【摘要】：目的:1.觀察細胞因子IL-1β,補體裂解產物C5a以及血腦屏障緊密連接蛋白Claudin-5在不同周齡狼瘡鼠腦實質和腦膜組織的表達特點,模擬并研究狼瘡腦病的動態(tài)發(fā)病規(guī)律。2.通過觀察狼瘡鼠腦組織細胞因子IL-1β和補體裂解產物C5a在滋陰清熱藥作用下的表達變化,探討滋陰清熱藥對狼瘡腦病的治療作用及其機制。方法:1、SPF級B6.MRL-Faslpr/Jnju 6周齡雌性小鼠10只,作為小周齡模型組,體質量15.4~19.4(平均18.4)g;SPF級B6.MRL-Faslpr/Jnju 18周齡雌性小鼠10只,作為大周齡模型組,體質量19.6~23.6(平均21.6)g;SPF級C57BL/6JN 6周齡雌性小鼠10只,作為小周齡正常組,體質量15.4~19.4(平均18.4)g;SPF級C57BL/6JN30周齡雌性小鼠10只,作為大周齡正常組,體質量29.5~35.1(平均32.3)g。取小鼠腦實質和腦膜組織應用免疫組化、熒光定量PCR檢測IL-1β、C5a、Claudin-5的表達特點。2、SPF級B6.MRL-Faslpr/Jnju 6周齡雌性小鼠20只,體質量15.3~19.8(平均18.4)g;SPF級C57BL/6JN 6周齡雌性小鼠10只,體質量15.5~19.4(平均18.4)g;把模型鼠隨機分為:(1)中藥組(T組)(n=10):按滋陰清熱藥20g/Kg/d劑量灌胃(人等效劑量的2倍),干預6周。(2)模型組(M組)(n=10):每天予滋陰清熱藥等容積灌胃無菌蒸餾水,干預6周。健康鼠為(3)正常組(N組):每天予滋陰清熱藥等容積灌胃無菌蒸餾水,干預6周。6周后取腦實質和腦膜組織,應用免疫組化、熒光定量PCR檢測IL-1β、C5a在腦膜的表達變化。結果:1.免疫組化結果顯示在6周齡狼瘡鼠中,IL-1β表達于腦膜的血管組織周圍和腦微血管內皮細胞,C5a表達于腦實質和腦膜的血管組織,Claudin-5表達于腦膜的血管組織周圍和腦微血管內皮細胞。PCR結果顯示:(1)IL-1β的表達量:四組小鼠腦實質組間比較無統(tǒng)計學差異(P0.05),四組小鼠腦膜組間比較:18周齡狼瘡鼠高于6周齡正常鼠(P=0.00),18周齡狼瘡鼠高于30周齡正常鼠(P=0.00),18周齡狼瘡鼠高于6周齡狼瘡鼠(P=0.00),6周齡狼瘡鼠高于6周齡正常鼠(P=0.04),均有統(tǒng)計學差異;同組小鼠腦實質和腦膜比較:30周齡正常鼠(P=0.00)、6周齡狼瘡鼠(P=0.01)、18周齡狼瘡鼠(P=0.00)腦膜表達量均高于腦實質,有統(tǒng)計學差異。(2)C5a的表達量:四組小鼠腦實質組間比較:6周齡狼瘡鼠高于6周齡正常鼠(P=0.00),6周齡狼瘡鼠高于30周齡正常鼠(P=0.00),6周齡狼瘡鼠高于18周齡狼瘡鼠(P=0.00);四組小鼠腦膜組間比較:6周齡狼瘡鼠高于6周齡正常鼠(P=0.00),6周齡狼瘡鼠高于30周齡正常鼠(P=0.00),6周齡狼瘡鼠高于18周齡狼瘡鼠(P=0.00),有統(tǒng)計學差異;同組小鼠腦實質和腦膜比較:30周齡正常鼠(P=0.00)、6周齡狼瘡鼠(P=0.03)、18周齡狼瘡鼠(P=0.01)腦膜的表達量均高于腦實質,有統(tǒng)計學差異。(3)Claudin-5的表達量:四組小鼠腦實質組間比較:18周齡狼瘡鼠高于6周齡正常鼠(P=0.01),18周齡狼瘡鼠高于30周齡正常鼠(P=0.00),18周齡狼瘡鼠高于6周齡狼瘡鼠(P=0.00),有統(tǒng)計學差異;四組小鼠腦膜組間比較:6周齡狼瘡鼠高于6周齡正常鼠(P=0.00),6周齡狼瘡鼠高于30周齡正常鼠(P=0.01),6周齡狼瘡鼠高于18周齡狼瘡鼠(P=0.01),有統(tǒng)計學差異;同組小鼠腦實質和腦膜比較:30周齡正常鼠(P=0.00)、6周齡狼瘡鼠(P=0.00)、18周齡狼瘡鼠(P=0.04)腦膜的表達量均高于腦實質,有統(tǒng)計學差異。2.滋陰清熱藥干預后,中藥組IL-1β和C5a免疫組化染色較模型組變淺,陽性位點減少。熒光定量PCR結果顯示:(1)IL-1β在腦膜的表達量:模型組表達量高于中藥組(P=0.535),但沒有統(tǒng)計學差異,模型組(P=0.00)和中藥組(P=0.01)均高于正常組,有統(tǒng)計學差異。(2)C5a在腦膜的表達量:模型組高于中藥組(P=0.00)和正常組(P=0.00),有統(tǒng)計學差異;中藥組高于正常組(P=0.001),有統(tǒng)計學差異。結論:1、根據IL-1β和C5a在狼瘡鼠腦實質和腦膜組織的表達量特點,我們推測,免疫性血管炎可能是狼瘡腦病的主要致病機理。根據C5a和Claudin-5的表達特點,我們認為,研究C5a和Claudin-5在狼瘡腦病發(fā)病過程中的動態(tài)變化規(guī)律,對于研究狼瘡腦病發(fā)病中血腦屏障機制具有重要的探索意義。2.滋陰清熱藥可降低IL-1β和C5a在狼瘡鼠腦膜的表達,我們推測滋陰清熱藥可改善狼瘡鼠腦組織血管炎,進而緩解狼瘡腦病的進程。
【學位授予單位】：廣州醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5
【圖文】：

廣州醫(yī)科大學碩士學位論文 3.2 PCR 檢測腦膜組織 IL-1β、C5a 相對表達量3.2.1 IL-1β 的表達量：三組小鼠組間比較：模型組表達量高于中藥組（P=0.535)，但沒有統(tǒng)計學差異，模型組（P=0.00)和中藥組（P=0.01)均高于正常組，有統(tǒng)計學差異。3.2.2 C5a 的表達量：三組小鼠組間比較：模型組高于中藥組（P=0.00），模型組高于正常組（P=0.00），中藥組高于正常組（P=0.001），均有統(tǒng)計學差異。

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本文編號：2757018