【摘要】：目的:整理總結(jié)導(dǎo)師臨床辨病與辨證相結(jié)合診治腫瘤的學(xué)術(shù)思想,并通過動物實驗和細(xì)胞實驗,研究闡明導(dǎo)師常用益氣活血配伍黃芪-莪術(shù)的抗腫瘤效果及其抗腫瘤血管生成的作用機制。方法:1.學(xué)術(shù)思想總結(jié)方法:通過整理、總結(jié)導(dǎo)師的理論授課、臨證講解、學(xué)術(shù)論文、專題講座等資料,參考古今中醫(yī)相關(guān)文獻(xiàn),結(jié)合同學(xué)討論,分析歸納導(dǎo)師在治療腫瘤類疾病方面的臨床經(jīng)驗和用藥規(guī)律,對導(dǎo)師辨病與辨證相結(jié)合診治腫瘤的學(xué)術(shù)思想進(jìn)行系統(tǒng)總結(jié)。2.動物實驗研究方法:皮下注射瘤細(xì)胞構(gòu)建C57BL/6小鼠Lewis肺癌荷瘤模型,隨機分為模型組、順鉑組(DDP)、黃芪及莪術(shù)單藥組、黃芪-莪術(shù)1:1,2:1,3:1配伍組。中藥組予相應(yīng)劑量藥物灌胃15d,DDP組在第1,3,5,7,9,11,13,15d腹腔注射順鉑(2mg/kg),給藥期間測量小鼠體重及腫瘤體積變化。第16d處死小鼠后,計算瘤重指數(shù)、抑瘤率、胸腺及脾臟指數(shù),計數(shù)肺轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié),H-E染色分析瘤組織病理學(xué)變化。選擇模型組、DDP組、黃芪-莪術(shù)1:1,2:1,3:1配伍組的瘤組織進(jìn)行抗腫瘤血管生成相關(guān)檢測,免疫組化法檢測瘤組織微血管密度(MVD);Western Blot檢測瘤組織TGF-β1/MAPKs/HIF-lα信號通路關(guān)鍵因子的表達(dá)。3.細(xì)胞實驗研究方法:采用均勻試驗設(shè)計對黃芪-莪術(shù)配伍中4種已知的有效成分黃芪多糖、黃芪總皂苷、姜黃素、β-欖香烯進(jìn)行最優(yōu)組分配伍篩選,并觀察最優(yōu)組分配伍(E)在不同濃度和時間條件下對A549細(xì)胞增殖抑制的干預(yù)效果。將A549細(xì)胞分為空白對照組、CoCl2對照組、DDP+CoC12組(DDP)、0.5E+CoC12組(0.5E)、E+CoC12組(E)、2E+C0Cl2組(2E)進(jìn)行干預(yù),流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡率,應(yīng)用Western Blot法檢測凋亡相關(guān)的Bax、Bcl-2、caspase-3蛋白及血管生成相關(guān)的TGF-β1/MAPKs/HIF-lα信號通路關(guān)鍵因子表達(dá)水平。結(jié)果:1.學(xué)術(shù)思想總結(jié)結(jié)果:腫瘤具有共同的發(fā)病基礎(chǔ)及相似的病理機制,而現(xiàn)代治療手段在治療腫瘤的同時又可能成為損傷人體的病理因素;將腫瘤的不同發(fā)展階段、不同臨床特征、不同治療手段,均納入“辨病論治”范疇,并運用中醫(yī)學(xué)相關(guān)理論對其進(jìn)行辨病、辨證相結(jié)合的診治,將個體化、動態(tài)化的中醫(yī)治療優(yōu)勢體現(xiàn)在腫瘤綜合治療的全過程中。2.動物實驗研究結(jié)果:各藥物組的瘤重明顯低于模型組(P0.05);各中藥組在抑制瘤重和肺轉(zhuǎn)移方面不如DDP組,但3:1配伍組與DDP組的瘤重指數(shù)和肺轉(zhuǎn)移灶數(shù)目差異不顯著(P0.05);各中藥組的胸腺和脾臟指數(shù)高于DDP組(P0.01)。各藥物組MVD計數(shù)低于模型組(P0.01);各配伍組的MVD計數(shù)多于DDP組(P0.05)。DDP組、2:1和3:1配伍組的VEGF、TGF-βl表達(dá)低于模型組(P0.01);3:1配伍組VEGF表達(dá)低于DDP組(P0.01)。各藥物組的HIF-1表達(dá)低于模型組(P0.01);3:1配伍組與DDP組相比無顯著性差異(P0.05),且低于其它配伍組(P0.01)。各配伍組的p38MAPK、p-p38MAPK表達(dá)低于模型組及DDP組(P0.01)。各藥物組的ERK1/2、p-ERKl/2和JNK、p-JNK表達(dá)較模型組顯著降低(P0.01);3:1、2:1配伍組的ERK1/2、p-ERKl/2表達(dá)均低于 DDP 組(P0.01);2:1 配伍組 p-JNK 表達(dá)低于 DDP 組(P0.01)。3.細(xì)胞實驗研究結(jié)果:黃芪-莪術(shù)配伍中4種已知有效成分的最佳配伍組合(E)為200mg/L黃芪多糖聯(lián)合32mg/L姜黃素,E以劑量和時間依賴性的方式抑制A549細(xì)胞增殖。在化學(xué)缺氧環(huán)境下,E、2E組的凋亡率與DDP組差異不顯著(P0.05);2E組的Bax、Bcl-2表達(dá)與DDP組相比差異不顯著(P0.05),各劑量E組的caspase-3 表達(dá)均低于 DDP 組(P0.01);2E 組上調(diào) Bax、caspase-3 及下調(diào) Bcl-2表達(dá)的作用優(yōu)于其它劑量組。2E組TGF-β1、HIF-1α VEGF表達(dá)低于DDP組(P0.01)。E、2E 組 p38MAPK、p-p38MAPK 表達(dá)均低于 DDP 組(P0.01);0.5E、2E組的JNK和p-JNK表達(dá)低于DDP組(P0.05);各劑量最優(yōu)配伍組的ERK1/2、p-ERK1/2 表達(dá)均低于 DDP 組(P0.01)。結(jié)論:1.導(dǎo)師認(rèn)為腫瘤共同的發(fā)病基礎(chǔ)是正虛邪實、氣血紊亂;共同的病理因素是氣滯、血瘀、痰凝、癌毒;在辨病基礎(chǔ)上結(jié)合中醫(yī)四診的辨證,給予因人而異的、動態(tài)中醫(yī)治療,發(fā)揮對現(xiàn)代醫(yī)學(xué)治療方法的增效減毒作用,能夠改善腫瘤患者的生活質(zhì)量,提高中西醫(yī)結(jié)合治療腫瘤的水平。2.不同比例黃芪-莪術(shù)配伍能夠抑制Lewis肺癌荷瘤小鼠移植瘤的生長和轉(zhuǎn)移,降低瘤組織MVD,能夠不同程度的下調(diào)TGF-β1/MAPKs/HIF-1α信號通路關(guān)鍵因子TGF-β1、p38MAPK、p-p38MAPK、ERK1/2、p-ERK1/2、JNK、p-JNK、HIF-1α、VEGF的表達(dá),抑制腫瘤血管生成。3.黃芪多糖聯(lián)合姜黃素是黃芪-莪術(shù)配伍中4種已知有效成分抑制A549細(xì)胞增殖的最優(yōu)配伍組合,其通過調(diào)控Bax、Bcl-2與caspase-3的表達(dá)促進(jìn)A549細(xì)胞凋亡;并不同程度的下調(diào)TGF-β1/MAPKs/HIF-1α信號通路關(guān)鍵因子TGF-β1、p38MAPK、p-p38MAPK、ERK1/2、p-ERK1/2、JNK、p-JNK、HIF-1α、VEGF 的表達(dá),抑制腫瘤血管生成。
【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5
【圖文】：

逡逑給藥結(jié)束后，剝?nèi)⌒∈笄爸赶碌牧鼋M織，觀察其大體形態(tài)（圖２）。模型組瘤逡逑組織體積較大，剝離時比較費力，部分瘤體表面出現(xiàn)潰瘍，瘤體內(nèi)部組織結(jié)構(gòu)松散，逡逑伴有“中心性壞死”現(xiàn)象；順鉑組的瘤組織體積最小，較模型組更容易剝離；各中藥逡逑組中，單藥組瘤組織體積較配伍組大，且有部分出現(xiàn)“中心性壞死”現(xiàn)象，配伍組中逡逑瘤體表面潰瘍及“中心性壞死”現(xiàn)象出現(xiàn)次數(shù)較模型組減少。逡逑實驗結(jié)果顯示（見表１）：各藥物干預(yù)組的抑瘤率排序為：ＤＤＰ組＞３：１配伍組＞２：１逡逑配伍組＞１：１配伍組＞莪術(shù)單藥組＞黃芪單藥組。與模型組相比，各干預(yù)組的瘤重明顯逡逑降低（Ｐ＜０．０５）；各中藥配伍組與順鉑組相比，在抑制瘤重方面不如順鉑組效果好，但逡逑３：１和２：１配伍組與順鈾組的瘤重指數(shù)相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義（Ｐ＞０．０５）。３：１配伍組逡逑對瘤重的抑制效果優(yōu)于其它配伍組（Ｐ＜0．0５），且３：１和２：１配伍組的瘤重均低于黃逡逑芪單藥組和莪術(shù)單藥組（Ｐ＜０．０５），而１：１配伍組的瘤重與各單藥組相比差異無統(tǒng)計逡逑學(xué)意義（Ｐ＞０．０５）。單藥組中

圖４各組瘤組織ＭＶＤ的免疫組織化學(xué)檢測（ＩＨＣ４００Ｘ）

解放軍醫(yī)學(xué)院中醫(yī)師承制博士學(xué)位論文＜ｆ！；－－＾＞：－ｘ：；＾；逡逑．．邋？邋．邋．邋、逡逑■邋，邋－ｓ邋－逡逑．－＇．．．邋？－邋：逡逑＇邋…逡逑－邋．－．？邐——邋＇．逡逑．卜邋＇．灥，邐．ＰＤＰＳＢ邋、邐－邐１：＾邋＇逡逑－？邋－？－＇：？邋．邋：．ｖ－邋．．逡逑２：１邋灥邐＇邐３：料：逡逑圖４各組瘤組織ＭＶＤ的免疫組織化學(xué)檢測（ＩＨＣ４００Ｘ）。逡逑４０－Ｉ逡逑

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