發(fā)布時(shí)間：2020-07-15 23:31

【摘要】：背景和目的在公元1665年(清康熙年間)的《外科大成》中,記載的方劑“活血定痛湯”就是以紅花-乳香作為藥對(duì)(各三錢),治血出作痛,紅花長(zhǎng)于活血化瘀,消散ve瘕;乳香有活血行氣止痛,消腫生肌之功效,兩藥“相須”“相使”。前期課題組研究顯示乳香的藥效物質(zhì)11-羰基-β-乳香酸(11-keto-β-boswellic acid,KBA)能改善腦缺血再灌注損傷(cerebral ischemia reperfusion injury,CIRI),β-乳香酸(β-boswellic acid,β-BA)能改善大鼠血瘀證。紅花活血化瘀作用的主要藥效成分羥基紅花黃色素A(hydroxy safflor yellow A,HSYA),在臨床上用于治療血液循環(huán)障礙性疾病,也有改善腦缺血再灌注損傷作用,但兩藥聯(lián)合使用的作用很少研究。因此,本課題擬從兩方面研究紅花-乳香的的協(xié)同作用,一方面研究HSYA聯(lián)合KBA保護(hù)腦缺血再灌注損傷引起的神經(jīng)損傷作用機(jī)制,另一方面研究HSYA聯(lián)合β-BA對(duì)血瘀證引起的血管內(nèi)皮損傷的改善作用及機(jī)制。以揭示HSYA-KBA和HSYA-β-BA的配伍機(jī)制。第一部分HSYA和KBA改善腦缺血再灌注引起的神經(jīng)損傷目的:1.探討HSYA和KBA對(duì)藥配伍是否能改善腦缺血再灌注引起的神經(jīng)損傷及協(xié)同作用機(jī)制。2.明確HSYA和KBA對(duì)藥配伍是否有協(xié)同減少體外氧糖剝奪PC12細(xì)胞的氧化應(yīng)激作用。方法:體內(nèi)研究中,我們選擇了線栓法來建立大鼠腦缺血再灌注模型,以進(jìn)行缺血性腦梗死大鼠的相關(guān)研究。觀察給予HSYA和KBA后大鼠腦梗死面積的改變。體外研究選用了氧糖剝奪(OGD)誘導(dǎo)PC12細(xì)胞損傷模型,檢測(cè)丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的等抗氧化指標(biāo)含量變化。結(jié)果:1.HSYA(100 mg/kg)和KBA(25 mg/kg)均分別能改善腦缺血再灌注損傷大鼠的腦梗死面積和神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分,且合用組HSYA(50 mg/kg)+KBA(12.5 mg/kg)改善效果更好(P0.05)。2.MTT檢測(cè)結(jié)果顯示HSYA(10μM)、KBA(50μM)、合用組HSYA(5μM)、KBA(25μM)對(duì)OGD誘導(dǎo)損傷的PC12細(xì)胞均有抗凋亡作用(P0.05),且合用組HSYA(5μM)和KBA(25μM)作用更強(qiáng)(P0.05)。3.HSYA(10μM)、KBA(50μM)和合用組HSYA(5μM)、KBA(25μM)對(duì)OGD誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞有抗氧化應(yīng)激損傷作用。HSYA(10μM)和KBA(50μM)能改善PC12細(xì)胞中氧化還原標(biāo)志物SOD活力和MDA水平(P0.05),且合用組HSYA(5μM)和KBA(25μM)作用更強(qiáng)(P0.05)。結(jié)論:證實(shí)了HSYA和KBA對(duì)藥配伍在改善腦缺血再灌注引起的神經(jīng)損傷方面有協(xié)同增效的作用,且對(duì)OGD誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞有協(xié)同抗凋亡和協(xié)同抗氧化應(yīng)激損傷作用。第二部分HSYA和β-BA改善血瘀證誘導(dǎo)的血管損傷目的:1.研究HSYA和β-乳香酸(β-BA)配伍是否能改善血瘀證所致的大鼠血液流變學(xué)異常、保護(hù)血管內(nèi)皮功能,兩者改善作用是否有協(xié)同性。2.探討HSYA和β-BA對(duì)OGD損傷的HUVEC細(xì)胞的保護(hù)作用以及對(duì)其NO生成的影響,探討其保護(hù)作用是否呈現(xiàn)協(xié)同性。方法:體內(nèi)研究采用血瘀證大鼠模型,給予HSYA和β-BA后,檢測(cè)全血粘度和凝血功能,以及血漿中ET-1和NO濃度,觀察其對(duì)大鼠血液流變學(xué)的影響以及血管內(nèi)皮功能的變化,并取頸動(dòng)脈觀察病理變化。體外研究采用OGD損傷的HUVEC細(xì)胞,給予HSYA和β-BA后檢測(cè)其對(duì)細(xì)胞活性和細(xì)胞生成NO功能的影響。結(jié)果:1.對(duì)比空白對(duì)照組,血瘀證模型組的各項(xiàng)血流變學(xué)指標(biāo)有明顯變化,全血粘度顯著升高,活化部分凝血活酶時(shí)間(APTT)、凝血酶時(shí)間(TT)、凝血酶原時(shí)間(PT)明顯縮短,纖維蛋白原(FIB)含量增加,血漿ET-1水平升高,血漿NO含量降低。對(duì)比模型組,HSYA(100 mg/kg)組、β-BA(100 mg/kg)、合用組HSYA(50 mg/kg)+β-BA(50mg/kg)全血粘度明顯降低,TT、APTT、PT顯著延長(zhǎng)(P0.05),纖維蛋白原含量減少(P0.05),血漿ET-1水平降低,血漿NO水平升高(P0.05)。且合用組HSYA(50mg/kg)+β-BA(50 mg/kg)變化更顯著(P0.05)。2.MTT檢測(cè)結(jié)果顯示HSYA(10μM)、β-BA(50μM)、合用組HSYA(5μM)+β-BA(25μM)對(duì)OGD誘導(dǎo)損傷的HUVEC有抗凋亡作用,且合用組HSYA(5μM)和β-BA(25μM)作用更強(qiáng)(P0.05)。3.與OGD組相比HSYA(10μM)、β-BA(50μM)、合用組HSYA(5μM)+β-BA(25μM)能增加HUVEC細(xì)胞NO的生成(P0.05),且合用組HSYA(5μM)和β-BA(25μM)作用更強(qiáng)(P0.05)。結(jié)論:證實(shí)了HSYA和β-BA對(duì)藥配伍在改善血瘀證引起的血流變學(xué)異常方面有“相須”作用,兩藥聯(lián)用也能增強(qiáng)保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞的功能,且對(duì)OGD誘導(dǎo)的HUVEC細(xì)胞有協(xié)同抗凋亡和協(xié)同增強(qiáng)NO生成作用。
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R285.5
【圖文】：

- 23 -SYA 對(duì)腦梗死面積的影響（*P<0.05 用藥組與 MCAO組比較，#P<0.05BA組比較，n=6）能缺損評(píng)分評(píng)估理組大鼠在實(shí)驗(yàn)后進(jìn)行改良神經(jīng)功能缺損評(píng)分評(píng)估（m NSS大鼠未出現(xiàn)神經(jīng)功能損傷癥狀，m NSS 評(píng)分為 0 分；大腦組神經(jīng)功能缺損癥狀嚴(yán)重，m NSS 評(píng)分為（14.59 1.21）分同給藥組大鼠神經(jīng)功能缺損減輕（P < 0.05），且聯(lián)合給藥組。KBA 組 m NSS 評(píng)分為（12.72 0.56）分，HSYA 組 m .78）分，合用組 m NSS 評(píng)分為（11.26 0.45）分。對(duì)比兩個(gè)低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（#P<0.05，n=6）。見圖 3

sham MCAO KBA HSYA KBA+HSYA圖 1 各組大鼠腦組織 TTC 染色Fig.1 Representative TTC staining of the cerebral infarct in the rat brain圖 2 KBA-HSYA 對(duì)腦梗死面積的影響（*P<0.05 用藥組與 MCAO組比較，#P<0.05 合用組與

SY 對(duì)大鼠改良神經(jīng)功能缺損評(píng)分（m NSS）的影響（*P<0.05 用藥組與 合用組與 HSY 或者 KB 組比較，n=6） 和 KBA 對(duì) PC12 細(xì)胞活性的影響 4 所示，OGD 損傷后 PC12細(xì)胞存活率與 Control 組相比明顯、 HSYA、HSYA聯(lián)合 KBA 預(yù)處理組，與 OGD 組相比 PC12 細(xì)（P < 0.05），HSYA聯(lián)合 KBA 組與單用組相比效應(yīng)更強(qiáng)（P <

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