【摘要】：目的:以往的研究均表明甘草次酸具有抗炎、抗氧化、調(diào)節(jié)免疫等藥理作用。作為甘草次酸類衍生物,在實(shí)驗(yàn)室之前的研究中已經(jīng)顯示,其對(duì)肝腎損傷、機(jī)體炎癥、肺部纖維化體內(nèi)外模型均有較好的效果。本研究旨在初步探索TY501霧化吸入劑對(duì)慢性肺阻性疾病(COPD)的療效和相關(guān)作用機(jī)制并為COPD新藥的研發(fā)提供新的途徑和思路。方法和結(jié)果:1.TY501對(duì)甲醛致急性COPD大鼠模型的影響:36只大鼠采用霧化吸入甲醛的方式造模。實(shí)驗(yàn)中設(shè)置TY501組、布地奈德組、模型組、空白組,每組隨機(jī)分配12只大鼠。各組分別霧化給予TY501、布地奈德、生理鹽水,空白組不做處理。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后測(cè)定肺重指數(shù)、氧分壓,測(cè)定肺泡灌洗液(BALF)中TNF-a、IL-8含量,并進(jìn)行BALF白細(xì)胞計(jì)數(shù),測(cè)定肺組織勻漿中谷胱甘肽(GSH)水平。結(jié)果表明,模型組肺重指數(shù)較正常組肺重指數(shù)顯著性增加,模型組PaO2、BALF中TNF-a、IL-8水平及肺組織勻漿中GSH水平較正常組均顯著性降低(P0.01)。表明由吸入甲醛構(gòu)建的大鼠模型具有肺部損傷及炎癥的基本特征,可以用于藥物療效的比較;TY501組和布地奈德組的肺重指數(shù)、PaO2、肺組織勻漿中GSH水平、BALF中TNF-a、IL-8水平中除肺組織勻漿中GSH水平TY501組高于模型組無(wú)顯著性差異外,兩組其余各指標(biāo)對(duì)比模型組均有顯著性改善(P0.05)。表明TY501能改善吸入甲醛致肺損傷大鼠模型的病理情況。2.TY501對(duì)內(nèi)毒素急性肺損傷小鼠模型療效影響昆明小鼠45只進(jìn)行尾靜脈注射LPS造模,每組隨機(jī)分15只小鼠,分組方法同實(shí)驗(yàn)一。各組分別霧化給予TY501、布地奈德、生理鹽水,空白組不做處理。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后測(cè)定各組小鼠肺重指數(shù)、肺組織勻漿中的TNF-a、IL-8含量。結(jié)果表明,實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)模型組對(duì)比空白組,小鼠肺重指數(shù)、TNF-ɑ、IL-8水平均差異顯著(P0.01)。結(jié)果表明尾靜脈注射LPS急性小鼠模型肺部炎癥明顯,可用于TY501藥物療效及作用機(jī)制的探索;TY501組和布地奈德組肺重指數(shù)、IL-8水平、TNF-ɑ水平和模型組相比均有顯著性改善(P0.05)。小鼠肺部損傷程度明顯減輕,TY501組比較布地奈德組各指標(biāo)水平無(wú)顯著性差異。表明TY501霧化吸入對(duì)LPS急性肺損傷導(dǎo)致的肺部炎癥具有一定的療效。3.TY501對(duì)煙熏致慢性COPD小鼠療效影響昆明小鼠60只,用自制煙熏箱進(jìn)行為期8周的煙熏造模。每組隨機(jī)分20只小鼠,分組及給藥方法同實(shí)驗(yàn)一。記錄小鼠實(shí)驗(yàn)過(guò)程中基本情況和體重變化,實(shí)驗(yàn)結(jié)束后測(cè)定小鼠肺重指數(shù),測(cè)定小鼠肺組織勻漿中TNF-ɑ、IL-8水平,制作觀察肺組織病理切片,測(cè)定小鼠血清炎癥細(xì)胞水平。結(jié)果表明,模型組的肺重指數(shù)、肺組織勻漿中TNF-ɑ和IL-8水平及血液中白細(xì)胞水平均顯著性高于空白組,肺部病理學(xué)切片顯示和正常組病理學(xué)切片相比模型組小鼠部分肺葉呈重度肺氣腫。結(jié)果表明煙熏致慢性肺氣腫小鼠模型和正常肺氣腫病理相似,可以用于TY501藥效評(píng)價(jià);TY501組和布地奈德組肺重指數(shù),血液中白細(xì)胞水平較模型組有顯著性差異。組兩組肺組織勻漿中TNF-ɑ水平和IL-8水平分較模型組均有降低。肺部病理學(xué)切片顯示比較模型組的重度肺氣腫,兩組均只有少量肺泡呈輕度代償性肺氣腫。結(jié)果表明TY501能較好改善煙熏致慢性肺氣腫小鼠模型的病理狀態(tài)。4.TY501對(duì)急性COPD大鼠基因測(cè)定探索采用實(shí)驗(yàn)一中大鼠肺組織,對(duì)各組大鼠肺組織進(jìn)行基因的提取、測(cè)序、并用軟件做差異分析。對(duì)差異表達(dá)基因進(jìn)行模式聚類、功能注釋以及富集性分析。結(jié)果表明,兩治療組間差異基因數(shù)顯著性少于治療組和模型組間差異基因數(shù)(P0.01)。差異基因聚類表達(dá)分析圖譜顯示TY501組和布地奈德組基因之間較兩組和模型組間基因功能更為相似,表明兩組均在一定程度上改變了模型組基因表達(dá)方式;差異表達(dá)基因KEGG通路富集分析顯示富集顯著性最大的差異基因?yàn)?TY501對(duì)比模型組為細(xì)胞因子和細(xì)胞因子相互作用相關(guān)基因和精氨酸和脯氨酸代謝基因。布地奈德組對(duì)比模型組為白細(xì)胞跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)基因、PPAR型號(hào)通路相關(guān)基因和ECM受體相互作用基因。布地奈德對(duì)比TY501主要為細(xì)胞因子和細(xì)胞因子相互作用相關(guān)基因。結(jié)論:通過(guò)急性和慢性模型,表明TY501具有明確的治療COPD的作用,作用機(jī)制與抑制肺部炎癥細(xì)胞及炎癥因子(TNF-ɑ、IL-8)水平有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R285.5
【圖文】：

正常組 布地奈德組圖 2.1 各組小鼠肺部圖片2.3.4 小鼠肺組織勻漿中 TNF-ɑ、IL-8 濃度比較如下表 2.2 和圖 2,2 所示，模型組小鼠肺組織勻漿中 TNF-ɑ、IL-8 水平性高于空白組（P<0.01）。TY501 組和布地奈德組 TNF-ɑ、IL-8 水平顯著于模型組（P<0.05）。表 2.2 小鼠肺組織勻漿中 TNF-ɑ、IL-8 濃度比較（ X S）組別 例數(shù) TNF-a(pg/ml) IL-8(pg/ml模型組 A 10 185.57 33.34#92.79 21.55TY501 組 B 13 165.54 36.02 77.67 16.54布地奈德組 C 14 156.68 29.02* 75.35 15.86空白組 D 15 131.24 30.39 68.53 21.8注：#表示 A 和 D 比較 P<0.01;*表示 B、C 和 A 比較 P<0.05

津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文 三、TY501 對(duì)慢性 CO3.3 小鼠肺組織勻漿中 TNF-ɑ、IL-8 濃度比較（ X 組別 例數(shù) TNF-ɑ(pg/ml) I模型組 A 20 181.59 49.56#8TY501 組 B 20 168.25 32.93 7布地奈德組 C 20 171.46 38.97 7空白組 D 20 147.78 33.89 6：#表示 A 和 D 比較 P<0.01;*表示 B、C 和 A 比較 P<0.05

實(shí)驗(yàn)結(jié)果1 大鼠基因差異對(duì)比分析結(jié)果如下表 4.1 和圖 4.1 所示，TY501 組和布地奈德組大鼠肺部基因和基因差異個(gè)數(shù)分別為 1379 和 1492，二者數(shù)量上相近，TY501 和布比較基因差異數(shù)僅為 460。差異基因聚類表達(dá)分析圖譜顯示 TY50德組基因之間較兩組和模型組間基因功能更為相似，表明兩組均改變了模型組基因表達(dá)方式。表 4.1 大鼠基因測(cè)序差異對(duì)比分析結(jié)果異基因?qū)Ρ?差異基因總數(shù) 上調(diào)基因 下調(diào)E05 vs E04 460 224 23E05 vsE06 1379 900 47E04 vsE06 1492 983 50E05-TY501，E04-布地奈德，E06-模型組

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2762122