【摘要】：乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)是乙型肝炎最常見的致病因子,嚴(yán)重威脅著人類的生命健康。乙型肝炎傳播速度快,流行范圍廣,治療難度大,迄今仍沒有明顯治療效果的特效藥物。中藥治療乙型肝炎是我國特有且有效的一種治療方法,許多天然藥物及一些中草藥活性成分對治療乙型肝炎不僅療效明確,而且毒副作用相對較小,從中草藥中尋找抗HBV活性先導(dǎo)化合物是目前抗HBV藥物研發(fā)的一個重要策略。本課題組前期通過活性篩選,發(fā)現(xiàn)金絲草70%乙醇提取物顯示較好的體外抗HBV活性。進(jìn)一步研究表明,金絲草抗HBV有效成分主要集中在70%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位和正丁醇萃取部位。金絲草是禾本科金發(fā)草屬植物金絲草(Pogonatherum crinitum(Thunb.)Kunth)的干燥全草,別名貓尾草、筆仔草、黃毛草。文獻(xiàn)記載,本品性寒,無毒,具有清熱、解暑、利尿等功效,常用于治療感冒高熱、中暑、尿路感染、糖尿病和黃疸型肝炎等癥,現(xiàn)代藥理研究表明金絲草具有降血糖、抑菌及保肝等作用。為尋找金絲草70%乙醇提取物抗HBV有效成分,本論文擬對其乙酸乙酯部位和正丁醇部位開展系統(tǒng)的分離純化及結(jié)構(gòu)鑒定工作。同時,以HBV-DNA轉(zhuǎn)染人肝癌細(xì)胞所得的HepG2 2.2.15細(xì)胞為體外試驗?zāi)Ｐ?以細(xì)胞培養(yǎng)上清液中乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和乙型肝炎e抗原(HBeAg)的分泌變化為檢測指標(biāo),篩選顯示較好體外抗HBV活性的單體化合物。本論文研究結(jié)果可以為完善金絲草藥材化學(xué)成分的研究內(nèi)容,闡明金絲草抗HBV的藥效物質(zhì)提供一定的科學(xué)依據(jù)。同時,也為尋找具有天然抗HBV作用的活性化合物奠定基礎(chǔ),有利于金發(fā)草屬藥用植物的開發(fā)與應(yīng)用。第一部分金絲草活性部位化學(xué)成分的研究目的:分離純化金絲草70%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位及正丁醇萃取部位的化學(xué)成分,得到單體化合物并鑒定結(jié)構(gòu)。為尋找體外抗HBV活性化合物提供一定的物質(zhì)基礎(chǔ),為金絲草藥材化學(xué)成分的深入研究提供科學(xué)依據(jù)。方法:應(yīng)用大孔樹脂(乙醇-水系統(tǒng))、硅膠(氯仿-甲醇系統(tǒng))、聚酰胺(乙醇-水系統(tǒng))、Sephadex LH-20(甲醇-水系統(tǒng))等柱色譜技術(shù),結(jié)合重結(jié)晶、半制備HPLC等方法分離純化金絲草70%乙醇提取物乙酸乙酯、正丁醇部位的化學(xué)成分。依據(jù)化合物理化性質(zhì)及波譜數(shù)據(jù)(MS、~1H-NMR、~(13)C-NMR、HMBC、HSQC)鑒定化學(xué)結(jié)構(gòu)。結(jié)果:從金絲草70%乙醇提取物的乙酸乙酯及正丁醇萃取部位分離得到了11個單體化合物,鑒定了其中8個化合物結(jié)構(gòu),推測了1個化合物結(jié)構(gòu)。鑒定結(jié)構(gòu)的8個化合物分別為,6,8,4?-三羥基-7,3?-二甲氧基異黃酮(1)、槲皮素-7,4?-二甲醚-5-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(2)、8-[1-(3,4-二羥基苯基)乙基]槲皮素(3)、金圣草素-7-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷(4)、山柰酚-3-O-(2??,3??-二-O-E-p-香豆�；�)-α-L-吡喃鼠李糖苷(5)、1,3,7-三羥基Tk噸酮-2-C-β-D-吡喃葡萄糖苷(6),木犀草素-6-C-β-D-吡喃波依文糖苷(7)、木犀草素-6-C-β-D-吡喃葡萄糖苷(8);推測結(jié)構(gòu)的1個化合物為芹菜素-6-C-α-L-鼠李糖基-(1→4)-α-L-鼠李糖苷(9)。分離得到的化合物均屬黃酮類化合物。結(jié)論:化合物1~6、化合物9均為首次從金發(fā)草屬植物中分離得到。第二部分單體化合物體外抗HBV活性檢測目的:對化合物1~8進(jìn)行體外抗HBV活性檢測,篩選其中顯示抗HBV活性的單體化合物,為進(jìn)一步闡明金絲草抗HBV藥效物質(zhì)提供一定的科學(xué)依據(jù)。方法:選用HepG2 2.2.15細(xì)胞為體外試驗?zāi)Ｐ?以細(xì)胞培養(yǎng)上清液中HBsAg和HBeAg的分泌變化為檢測指標(biāo),檢測各單體化合物的體外抗HBV活性。結(jié)果:化合物3、化合物5、化合物7和化合物8一定程度上抑制了HepG22.2.15細(xì)胞分泌HBsAg,IC_(50)分別為96.6、127.1、72.4和54.5μg/mL;化合物7、化合物8對HBeAg的分泌也有一定的抑制作用,IC_(50)分別為81.0、61.3μg/mL。結(jié)論:從金絲草中分離得到的部分黃酮類單體化合物顯示良好的體外抗HBV活性。
【學(xué)位授予單位】：承德醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R284;R285

【參考文獻(xiàn)】

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1 趙立新;盧天虎;莊海;陳應(yīng)強(qiáng);;回顧性分析拉米夫定聯(lián)合阿德福韋酯治療HBeAg陽性失代償期乙肝肝硬化患者的臨床療效[J];中國生化藥物雜志;2015年04期

2 劉經(jīng)亮;凌育趙;王如意;劉綱勇;;虎舌紅中黃酮類化學(xué)成分研究[J];中草藥;2015年06期

3 李筱玲;鄧寒霜;;黃酮類化合物提取分離方法研究進(jìn)展[J];陜西農(nóng)業(yè)科學(xué);2015年01期

4 尹志峰;高大昕;王宏偉;趙桂琴;;金絲草化學(xué)成分[J];中國實驗方劑學(xué)雜志;2014年20期

5 鄭超;劉敏;李健;;田基黃體外抗乙型肝炎病毒活性成分的研究[J];天然產(chǎn)物研究與開發(fā);2014年09期

6 歐霞;李勁平;佘志堅;潘陽;;高速逆流色譜法在天然藥物研究中的應(yīng)用概況[J];中南藥學(xué);2014年03期

7 吳漫曄;廖鵬;林凱城;孫凌燕;;潮汕地區(qū)中草藥金絲草的研究概況[J];北方藥學(xué);2013年08期

8 馬雙剛;袁紹鵬;侯琦;李勇;陳霞;庾石山;;山香圓葉中黃酮苷類成分及其抗炎活性研究[J];中國中藥雜志;2013年11期

9 向昌國;向?qū)?黃成龍;孫海濱;李文芳;;響應(yīng)面法優(yōu)化刺槐花黃酮類化合物的微波提取工藝[J];食品科學(xué);2011年22期

10 吳維穎;;貓毛草提取物對小鼠肝損傷的保護(hù)作用[J];中國現(xiàn)代藥物應(yīng)用;2011年06期

本文編號：2761326