菌屬、丁酸球菌、普氏棲糞桿菌及羅斯拜瑞氏菌各組均呈現(xiàn)明顯差異。糖腎膠囊高、低劑量組顯著集中富積了阿克曼氏菌屬,增加擬桿菌門(mén)、丁酸球菌屬、瘤胃球菌、乳桿菌屬、毛螺菌、考拉桿菌、羅斯拜瑞氏菌的豐度,減少分節(jié)絲狀菌、柔嫩梭菌、普雷沃氏菌等的種類(lèi)和豐度,且作用強(qiáng)度以糖腎膠囊高劑量組為優(yōu)。黃連水煎劑組增多阿克曼氏菌、丁酸球菌為主,且作用強(qiáng)度低于糖腎膠囊高、低劑量組。鹽酸小檗堿組則以增多阿克曼氏菌屬為主。結(jié)論1、糖腎膠囊高、低劑量均可以顯著改善高脂飼料誘導(dǎo)的SD大鼠模型部分代謝綜合征相關(guān)指標(biāo),高劑量呈現(xiàn)更佳的療效,提示療效與藥物劑量成正相關(guān)性,比更大劑量小檗堿含量的鹽酸小檗堿組、更高劑量黃連為主要成分的黃連水煎劑組療效更顯著,提示糖腎膠囊的療效可能是通過(guò)多靶點(diǎn)、多途徑實(shí)現(xiàn)的。2、本研究高脂飼料誘導(dǎo)的SD大鼠模型腸道菌群結(jié)構(gòu)顯著發(fā)生變化,其特征表現(xiàn)為樣本豐度及多樣性顯著降低;厚壁菌門(mén)顯著減少,柔膜菌門(mén)、迷蹤菌門(mén)顯著降低,擬桿菌門(mén)增多趨勢(shì);阿克曼氏菌呈現(xiàn)減少趨勢(shì),提示腸屏障修復(fù)能力下降;有益菌菌屬減少趨勢(shì)明顯,如丁酸球菌、羅斯拜瑞氏菌呈現(xiàn)明顯減少趨勢(shì);布勞特氏菌、埃氏擬桿菌、糞便普雷沃、伴生糞球菌等條件致病菌顯著增加。3、糖腎膠囊顯著增加了腸道菌群的豐度及多樣性,同時(shí)促進(jìn)恢復(fù)腸屏障修復(fù)功能,增加有益菌屬的豐度,減少條件致病菌的種類(lèi)和豐度。集中富積了恢復(fù)腸屏障修復(fù)功能的阿克曼氏菌屬,增加有益菌屬,如擬桿菌門(mén)、丁酸球菌屬、瘤胃球菌、乳桿菌屬、毛螺菌、考拉桿菌、羅斯拜瑞氏菌的豐度,減少條件致病菌,如分節(jié)絲狀菌、柔嫩梭菌、普雷沃氏菌等的種類(lèi)和豐度。相比于含有更大劑量鹽酸小檗堿和黃連單藥成份的黃連水煎組,糖腎膠囊干預(yù)后腸道菌群的結(jié)構(gòu)改變明顯呈現(xiàn)有益菌增多趨勢(shì)更顯著,條件致病菌抑制更明顯,負(fù)責(zé)腸道修復(fù)功能的阿克曼氏菌聚集更顯著的特點(diǎn),考慮作用機(jī)制與復(fù)方中藥中的黃連或提取物鹽酸小檗堿相關(guān),但更顯著、更高效的作用機(jī)制顯示了復(fù)方中藥糖腎膠囊的多成分、多途徑、多靶點(diǎn)的綜合作用的特點(diǎn),進(jìn)一步體現(xiàn)了傳統(tǒng)中藥復(fù)方的有效性、高效性、綜合性及優(yōu)勢(shì)性。
【學(xué)位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R285.5
【圖文】：

邐高脂飼料誘導(dǎo)的ＳＤ大鼠腸道菌群分布特征及糖腎膠囊干預(yù)后的影響境樣品ＤＮＡ后，根據(jù)課題要求和需求，選擇合適的高變區(qū)和相應(yīng)的通用引混樣、建庫(kù)至測(cè)序。逡逑Ｏ邋ｔｏｏ邋２００邋３００邋４００邋＆００邋６００邐７００邋８００邋９００邐１０００邋１邋１００邋１邋２００邋１３００邋１４００邋１５００邋ｂｐ逡逑．邋－ｙＨ１邋…ｎ邋■］逡逑

邐高脂飼料誘導(dǎo)的ＳＤ大鼠腸道菌群分布特征及糖腎膠囊干預(yù)后的影響境樣品ＤＮＡ后，根據(jù)課題要求和需求，選擇合適的高變區(qū)和相應(yīng)的通用引混樣、建庫(kù)至測(cè)序。逡逑Ｏ邋ｔｏｏ邋２００邋３００邋４００邋＆００邋６００邐７００邋８００邋９００邐１０００邋１邋１００邋１邋２００邋１３００邋１４００邋１５００邋ｂｐ逡逑．邋－ｙＨ１邋…ｎ邋■］逡逑

總體測(cè)序流程圖

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2762449