發(fā)布時間：2020-07-15 23:12

【摘要】：本課題以八角蓮甘草提取物為研究對象,利用化學(xué)計量學(xué)方法開展組效關(guān)系研究,并進(jìn)一步結(jié)合平均影響值(MIV)法識別提取物中主要的抗癌活性成分,為基于八角蓮甘草的抗癌成分研究及新藥開發(fā)提供參考。主要研究內(nèi)容如下:1.利用Waters e2695-2489系統(tǒng)建立并優(yōu)化八角蓮甘草提取物HPLC-UV指紋圖譜分析方法,利用該方法檢測46批次不同來源的八角蓮甘草提取物,標(biāo)定出45個共有成分峰,以香蘭素為內(nèi)標(biāo),對所有批次樣品中的45個共有成分進(jìn)行相對定量分析,結(jié)果表明不同批次之間、不同成分之間均存在明顯的含量差異。2.利用液相色譜-高分辨質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)對八角蓮甘草提取物指紋圖譜中的45個特征共有峰進(jìn)行定性分析。根據(jù)一級和二級質(zhì)譜數(shù)據(jù),分析化合物分子結(jié)構(gòu)信息,結(jié)合大量文獻(xiàn)研究,推測出色譜峰所對應(yīng)的化學(xué)成分。除15號色譜峰外,定性出44種成分,其中8種成分來源于八角蓮,包括木脂素類和黃酮類化合物,36種成分歸屬于甘草,包括三萜皂苷類、黃酮類和香豆素類化合物。3.采用四甲基偶氮唑鹽(MTT)比色法,測定46批次八角蓮甘草提取物體外抑制人宮頸癌HeLa細(xì)胞增殖的效果,結(jié)果顯示樣品抑制率范圍為56.18-93.35%,在相同給藥濃度下,大多數(shù)樣品對HeLa細(xì)胞有較好的抑制效果,同時,不同批次樣品的抑制率又存在明顯差異。4.應(yīng)用神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)算法(BP)和支持向量回歸算法(SVR),以獲得的46批次八角蓮甘草提取物色譜峰相對峰面積數(shù)據(jù)為自變量,相應(yīng)批次提取物的抗癌活性數(shù)據(jù)為因變量,建立組效關(guān)系模型,利用遺傳算法(GA)和粒子群優(yōu)化算法(PSO)優(yōu)化模型參數(shù),根據(jù)模型的擬合精度和泛化能力,優(yōu)選出最佳組效關(guān)系模型為PSO-SVR模型,其參數(shù)為g=0.1,C=5.3072,該模型在訓(xùn)練組中R=0.9964,RMSE=0.0044,在測試組中R=0.9509,RMSE=0.0183,能夠較為準(zhǔn)確地反映八角蓮甘草提取物的復(fù)雜組效關(guān)系。5.最佳PSO-SVR模型結(jié)合平均影響值(MIV)法,識別出八角蓮甘草提取物中的10種主要抗癌活性成分,包括八角蓮中的異槲皮苷、山柰酚-3-O-吡喃葡萄糖苷、4’-去甲基鬼臼毒素葡萄糖苷、鬼臼毒素,和甘草中的Macedonoside A、甘草黃酮醇、甘草香豆素、甘草寧A、Angustone A及其異構(gòu)體Isoangustone A。其中8種成分已有相關(guān)文獻(xiàn)報道其抗癌藥效或作用機(jī)制,對于另外2種成分,本課題識別結(jié)果也為今后研究其抗癌活性提供了參考。
【學(xué)位授予單位】：天津大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R284.1
【圖文】：

共包括 9 種和 [3]。究進(jìn)展化合物，目前從八角蓮屬、揮發(fā)油類、蒽醌類，還屬植物中含量最多、關(guān)注素類成分，均屬于鬼臼毒構(gòu)特點又分為兩類，第一 α 取代；②2，3 位含有丁含氧取代基，目前從八角表成分有鬼臼毒素、4’- 1-2（a）~（d）。

（d） （e） （f）圖 1-2 鬼臼毒素類木脂素代表化合物Fig.1-2 Representative compounds of podophyllum lignans第二類為 4-苯基萘駢丁內(nèi)酯類，其特點為：①6、7 位或 3’、4’位為亞甲基或含氧基團(tuán)；②萘環(huán)平面導(dǎo)致 2、3 位無立體異構(gòu)體，4-苯基也無立體異構(gòu)表化合物為脫氫鬼臼毒素、山荷葉素，結(jié)構(gòu)見圖 1-2（e）~（f）。在八角蓮生化途徑中，鬼臼毒素類木脂素由兩分子苯丙烯衍生物通過側(cè)鏈形成，而黃酮類化合物則由一分子苯丙烯衍生物與一分子苯衍生物聚合生以鬼臼毒素類與黃酮類化合物往往共存于八角蓮中[4]。姜飛等[5]采用硅膠柱、制備液相色譜等技術(shù)對八角蓮藥材 95%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物和正萃取物進(jìn)行分離純化，得到 15 種化合物；利用質(zhì)譜、核磁共振、高效液相技術(shù)結(jié)合理化分析方法進(jìn)行成分鑒定，結(jié)果顯示，8 種為鬼臼毒素類化合 種為鬼臼毒素苷類化合物、4 種為黃酮類化合物和 1 種甾醇類化合物；在此上，利用四甲基偶氮唑鹽（MTT）比色法，測定前述 15 種成分對前列腺癌的體外抑制活性，結(jié)果表明鬼臼毒素類化合物具有顯著的抗癌功效，且 1 位

六根不同型號的色譜柱的分離譜圖如圖2-1 所示。由色譜圖可以看出，1 號 Symmetry 色譜柱、3 號 ZORBAX SB 色譜柱和 6 號 Unitary 色譜柱整體出峰數(shù)目多于其他 3 根色譜柱，說明這三根色譜柱對本樣品具有更強(qiáng)的分離能力。對比 1 號、3 號和 6 號色譜柱譜圖可以發(fā)現(xiàn)，ZORBAX SB 柱和 Unitary 柱在 40min 后出峰數(shù)目較少，而 Symmetry 柱在 40min之后仍然洗脫出較多的成分，說明 Symmetry 柱對本樣品中極性較小的化合物也具有良好的分離效果。但 Symmetry 柱在 20-32min、40-50min 出峰相對集中，一些色譜峰分離度不佳。綜合考慮，選用 1 號 Symmetry 柱進(jìn)行色譜分離，并進(jìn)行條件優(yōu)化。

【相似文獻(xiàn)】

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本文編號：2757143