仲景“炙”法原貌考證及炙甘草抗?jié)冏饔玫难芯?/H1>
發(fā)布時(shí)間：2020-07-19 06:55
【摘要】：背景甘草是張仲景最常用的藥物之一,在《傷寒論》中記載了生甘草、炙甘草兩種規(guī)格,其中炙甘草最為常用�！秱摗分须m記載了甘草的炮制方法,但對(duì)炮制的過(guò)程沒(méi)有詳細(xì)的論述。現(xiàn)今所說(shuō)的炙甘草多指蜜炙甘草,本團(tuán)隊(duì)在考證甘草炮制沿革的過(guò)程中發(fā)現(xiàn),漢代到清代出現(xiàn)過(guò)的甘草炮制方法有炙法、炒法、炮法等6種;用來(lái)炮制的輔料有酥、鹽、醋、蜜等11種。其中以蜜炮制甘草的方法最早出現(xiàn)在唐代的《千金翼方》中,而“蜜炙甘草”清代才出現(xiàn),仲景所用甘草是否為蜜炙甘草,仍存在疑問(wèn)。所以考證《傷寒論》中甘草炮制方法的原貌并對(duì)該炮制方法背后的科學(xué)道理進(jìn)行探索,可能對(duì)深入理解仲景辨證論治的學(xué)術(shù)思想、提高經(jīng)方運(yùn)用水平有重要的意義。目的1.通過(guò)文獻(xiàn)考證出《傷寒論》中炙甘草炮制方法的原貌。2.利用藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)篩選出高溫炮制后甘草中抗?jié)兊挠行С煞?以下簡(jiǎn)稱有效成分);優(yōu)化能夠制備出活性最佳的有效成分的工藝,并對(duì)其形貌特征、光學(xué)性質(zhì)、元素組成、表面活性基團(tuán)進(jìn)行分析;研究有效成分的細(xì)胞毒性、抗?jié)冏饔眉白饔脵C(jī)制。3.分析有效成分對(duì)生甘草水溶液中小分子溶出度的影響。評(píng)價(jià)其對(duì)生甘草抗?jié)冏饔眉跋嚓P(guān)作用機(jī)制的影響。方法1.利用馬弗爐將甘草高溫碳化,以透析的方法將碳化甘草的水煎液分離為透析袋內(nèi)和透析袋外兩種溶液,以急性酒精性胃潰瘍模型初步評(píng)價(jià)兩種溶液的抗?jié)冏饔?以發(fā)現(xiàn)其有效成分。2.考察利用馬弗爐制備碳化甘草及其有效成分的溫度和時(shí)間,利用熒光光譜、紅外光譜、紫外光譜初步觀察不同條件下制備的有效成分的光學(xué)性質(zhì)和所含基團(tuán)。以透射電子顯微鏡(TEM)觀察不同條件下制備的有效成分的粒徑大小、分布均勻程度。以抗?jié)冃Ч麨樵u(píng)價(jià)指標(biāo),優(yōu)化碳化甘草中有效成分的制備條件。3.利用TEM、高分辨透射電子顯微鏡(HRTEM)、X射線衍射技術(shù)(XRD)分析碳化甘草中有效成分的形貌特征、粒徑大小和晶格間距;利用熒光光譜、紅外光譜、紫外光譜初步觀察光學(xué)性質(zhì)和所含基團(tuán);利用XPS分析其的元素組成及表面基團(tuán)分布。以高效液相色譜法分析碳化甘草中有效成分與生甘草所含成分的異同。4.利用細(xì)胞增殖及毒性檢測(cè)試劑盒檢測(cè)不同濃度碳化甘草中有效成分溶液對(duì)細(xì)胞活力的影響,以評(píng)價(jià)其是否有細(xì)胞毒性,初步獲取安全性參數(shù)。5.利用急性酒精性胃潰瘍模型,評(píng)價(jià)有效成分的抗?jié)兓钚院妥饔脵C(jī)制。6.利用高效液相色譜法探索碳化甘草中有效成分對(duì)生甘草中小分子溶出度的影響。運(yùn)用急性酒精性胃潰瘍模型考察GRRC-NCs、生甘草和生甘草與GRRC-NCs的混合溶液的抗?jié)冏饔煤涂寡趸瘷C(jī)制,初步評(píng)價(jià)碳化甘草對(duì)生甘草藥效的影響。結(jié)果1.藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,碳化甘草中有效成分為透析袋內(nèi)部分。透析袋內(nèi)溶液組潰瘍指數(shù)明顯低于模型組和透析袋外溶液組(P0.05),而透析袋外溶液與模型組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P≥0.05)。組織觀察顯示:透析袋內(nèi)溶液組小鼠的胃黏膜和組織損傷明顯輕于模型組和透析袋。2.制備方法考察結(jié)果顯示,以325℃、350℃、375℃、400℃制備的碳化甘草中有效成分,粒徑均在納米級(jí)別,我們將其命名為甘草炭納米類成分(GRRC-NCs)。不同溫度制備的GRRC-NCs所含活性基團(tuán)相似,溫度越高粒徑越小,其中375℃、400℃制備的GRRC-NCs符合碳點(diǎn)的形貌特征。綜合電鏡結(jié)果和抗?jié)冃Ч?優(yōu)選375℃作為GRRC-NCs的制備溫度。進(jìn)一步考察以375℃燒制的時(shí)間,結(jié)果表明燒制60 min和80 min時(shí)可以制備出分散均勻,粒徑適中的碳點(diǎn)。綜合GRRC-NCs的形貌特征和抗?jié)兓钚?最終篩選出制備GRRC-NCs的條件為以馬弗爐375℃燒制60 min。3.GRRC-NCs的成分分析:(1)形貌特征:GRRC-NCs為均勻分布的球體,其粒徑在2-10 nm間均有分布,以5-6 nm的最多,符合碳點(diǎn)的粒徑要求。晶格間距為0.357 nm,2θ角度為:23.02°。(2)光譜分析:熒光光譜結(jié)果顯示,GRRC-NCs的最大激發(fā)波長(zhǎng)為372 nm,最大發(fā)射波長(zhǎng)為452 nm。紅外光譜顯示主要基團(tuán)有3400 cm~(-1)左右的寬大的吸收峰,為O-H特征峰;2900 cm~(-1)處為C-H伸縮振動(dòng);1380 cm~(-1)處的尖銳吸收峰為C-H;1100 cm~(-1)附近的吸收峰推測(cè)為C-O,1000 cm~(-1)以下的小吸收峰為C-H。紫外-可見(jiàn)吸收光譜圖顯示200 nm-500 nm間有寬大的吸收峰。200 nm-220 nm處的吸收峰為N、H、S元素的n-σ~*躍遷,可能為O-H、N-H等基團(tuán)。(3)元素組成及表面活性基團(tuán)分析:GRRC-NCs中有C、O、N、P、S等元素,其中含量最高的兩種元素為C和O,分別占總原子百分比的53.95%和40.28%。沒(méi)有檢測(cè)到Ca、Mg等金屬元素,說(shuō)明GRRC-NCs中沒(méi)有金屬離子和鹽類。XPS全掃描譜中顯示的284.38 eV、401.68 eV和536.88 eV處的峰分別對(duì)應(yīng)于C 1s、N 1s和O 1s。C 1s可以分成4個(gè)小峰,分別為284.8 eV處的C-C,285.8 eV處的C-C-O,286.6 eV處的C-OH和288.2 eV處的C=O;O 1s可以分為3個(gè)小峰,分別為531.2 eV處的O=C,533.8eV處的O-N和534.1 eV處的O-C。N可以分為兩個(gè)小峰,分別是400.6 eV處的C-NH_2和403.2 eV處的N-C。(4)以同樣的色譜條件下對(duì)生甘草水煎液和GRRC-NCs水溶液進(jìn)行成分分析,結(jié)果表明原存在于生甘草水煎液高效液相色譜圖中甘草的有效成分的特征峰,在GRRC-NCs水溶液的色譜圖中均沒(méi)有出現(xiàn)。4.當(dāng)GRRC-NCs濃度為19.5μg/mL-5000μg/mL時(shí),沒(méi)有表現(xiàn)出細(xì)胞毒性,反而會(huì)提高細(xì)胞的存活率。5.GRRC-NCs有良好的抗?jié)冏饔?可以減輕酒精對(duì)胃黏膜和組織的氧化損傷。6.GRRC-NCs與生甘草以不同的比例混合后的煎煮液中小分子溶出程度明顯升高。當(dāng)GRRC-NCs的含量為30%時(shí),小分子的溶出度最高。小鼠的胃潰瘍指數(shù)的結(jié)果表明:相比模型組,GRRC-NCs、生甘草、GRRC-NCs與生甘草混合溶液均有良好的抗?jié)冏饔?其中混合溶液的抗?jié)冃Ч^好(P0.05)。GRRC-NCs、生甘草和混合溶液可以降低小鼠血清和胃組織中的MDA和NO的含量(P0.05),顯著提高血清中SOD的含量(P0.01),結(jié)果表明混合溶液的抗氧化作用優(yōu)于GRRC-NCs和生甘草,且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論1.GRRC-NCs是甘草高溫炮制過(guò)程中產(chǎn)生的新物質(zhì),利用馬弗爐375℃燒制60min制備出的GRRC-NCs為均勻分布的球體,其粒徑在2-10nm間均有分布,以5-6nm的最多,符合碳點(diǎn)的粒徑要求。晶格間距為0.357nm,2θ角度為:23.02°。其熒光光譜中最大激發(fā)波長(zhǎng)為372nm,最大發(fā)射波長(zhǎng)為452nm。主要元素為C、N、O,組成了C-C、C-C-O、C-OH、C-H、C=O、O-H、C-NH_2、N-C等基團(tuán),不含金屬離子、鹽類和小分子成分。GRRC-NCs中所含豐富的基團(tuán)可能是其發(fā)揮作用的基礎(chǔ)。2.GRRC-NCs濃度在19.5-5000μg/mL之間時(shí),沒(méi)有細(xì)胞毒性,安全性良好。3.GRRC-NCs有良好的抗?jié)冏饔?一定程度上可以減輕酒精對(duì)胃黏膜和組織的氧化損傷。4.GRRC-NCs可以提高生甘草中小分子的溶出度,增強(qiáng)甘草抗?jié)冏饔玫寞熜А?br> 【學(xué)位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R245.8
【圖文】：
如表7所示,GRRC-NCs中有C、O、N、P、S等元素,其中含量最高的兩種元素為C和O,分別占總原子百分比的53.95%和40.28%。沒(méi)有檢測(cè)到Ca、Mg等金屬元素,說(shuō)明GRRC-NCs中沒(méi)有金屬離子和鹽類。XPS全掃描譜中顯示的284.38 e V、401.68 e V和536.88 e V處的峰分別對(duì)應(yīng)于C 1s、N 1s和O 1s(圖17)。C 1s可以分成4個(gè)小峰,分別為284.8 e V處的C-C,285.8 e V處的C-C-O,286.6 e V處的C-OH和288.2 e V處的C=O;O 1s可以分為3個(gè)小峰,分別為531.2 e V處的O=C,533.8 e V處的O-N和534.1e V處的O-C。N可以分為兩個(gè)小峰,分別是400.6 e V處的C-NH2和403.2 e V處的N-C[98]。實(shí)驗(yàn)二 高效液相色譜法測(cè)定GRRC-NCs水溶液的成分
生甘草水煎液和GRRC-NCs水溶液的高效液相色譜結(jié)果如圖18所示,生甘草水煎液成分復(fù)雜,含有多種小分子成分(圖18 A)。而以同樣的色譜條件下對(duì)GRRC-NCs水溶液進(jìn)行成分分析(圖18 B),原存在于生甘草水煎液高效液相色譜圖中甘草的有效成分,如芹糖甘草苷、甘草苷、甘草酸等小分子物質(zhì)的特征峰,在GRRC-NCs水溶液的色譜圖中均沒(méi)有出現(xiàn)。4.小結(jié)
如表8和圖19所示,當(dāng)GRRC-NCs濃度在19.5μg-5000μg/mL之間不僅對(duì)RAW 264.7細(xì)胞生長(zhǎng)沒(méi)有抑制作用,反而能增加細(xì)胞存活率。4.小結(jié) 【相似文獻(xiàn)】
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本文編號(hào)：2762083
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【學(xué)位級(jí)別】：碩士
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5 張艷暉;;麻黃湯遞增法治療慢性蕁麻疹初探[A];2013中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì)皮膚病分會(huì)第十次學(xué)術(shù)交流大會(huì)暨湖南省中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病第八次學(xué)術(shù)交流大會(huì)論文匯編[C];2013年
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5 梁穎;防治過(guò)敏 中藥立功[N];醫(yī)藥養(yǎng)生保健報(bào);2003年
6 趙章忠;金壽山醫(yī)術(shù)括要[N];上海中醫(yī)藥報(bào);2000年
7 ;方劑臨床應(yīng)用專輯[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2003年
8 謝鐘琪;考生患呃逆中藥有方治[N];大眾衛(wèi)生報(bào);2004年
9 ;治老人咳嗽有痰年久不愈方[N];農(nóng)村醫(yī)藥報(bào)（漢）;2003年
10 趙章忠;金壽山醫(yī)術(shù)括要[N];上海中醫(yī)藥報(bào);2000年
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1 蔣冰倩;利用免疫分析法解析生—炙甘草對(duì)三種經(jīng)方中主要成分代謝的影響[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2017年
2 聶建華;基于方劑數(shù)據(jù)分析方法的脾虛證及用藥配伍規(guī)律研究[D];南京中醫(yī)藥大學(xué);2012年
3 王一戰(zhàn);痢疾相關(guān)明清文獻(xiàn)中醫(yī)診治經(jīng)驗(yàn)挖掘研究[D];中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院;2017年
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1 朱雅凡;仲景“炙”法原貌考證及炙甘草抗?jié)冏饔玫难芯縖D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2019年
2 伍杰勇;葛根芩連湯配伍與藥效關(guān)系研究[D];中國(guó)人民解放軍第一軍醫(yī)大學(xué);2003年
3 張信青;炙甘草液相指紋圖譜研究[D];湖南中醫(yī)藥大學(xué);2005年
4 譚映輝;小兒咳嗽用藥規(guī)律的古代文獻(xiàn)研究[D];湖南中醫(yī)藥大學(xué);2015年
5 楊茜;李東垣《脾胃論》方藥配伍規(guī)律研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年
6 原雙興;桂枝甘草湯指紋圖譜及血清藥物化學(xué)研究[D];河南中醫(yī)學(xué)院;2014年
7 王培棟;胃靈顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[D];承德醫(yī)學(xué)院;2015年
8 孫冬陽(yáng);芍藥甘草湯治療津虧便秘的理論與實(shí)驗(yàn)研究[D];長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué);2007年
9 潘雨薇;當(dāng)歸四逆湯證治規(guī)律研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2013年
10 吳晏;復(fù)方炙甘草顆粒治療冠心病室性早搏臨床觀察[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2003年
本文編號(hào)：2762083
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