【摘要】：背景缺鐵性貧血在經濟不發(fā)達地區(qū)的嬰幼兒、育齡婦女高發(fā),造成學習記憶能力下降,免疫功能低下等問題。中醫(yī)理論認為血是記憶之本,四物湯是補血經典方劑,對缺鐵性貧血幼鼠學習記憶是否有影響尚未見報道。本研究得到了重慶市基礎與前沿研究計劃項目(csct2014jcyj A10122)的支持。目的研究四物湯對缺鐵性貧血幼鼠的體質與學習記憶能力改善作用及其作用機制,為進一步將四物湯作為用于治療缺鐵性貧血的藥物提供理論依據。方法1四物湯水煎液主要成分含量的測定試驗方法原子吸收法測定四物湯水煎液中的鐵含量。高效液相色譜建立四物湯中阿魏酸,毛蕊花糖苷和芍藥苷含量的測定方法。測定條件:色譜柱均為YMC-PACK ODS-A柱,流速均為1.0m L·min-1,柱溫均為30℃。阿魏酸含量測定的流動相為乙腈:0.085%磷酸溶液=17:83,檢測波長為316nm。毛蕊花糖苷含量測定的流動相為乙腈:0.1%醋酸溶液=16:84,檢測波長為334nm。芍藥苷含量測定的流動相為乙腈:0.1%磷酸溶液=14:86,檢測波長為230nm。2缺鐵性貧血幼鼠模型復制及分組給藥21d大鼠,雌雄各半,分為正常組10只和造模組50只,分別飼喂含鐵約45ppm的標準飼料或含鐵約3ppm的低鐵飼料,自由攝食飲水。2周后,各組大鼠內眥靜脈采血測定血常規(guī),以每只大鼠血紅蛋白含量和體重均低于正常組大鼠均值判定為該大鼠造模成功。用隨機數表法將造模成功的大鼠分為模型組,琥珀酸亞鐵50mg·kg-1組,四物湯4g·kg-1組,8g·kg-1組和16g·kg-1組,每組10只。統(tǒng)計各造模組大鼠血紅蛋白含量和體重無顯著性差異后,灌胃給藥,每天1次,4周后結束給藥,進行下列各項試驗。3四物湯水煎液對缺鐵性貧血幼鼠體質的改善作用試驗方法各組大鼠內眥靜脈采血測定血常規(guī),制作血涂片。肝臟行冰凍切片制作HE染色。分析比較各指標組間差異性。4四物湯水煎液對缺鐵性貧血幼鼠學習記憶能力的改善作用試驗方法(1)識別記憶能力測定:采用新舊物體替換法測試大鼠接觸物體所占時間,共3天,大鼠對新、舊物體的探究時間分別記為Tn和Tf。大鼠接觸新物體所占時間的比值=Tn/Tn+Tf。比值越大,表明大鼠的識別記憶能力越強。(2)工作記憶能力測定:采用Morris水迷宮水下平臺象限法,測試大鼠找到平臺的平均時間,共4天。統(tǒng)計各組大鼠第1,2次找到平臺的平均時間差。平均時間差越大,表明大鼠的工作記憶能力越強。(3)空間記憶能力測定:第1~4天為定位航行試驗。采用Morris水迷宮水下平臺象限法,測得大鼠找到平臺的時間為逃避潛伏期。逃避潛伏期越短,表明大鼠空間記憶獲取的能力越強。第5天為空間探索試驗,撤去平臺,大鼠在平臺所在象限游泳的時間和距離越長,表明大鼠空間記憶保持的能力越強。5四物湯水煎液改善缺鐵性貧血幼鼠體質和學習記憶能力的機制試驗方法取血分離血清測定血清鐵、總鐵結合力、血清鐵蛋白和血清鐵調素。肝組織勻漿測定肝臟鐵和肝臟鐵調素含量、肝臟鐵蛋白、轉鐵蛋白和轉鐵蛋白受體1的表達。腦組織行冰凍切片制作HE染色。分離海馬區(qū),采用免疫印跡法檢測突觸可塑性相關蛋白BDNF,Trk B,Cam KⅡα和CREB-1的表達。結果1試驗用四物湯水煎液的3種主要成分含量和Fe含量本試驗四物湯水煎液中阿魏酸含量為0.374 mg·g-1,毛蕊花糖苷含量為0.040 mg·g-1,芍藥苷含量為5.837mg·g-1,Fe含量為0.359 mg·g-1。2缺鐵性貧血幼鼠模型成功率及用藥前組間均衡性檢驗與正常組相比,50只造模大鼠血紅蛋白含量和體重每只均顯著低于正常組大鼠均值,造模成功率100%。將造模成功大鼠隨機分組后,各造模組大鼠血紅蛋白含量和體重均無顯著性差異(均P0.05)。3四物湯水煎液顯著改善缺鐵性貧血幼鼠的體質與正常組相比,模型組大鼠活動量減少,耳廓和腳趾呈蒼白色;體重和各血常規(guī)參數顯著降低(均P0.05);紅細胞數量減少,體積變小,中央淡染區(qū)擴大;肝臟呈淺紅色,中央靜脈周圍的肝細胞索分界不清晰,排列雜亂。與模型組相比,四物湯組大鼠活動量增多,耳廓和腳趾色澤紅潤;體重和血常規(guī)各參數顯著升高(均P0.05);紅細胞數量增多,體積變大,中央淡染區(qū)縮小;肝臟顏色變紅,中央靜脈周圍的肝細胞索分界較清晰,排列趨于整齊。4四物湯水煎液顯著改善缺鐵性貧血幼鼠的學習記憶能力(1)與正常組相比,模型組大鼠接觸新物體所占時間顯著縮短(P0.05)。與模型組相比,四物湯各組大鼠接觸新物體所占時間均顯著延長(P0.05)。表明四物湯可以顯著改善缺鐵性貧血幼鼠的識別記憶。(2)與正常組相比,模型組大鼠第1,2次找到平臺的平均時間差顯著縮短(P0.01)。與模型組相比,四物湯16g·kg-1組大鼠第1,2次找到平臺的平均時間差顯著延長(P0.05)。表明四物湯可以顯著改善缺鐵性貧血幼鼠的工作記憶。(3)定位航行試驗中,與正常組相比,模型組大鼠第2天的逃避潛伏期顯著延長(P0.01)。與模型組相比,四物湯8g·kg-1和16g·kg-1組大鼠第2天的逃避潛伏期顯著縮短(P0.05)。表明四物湯可以顯著提高缺鐵性貧血幼鼠的空間記憶獲取能力。(4)空間探索試驗中,與正常組相比,模型組大鼠在平臺所在象限游泳的時間和距離顯著縮短(P0.05)。與模型組相比,四物湯各組大鼠在平臺所在象限游泳的時間均顯著延長(P0.05),四物湯8g·kg-1和16g·kg-1組大鼠在平臺所在象限游泳的距離顯著延長(P0.05)。表明四物湯可以顯著提高缺鐵性貧血幼鼠的空間記憶保持能力。5四物湯水煎液改善缺鐵性貧血幼鼠體質和學習記憶能力的機制(1)四物湯水煎液改善缺鐵性貧血幼鼠體質的機制:與正常組相比,模型組大鼠血清鐵、血清鐵蛋白、肝臟鐵含量和肝臟鐵蛋白表達顯著降低(均P0.05);總鐵結合力、血清鐵調素、肝臟鐵調素、轉鐵蛋白和轉鐵蛋白受體1表達顯著升高(均P0.05);與模型組相比,四物湯組血清鐵、血清鐵蛋白、肝臟鐵含量和肝臟鐵蛋白表達顯著升高(均P0.05);總鐵結合力、血清鐵調素、肝臟鐵調素、轉鐵蛋白和轉鐵蛋白受體1表達顯著降低(均P0.05)。(2)四物湯水煎液改善缺鐵性貧血幼鼠學習記憶能力的機制:與正常組相比,模型組大鼠海馬CA1區(qū)的錐體細胞排列紊亂,海馬區(qū)BDNF、Trk B、Cam KⅡα和CREB-1表達顯著降低(均P0.01)。與模型組相比,四物湯各組大鼠海馬CA1區(qū)的錐體細胞排列趨于整齊,海馬區(qū)BDNF、Trk B、Cam KⅡα和CREB-1表達均顯著升高(均P0.05)。結論1本試驗對所用四物湯水煎液進行了質量控制,其中阿魏酸含量為0.374 mg·g-1,毛蕊花糖苷含量為0.040 mg·g-1,芍藥苷含量為5.837 mg·g-1,Fe含量為0.359 m g·g-1。2四物湯可以顯著改善缺鐵性貧血幼鼠的體質。其機制與升高血清鐵、血清鐵蛋白、肝臟鐵含量,促進肝臟鐵蛋白表達,降低總鐵結合力、血清鐵調素含量,抑制肝臟鐵調素、轉鐵蛋白和轉鐵蛋白受體1的表達,調節(jié)鐵代謝有關。3四物湯可以顯著提高缺鐵性貧血幼鼠的識別記憶、工作記憶和空間記憶能力。其機制可能與上調海馬區(qū)BDNF及BDNF-Trk B-CREB通路蛋白的表達有關。
【學位授予單位】：西南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R285.5

【參考文獻】

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本文編號：2760524