【摘要】：本研究采用中性紅吞噬法、格里斯(Griess)試驗、雙抗體夾心法以及熒光定量 PCR(Quantitative real time polymerase chain reaction,qRCR)技術(shù)分別測定了巨噬細(xì)胞的吞噬能力,增殖能力,一氧化氮(Nitric oxide,NO)的分泌量,乳酸脫氫酶(Lactate dehydrogenase,LDH)、腫瘤壞死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白介素 1β(Interleukin 1 beta,IL-1β)的分泌量以及巨噬細(xì)胞鈣調(diào)素(Calmodulin,CaM)、刺激性G蛋白α(Stimulatory GTP-blinding protein alpha,GSα)基因的表達(dá),探索不同濃度的絞股藍(lán)多糖(Gynostemma pentaphyllum polysaccharides,GPP)對小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的影響,進(jìn)一步探討GPP在機體免疫功能的調(diào)節(jié)作用及其可能的作用機理,為GPP的臨床應(yīng)用和進(jìn)一步開發(fā)提供理論依據(jù)。結(jié)果表明:1、經(jīng)GPP處理后的腹腔巨噬細(xì)胞吞噬能力都有所增強。不同濃度的GPP刺激小鼠巨噬細(xì)胞后,吞噬能力無明顯的量效關(guān)系,其中GPP的濃度為200μg/mL時,吞噬活性最高,與空白對照組相比差異顯著(P0.05)。2、從腹腔巨噬細(xì)胞增殖水平來看,不同濃度的GPP處理組都可以促進(jìn)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞增殖。當(dāng)GPP的濃度達(dá)到50μg/mL及以上時,與空白對照組相比差異顯著(P0.05),但其組間差異不明顯。3、不同濃度的GPP刺激小鼠腹腔巨噬細(xì)胞均能顯著促進(jìn)NO分泌(P0.05),且NO分泌量隨著GPP濃度的增加而增加。4、經(jīng)各濃度GPP和LPS作用后的小鼠腹腔巨噬細(xì)胞,其分泌LDH的量均有所增加,但不呈正相關(guān)。其中GPP濃度為50μg/mL和100μg/mL時,與空白對照組相比,差異顯著(P0.05)。5、從TNF-α的分泌水平來看,當(dāng)GPP的濃度達(dá)到25 μg/mL及以上時,巨噬細(xì)胞TNF-α的分泌量較對空白照組而言差異顯著(P0.05);且隨著GPP濃度的增加,TNF-α的分泌量增加比較明顯,當(dāng)濃度達(dá)到100μg/mL時達(dá)到最大值,當(dāng)GPP濃度繼續(xù)增加時,TNF-α的分泌量下降。6、從IL-1β的分泌量來看,當(dāng)GPP的濃度達(dá)到25 μg/mL及以上時,巨噬細(xì)胞的IL-1β分泌量與空白對照組相比顯著差異(P0.05),且隨著GPP濃度的增加,IL-1β的分泌量增加比較明顯,當(dāng)GPP為100μg/mL時對IL-1β分泌的促進(jìn)作用最強(P0.05),之后IL-1β的分泌量會隨著濃度的增加而減少。7、各GPP給藥組均可提高小鼠腹腔巨噬細(xì)胞鈣調(diào)素基因的表達(dá),與空白對照組相比,25μg/mL及以上GPP給藥組均有顯著性差異(P0.05)。其中GPP濃度在100 μg/mL時CaM基因表達(dá)量達(dá)到最高,之后CaM基因表達(dá)量會隨著濃度的增加而降低。8、不同濃度的GPP都可顯著提高小鼠腹腔巨噬細(xì)胞GSα基因的表達(dá)(P0.05)。其中GPP濃度在25μg/mL時,對小鼠腹腔巨噬細(xì)胞GSα基因的表達(dá)促進(jìn)作用最強。結(jié)論:GPP對小鼠腹腔巨噬細(xì)胞有活化作用,GPP能刺激巨噬細(xì)胞增殖從而增加小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬能力,能提高小鼠腹腔巨噬細(xì)胞分泌NO以及細(xì)胞因子LDH、TNF-α和IL-1β,能上調(diào)CaM和GSα基因的表達(dá)。綜合本研究實驗結(jié)果來看,當(dāng)GPP濃度為50μg/mL時,效果明顯;100 μg/mL時效果最佳。
【學(xué)位授予單位】：廣西大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5
【圖文】：

（Ｇｒｏｕｐ）邐（｜ｉｇ／ｍＬ）逡逑空白對照組（Ｃｏｎｔｒｏｌ）邐－邐０．４１２±０．０５３ａ逡逑ＰＳ邋對照組（ＬＰＳ邋ｃｏｎｔｒｏｌ）邐１０邐０．５１０邋±0．0４３ｂｃ逡逑１２．５邐０．４６１土０．０２０ａｃ逡逑２５邐０．４６３±０．００３２ａｃ逡逑ＧＰＰ邐５０邐０．４７３邋±０．０２５ｂｃ逡逑１００邐０．４８０邋士０．０７２１５０逡逑２００邐０．５０６邋±０．０２９邋ｂｃ逡逑列不同字母上標(biāo)表示差異顯著（尸＜０．０５邋）。Ｎｏｔｅ：邋Ｖａｌｕｅｓ邋ｉｎ邋ｓａｍｅ邋ｃｏｌｕｍｎ邋ｗｉｔｈ邋ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ邋Ｓｕｐｅｒｓｃｒｔｌｙ邋（尸＜０．０５）．逡逑ＰＰ對小鼠腹腔巨噬細(xì)胞分泌］ＶＯ產(chǎn)生的影響逡逑繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線逡逑

為探究不同濃度ＧＰＰ對小鼠腹腔巨噬細(xì)胞分泌ＬＤＨ產(chǎn)生的影響，將巨噬細(xì)胞給予逡逑不同濃度的ＧＰＰ或ＬＰＳ培養(yǎng)４８ｈ后，取細(xì)胞培養(yǎng)上清液，測定ＬＤＨ的濃度。結(jié)果如逡逑圖２－４所示（具體數(shù)據(jù)見附表１－２），ＬＰＳ處理組和各濃度ＧＰＰ組小鼠腹腔巨噬細(xì)胞分逡逑泌ＬＤＨ的含量均有所增加，但不呈正相關(guān)。當(dāng)ＧＰＰ濃度達(dá)到２５ｐｇ／ｍＬ時，巨噬細(xì)胞逡逑分泌ＬＤＨ的量就接近穩(wěn)定，其中ＧＰＰ濃度為５０邋ｐｇ／ｍＬ和１００陽／ｍＬ時，與空白對照組逡逑相比，差異顯著（Ｐ＜0．0５）。逡逑４０－．逡逑ｂ邐＿■邋Ｃｏｎｔｒｏｌ逡逑ａ邋ｙ邋＾邋Ｔ邐ｙ邐＊？■＇邐１２．５逡逑ｉ２0Ｊ｜ｉ｜｜ｌ｜邋＝：：逡逑岕＿ｈ逡逑＃邋Ｐ邐＾邋＃逡逑ｃＰ逡逑Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ（Ｍｇ邋／ｍＬ）逡逑圖２￣４邋ＧＰＰ對小鼠腹腔巨噬細(xì)胞分泌ＬＤＨ的影響逡逑Ｆｉｇ．邋２－４邋Ｅｆｆｅｃｔｓ邋ｏｆ邋ＧＰＰ邋ｏｎ邋ＬＤＨ邋ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ邋ｏｆ邋ｍｉｃｅ邋ｐｅｒｉｔｏｎｅｒａｌ邋ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ逡逑注：不同字母表示差異顯著（戶＜０．０５）。Ｎｏｔｅ：邋Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ邋ｓｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔｓ邋ｄｉｆｆｅｒ邋ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ邋（Ｐ＜０．０５）．逡逑２５逡逑

２．３．５．１繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線逡逑將邋ＴＮＦ－ａ標(biāo)準(zhǔn)品倍比稀釋為邋５邋個濃度（８００ｎｇ／Ｌ、４００ｎｇ／Ｌ、２００ｎｇ／Ｌ、１００ｎｇ／Ｌ、逡逑５０邋ｎｇ／Ｌ）按照試劑盒說明操作后繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，如圖２－５所示，ＴＮＦ－ａ的摩爾濃度與其逡逑ＯＤ值呈線性關(guān)系，標(biāo)準(zhǔn)曲線的公式為：ｙ邋＝邋０．０００７ｘ邋＋０．０５２３，其中Ｒ２邋＝邋０．９９１２。逡逑０．７邋－｜逡逑0邋６邋．邐ｙ＝Ｏ．ＯＣＫ）７ｘ邋－ｒ邋０．０５２３逡逑Ｒ２邋＝邋０．９９１２逡逑＝０．４邋－邐ｙ逡逑％逡逑§逡逑０１逡逑Ｏ邋－Ｈ邐１邐１邐１邐１邐１逡逑０邐２００邐４００邐６００邐ＳＯＤ邐ＩＯＯＯ逡逑Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｍ逡逑圖２－５梯度濃度ＴＮＦ－ａ標(biāo)準(zhǔn)溶液吸光值逡逑Ｆｉｇ．邋２－５邋Ａｂｓｏｒｂａｎｃｅ邋ｏｆ邋ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ邋ｇｒａｄｉｅｎｔ邋ｏｆ邋ＴＮＦ－ａ邋ｓｔａｎｄａｒｄ邋ｓｏｌｕｔｉｏｎ逡逑２．３．５．２不同濃度ＧＰＰ對小鼠腹腔巨噬細(xì)胞分泌ＴＮＦ－ｃｔ產(chǎn)生的影響逡逑巨噬細(xì)胞給予不同濃度的ＧＰＰ或ＬＰＳ培養(yǎng)４８邋ｈ后，取細(xì)胞培養(yǎng)上清液，測ＴＮＦ－ａ逡逑的濃度。結(jié)果由圖２－６可以發(fā)現(xiàn)（具體數(shù)據(jù)見附表１－３），當(dāng)ＧＰＰ的濃度達(dá)到２５嗎／ｍＬ逡逑及以上時，巨噬細(xì)胞ＴＮＦ－ａ的分泌量較對空白照組而言差異顯著ＣＰ＜０．０５）；且隨著ＧＰＰ逡逑濃度的增加，ＴＮＦ－ａ的分泌量增加比較明顯，當(dāng)濃度達(dá)到１００邋｜ｉｇ／ｍＬ時達(dá)到最大值，逡逑此時與ＬＰＳ對照組促巨噬細(xì)胞所分泌ＴＮＦ－ａ的含量相當(dāng)；當(dāng)ＧＰＰ濃度繼續(xù)增加時

【參考文獻(xiàn)】

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1 王旭東;毛偉;關(guān)紅;李培鋒;周蕾;;TCDCA對大鼠肺泡巨噬細(xì)胞鈣調(diào)素基因表達(dá)的影響[J];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);2015年05期

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4 王迎進(jìn);馬文輝;李嘉慧;何s

本文編號：2758891