【摘要】：炎癥是機體對損傷因子所發(fā)生的防御反應(yīng),病原體的感染和組織損傷都能引起炎癥反應(yīng),可發(fā)生于任何組織和器官。對于人類健康,炎癥是把雙刃劍,一方面能夠清除病原體和恢復(fù)組織損傷,有利于維持機體的免疫穩(wěn)態(tài);另一方面,過度的、異常的炎癥反應(yīng)會導(dǎo)致組織的病變和二次損傷,也是許多疾病的發(fā)病基礎(chǔ)。目前臨床抗炎藥物開始出現(xiàn)不良反應(yīng),因此,尋找新的低毒高效的炎癥抑制劑是我們的重要任務(wù)。天然萜類化合物是由甲戊二羥酸衍生而來的化合物,其結(jié)構(gòu)類型繁多,活性豐富,并且有報道發(fā)現(xiàn)萜類化合物具有較好的抗炎活性,這為我們發(fā)現(xiàn)新抗炎藥物提供了新思路。本論文運用脂多糖(LPS)誘導(dǎo)的RAW264.7巨噬細胞體外炎癥模型,對大戟屬植物金剛纂(Euphorbia neriifolia L.)、火殃|(Euphorbia antiquorum)、霸王鞭(Euphorbia royleana)等植物乙酸乙酯萃取相不同餾分進行NO抑制活性篩選發(fā)現(xiàn)三種植物的70%和90%甲醇/水餾分具有較好的抑制活性,尤其是90%甲醇/水餾分IC_(50)分別為0.4μg/mL,15.0μg/m L,6.85μg/m L,進一步對這三種植物活性部位分離純化獲得的單體化合物,以及從纈草屬植物蜘蛛香(Valeriana jatamansi Jones),雷公藤屬植物昆明山海棠(T.hypoglaucum),獐牙菜屬植物獐牙菜(Swertia bimaculata),槐屬植物苦參(Sophoraflavescens)等其他植物中得到的共134個單體化合物進行抑制NO生成活性篩選。這些化合物包括:91個萜類化合物(環(huán)烯醚萜,倍半萜,巨大戟烷型二萜,千金子烷型二萜,貝殼烷型二萜,松香/海松烷型二萜,阿替生烷型二萜和三萜);其他結(jié)構(gòu)類型的化合物有43個。篩選結(jié)果發(fā)現(xiàn)有17個化合物顯著的抑制NO生成,分別為13個萜類化合物和3個異戊烯基黃酮以及1個木脂素類化合物。經(jīng)構(gòu)-效分析發(fā)現(xiàn),萜類化合物母核上引入�；梢蕴岣呋钚�,并隨著�；鶖�(shù)量越多、�；兼溤介L活性越好;多元環(huán)萜類C環(huán)上的取代基類型是發(fā)揮抗炎活性的主要原因,并且松香/海松烷型二萜和巨大戟烷型二萜具有較好的抑制活性,因此,我們將對抑制活性較好這幾種類型的化合物進行抗炎活性的研究和作用機制的探索。五個松香烷型二萜化合物:52、57、54、55、56,均從昆明山海棠中分離獲得,其結(jié)構(gòu)具有相似性,均顯示出體外NO抑制活性。其中化合物52(tritophenolide)和57(triptoquinone)活性最為明顯,IC_(50)分別為21.4和2.58μM,進一步采用ELISA法和Western Blot法對化合物的抗炎活性進行確認并探索其作用機制,結(jié)果顯示,在LPS活化的巨噬細胞中,兩個化合物都能抑制iNOS,COX-2蛋白的表達和炎癥因子NO,IL-1β,IL-6,TNF-α分泌,對信號通路影響研究發(fā)現(xiàn),化合物52可能主要下調(diào)MAPK(p-p38,p-JNK,p-ERK1/2)信號通路的活化,化合物57可能是同時抑制NF-κB(p-IκB)和MAPK兩條信號通路的活化,進而抑制炎癥因子的分泌來達到抗炎作用。另外,從金剛纂中分離得到的巨大戟烷型二萜化合物27(euphorneroid E)和28(eurifoloid A)、松香烷型二萜化合物60(antiquorine A),阿替生烷型二萜化合物72(eurifoloid N),海松烷型二萜化合物64(sandaracopimaradiene-3),均表現(xiàn)出體外NO抑制活性,IC_(50)分別為6.31,5.78,22.7,37.1和19.0μM。進一步機制研究發(fā)現(xiàn),在LPS活化的巨噬細胞中,化合物60,72,64能夠明顯的抑制炎癥因子IL-1β,IL-6,TNF-α和iNOS,COX-2蛋白表達,可能是通過下調(diào)MAPKs信號通路的活化。另外兩個化合物27和28對IL-1β,IL-6和iNOS的表達體現(xiàn)明顯的抑制作用,然而對TNF-α和COX-2的表達體現(xiàn)較明顯的促進作用,在信號通路方面明顯的下調(diào)MAPK/p38的活化,上調(diào)MAPK/erk的磷酸化水平,因此,化合物27,28作用機制需要我們進一步實驗探究。
【學(xué)位授予單位】：昆明理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R285;R284
【圖文】：

圖 1-1 炎癥的原因，生理和病理結(jié)果Figure 1-1 Causes of inflammation, physiological and pathological results1.1.3 參與炎癥反應(yīng)的主要免疫細胞和炎癥介質(zhì)炎癥過程就是可溶性因子與細胞相互作用復(fù)雜的一個過程。當(dāng)機體受到損傷或者病原體侵染時，體內(nèi)免疫系統(tǒng)就會開啟保護機制，大量的免疫細胞（immunocyte）包括 T 淋巴細胞、B 淋巴細胞、巨噬細胞、中性粒細胞、嗜酸粒細胞和嗜堿粒和肥大細胞等會以滲出的形式到達損傷或感染部位，到達之后由致炎因素觸發(fā)激活免疫細胞內(nèi)的信號通路，使細胞處于活化狀態(tài)[22]。致炎因素通常分為外源性和內(nèi)源性兩種，外源性致炎因素（Exogenous inducers）包括生物性和非生物性，生物性主要是指能夠引起機體感染的病毒、細菌、寄生蟲等；非生物性致炎因素是指過敏原、刺激、異物和有毒化合物。內(nèi)源性致炎因素（Endogenous inducers）包括細胞來源、組織來源、血漿來源和細胞外基質(zhì)來源[23]�；罨拿庖呒毎麜置诖罅康目扇苄砸蜃樱ㄖ卵捉橘|(zhì)（pro-inflammatorymediators）和抗炎介質(zhì)(anti-inflammatory mediators)。致炎介質(zhì)的是由專門白細胞

圖 1-2 免疫細胞和炎癥因子相互作用形成的信息流[10]Figure 1-2. Information flow of immune cells and inflammatory factors1.1.4 脂多糖誘導(dǎo)的炎癥信號通路在細菌感染的炎癥中，革蘭氏陰性菌細胞壁表面的脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)是致炎性最強的內(nèi)毒素，能夠引起強烈的炎癥反應(yīng)。LPS 是革蘭氏陰性菌胞壁組成成分，細菌死亡時釋放到胞外發(fā)揮作用，其結(jié)構(gòu)由 4 部分組成：具有毒力活性的類脂 A、多糖成分外核心、內(nèi)核心、O-特異側(cè)鏈。LPS 先和血清中的結(jié)合蛋白（LPS binding protein, LBP）結(jié)合，再與細胞膜上的各種受體相結(jié)合，例如，Toll 樣受體（toll like receptors, TLRs）[33-34]、CD14（cluster of differentiation 14）[35]和髓樣分化蛋白-2（myeloid differentiationa-2, MD-2）[36]，結(jié)合后激活細胞內(nèi)一系列的蛋白信號級聯(lián)轉(zhuǎn)導(dǎo)，促使炎癥因子的產(chǎn)生，如 TNFα、IL-1β、IL-6 等。對于受感染的機體來說，一方面，炎癥因子可以誘導(dǎo)急性炎癥的發(fā)生，促使免疫細胞在感染部位聚集，從體內(nèi)清除病原體。另一方面， LPS 過度的刺激會促使

圖 1-3 巨噬細胞被激活時所涉及的炎癥信號轉(zhuǎn)導(dǎo)[43]ig. 1-3 Inflammatory signal transduction involved in activation of macrophaκB 信號通路 核轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子（nuclear factor-κB，NF-κB）是錄因子家族，通過控制基因網(wǎng)絡(luò)表達在心血管生長、應(yīng)激反應(yīng)用。雖然 NF-κB 亞基廣泛表達，但它們的作用是以細胞類型節(jié)的，從而可以產(chǎn)生不同的效應(yīng)[44]。例如，紫外、細胞因子、壁的產(chǎn)物、血管升壓類藥物、病毒感染和DNA損傷都能夠激活κB 的激活被認為是由兩個不同的途徑控制的，稱為 經(jīng)典‖和 ]。(1)經(jīng)典途徑。正常情況下，Rel A(p65)·NF-κB 通過與 IκBα失去與 DNA 結(jié)合和核轉(zhuǎn)位能力的復(fù)合體，游離在細胞質(zhì)中[4，TNF-α，IL-1）與膜受體結(jié)合后激活 IKK 復(fù)合體（包括 IKNEMO，IKAP，F(xiàn)IP）使 IKKα 和 β 磷酸化，重新游離到細胞

【參考文獻】

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本文編號：2760753