【摘要】：目的:觀察鈣結(jié)合蛋白D28K(calbindin-D28K)在抑郁癥模型小鼠海馬CA1區(qū)的表達及分布情況,探討化濁解毒疏肝方對小鼠海馬細胞calbindin-D28K表達的影響,為抑郁癥的臨床治療,開辟新的思路。方法:雄性ICR小鼠60只,適應性飼養(yǎng)一周后,隨機分為6組,每組10只。分別為空白對照組組、模型組、陽性對照組(氟西汀組)、化濁解毒疏肝方組低、中、高劑量組(3.9 g·kg~(-1)·d~(-1)、7.8 g·kg~(-1)·d~(-1)、15.6g·kg~(-1)·d~(-1))。除空白對照組外,其他各組小鼠采取慢性不可預見性溫和刺激(CUMS)法復制抑郁癥模型。CUMS包括夾尾1 min、日夜顛倒24 h、噪音2 h,搖晃5 min、禁食24 h、異物24 h、異味24 h、潮濕24 h、禁水24 h、傾斜24 h、熱刺激2 h、束縛2 h、空籠24 h、冰水游泳5 min。每天隨機從其中抽取兩種,連續(xù)21天。制模的同時,空白對照組、模型組小鼠每天以0.3 mL生理鹽水灌胃,化濁解毒疏肝方低、中、高劑量組小鼠分別以3.9 g·kg~(-1)·d~(-1)、7.8 g·kg~(-1)·d~(-1)、15.6 g·kg~(-1)·d~(-1)的生藥量灌胃,氟西汀組小鼠以2.5 mg·kg~(-1)·d~(-1)的氟西汀灌胃。制模結(jié)束后,分別用糖水偏愛實驗、強迫游泳實驗、懸尾實驗、新奇攝食抑制實驗等方法分析動物的抑郁樣行為;用免疫組化法分別檢測小鼠海馬CA1區(qū)calbindin-D28K的表達和細胞凋亡。結(jié)果:1.行為學測試結(jié)果(1)與空白對照組相比,模型組小鼠的糖水偏愛分數(shù)顯著降低(P0.01);與模型組相比,氟西汀組、化濁解毒疏肝方低、中、高劑量組小鼠糖水偏愛分數(shù)顯著提高(P0.01);與氟西汀組相比,化濁解毒疏肝方中、高劑量組小鼠的糖水偏愛分數(shù)無顯著性差異(P0.05)。(2)與空白對照組相比,模型組小鼠懸尾總不動時間顯著延長(P0.01);與模型組相比,氟西汀組、化濁解毒疏肝方低中高劑量組小鼠懸尾總不動時間顯著延長(P0.01);與氟西汀組相比,化濁解毒疏肝方高劑量組小鼠懸尾總不動時間無顯著差異(P0.05)。(3)與空白對照組相比,模型組小鼠新奇抑制攝食量顯著減少(P0.01);與模型組相比,化濁解毒疏肝方中、高劑量小鼠新奇抑制攝食量顯著增多(P0.05,P0.01);與氟西汀組相比,化濁解毒疏肝方高劑量組小鼠新奇抑制攝食量顯著增多(P0.01)。(4)與空白對照組相比,模型組小鼠強迫游泳總不動時間顯著延長(P0.01);與模型組相比,氟西汀組、化濁解毒疏肝方低、中、高劑量組小鼠強迫游泳總不動時間顯著縮短(P0.01);與氟西汀組相比,化濁解毒疏肝方中、高劑量組小鼠強迫游泳總不動時間相當(P0.05)。2.免疫組織化學檢測結(jié)果顯示與空白對照組相比,模型組小鼠海馬CA1區(qū)的calbindin-D28K的表達顯著減少(P0.01);與模型組相比,氟西汀組、化濁解毒疏肝方低、中、高劑量組小鼠海馬CA1區(qū)calbindin-D28K的表達顯著增多(P0.01);與氟西汀組相比,化濁解毒疏肝方中、高劑量組小鼠海馬CA1區(qū)calbindin-D28K的表達相當(P0.05)。3.細胞凋亡檢測結(jié)果顯示與空白對照組相比,模型組海馬CA1區(qū)神經(jīng)細胞凋亡的數(shù)量顯著增多(P0.01);與模型組相比,氟西汀組、化濁解毒疏肝方低、中、高劑量組小鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)細胞凋亡數(shù)量顯著減少(P0.01);與氟西汀組相比,化濁解毒疏肝方中、高劑量組小鼠細胞凋亡數(shù)量相當(P0.05)。結(jié)論:1.化濁解毒疏肝方可以有效地緩解抑郁癥模型小鼠的各種抑郁癥狀,改善其學習記憶能力。2.化濁解毒疏肝方可以促進小鼠海馬細胞calbindin-D28K的表達,減少海馬神經(jīng)細胞凋亡數(shù)量。3.化濁解毒疏肝方在緩解抑郁癥模型小鼠抑郁癥狀方面存在劑量依賴關(guān)系。
【學位授予單位】：河北中醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5
【圖文】：

圖 1 各組小鼠海馬 CA1 區(qū) calbindin-D28K 表達情況（×200，免疫組化染色）Fig.1 Expression of calbindin-D28K in hippocampal CA1 region of eacgroup (×200, immunohistochemical staining)Note: The calbindin-D28K positive cells are indicated by the arrows. A. blacontrol group B. model group C. fluoxetine group D. Huazhuo Jiedu ShugRecipe low dose group E. Huazhuo Jiedu Shugan Recipe middle dose groupHuazhuo Jiedu Shugan Recipe High dose group

圖 2 各組小鼠海馬 CA1 區(qū)細胞凋亡情況（×400，TUNEL 法染色）Fig.2 Apoptosis of hippocampal CA1 region of each group of mice (×400,TUNEL staining)Note: The apoptotic cells are indicated by the arrows. A. blank control groupB. model group C. fluoxetine group D. Huazhuo Jiedu Shugan Recipe lowdose group E. Huazhuo Jiedu Shugan Recipe middle dose group F. HuazhuoJiedu Shugan Recipe High dose group

圖 3 各組小鼠糖水偏愛分數(shù)Fig.3 Sugar water preference scores in each groupNote：vs blank control group,aP＞0.05,bP＜0.05,cP＜0.01; vs model group,dP＞0.05,＜0.05,fP＜0.01; vs fluoxetine group,gP＞0.05,hP＜0.05,gP＜0.01.

【參考文獻】

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本文編號：2758832