【摘要】：腸促胰素是胃腸道的內(nèi)分泌細(xì)胞及神經(jīng)元釋放至體內(nèi)的激素肽類,其生理功能包括調(diào)節(jié)食欲、血糖、胃腸蠕動(dòng)和生長(zhǎng)、外分泌細(xì)胞分泌和脂肪細(xì)胞等,是影響機(jī)體能量代謝的重要因子。葡萄糖依賴性促胰島素釋放肽(GIP)是體內(nèi)重要的腸促胰素之一,由近端小腸K細(xì)胞分泌,能夠在體內(nèi)發(fā)揮促胰島素分泌作用,促進(jìn)胰島β細(xì)胞的增殖和存活。改善GIP及其受體的功能可提高胰島功能或胰島素敏感性,這一方法可能成為治療2型糖尿病的一種新策略。茶(Camelliasinensis)籽皂苷因其具有調(diào)節(jié)胃腸道功能、抗癌、抗炎、抗微生物、抗氧化、神經(jīng)保護(hù)、降血脂、表面活性等多種生物活性,已受到廣泛關(guān)注,但對(duì)其深入的生物學(xué)機(jī)制研究較少。本文采用小鼠模型和小鼠小腸內(nèi)分泌細(xì)胞(STC-1),研究了茶籽總皂苷和皂苷單體化合物TheasaponinE1對(duì)刺激小鼠小腸GIP分泌的作用和分子機(jī)制,主要研究結(jié)果如下:(1)茶籽總皂苷和TheasaponinE1能夠在體內(nèi)外刺激GIP分泌:對(duì)小鼠一次性灌胃給藥茶籽總皂苷65mg/kgBW,采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-PCR)和酶聯(lián)免疫法(ELISA)測(cè)定不同時(shí)間點(diǎn)GIP mRNA和蛋白水平的表達(dá)。結(jié)果顯示二者均出現(xiàn)先升高后降低的現(xiàn)象,但表達(dá)最高時(shí)間點(diǎn)不同,分別為1和3小時(shí)。TheasaponinE1在無毒劑量范圍內(nèi)處理細(xì)胞,同樣能夠誘導(dǎo)GIPmRNA和蛋白表達(dá)的升高。(2)鈉-葡萄糖協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白-1(SGLT1)在茶籽皂苷誘導(dǎo)GIP分泌中具有重要作用:采用SGLT-1抑制劑根皮苷與TheasaponinE1同時(shí)處理STC-1細(xì)胞,能夠抑制TheasaponinE1誘導(dǎo)的胞內(nèi)鈣離子濃度升高,同時(shí)減緩GIP mRNA表達(dá)的上升,表明Theasaponin E1至少部分通過激活SGLT1誘導(dǎo)GIP的表達(dá)。(3)G蛋白偶聯(lián)膽汁酸受體Gpbar1(TGR5)在茶籽皂苷誘導(dǎo)GIP分泌中具有重要作用:Western Blot和ELISA分析表明Theasaponin E1能夠誘導(dǎo)STC-1細(xì)胞中TGR5蛋白表達(dá)和胞內(nèi)cAMP水平的升高。采用RNA沉默技術(shù)敲除細(xì)胞TGR5,能夠抑制Theasaponin E1誘導(dǎo)GIP的mRNA表達(dá)上升。這一結(jié)果表明TGR5在Theasaponin E1調(diào)節(jié)GIP表達(dá)中具有重要作用。綜上所述,本研究發(fā)現(xiàn)茶籽皂苷能夠通過SGLT-1和TGR5相關(guān)通路刺激GIP的表達(dá),提示該類物質(zhì)可能在調(diào)節(jié)改善二型糖尿病等代謝性疾病方面具有進(jìn)一步研究?jī)r(jià)值和應(yīng)用前景。
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R285.5
【圖文】：

圖１．１山茶屬植物籽皂苷的化學(xué)結(jié)構(gòu)逡逑Ｆｉｇ．邋１．１邋Ｃｈｅｍｉｃａｌ邋ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ邋ｏｆ邋ｔｈｅ邋ｓａｐｏｎｉｎｓ邋ｆｒｏｍ邋ｔｈｅ邋ｇｅｎｕｓ邋Ｃａｍｅｌｌｉａ邋ｓｅｅｄｓ．逡逑６逡逑

２．３．１．１茶籽總皂苷對(duì)小鼠小腸ＧＩＰ邋ｍＲＮＡ表達(dá)的影響逡逑通過灌胃給予茶籽總皂苷，在不同時(shí)間點(diǎn)（０，邋０．５，１，邋２，邋３，４，邋６，１２，２４ｈ）處死逡逑小鼠并收集小腸組織，利用ＲＴ－ＰＣＲ定量檢測(cè)ＧＩＰ邋ｍＲＮＡ的表達(dá)水平。由圖２．１所示，一次逡逑性給予６５邋ｍｇ／ｋｇＢＷ劑量總皂苷后，ＧＩＰ的ｍＲＮＡ表達(dá)出現(xiàn)整體先升高后降低的現(xiàn)象，并逡逑在ｌｈ內(nèi)徶到最高值，約為對(duì)照組的７倍，統(tǒng)計(jì)學(xué)差異顯著（ｐ＜０．０５）。逡逑８００－逡逑．邐Ａ逡逑７００－逡逑ｆ邐＇邐ｂ逡逑Ｃ邋＜；００－邐Ｔ逡逑■邐Ｉ逡逑Ｉ０邋５邋ｊ邐＾邋＾邐＾逡逑ｌ邋Ｉ邋１邋■逡逑Ｉ邋ｆ逡逑■邋＾逡逑、：ｕ邋……：ｈNB逡逑０邐０．邋ｎ邋１邐２邐３邐４邐１２邐２－１逡逑Ｔｉｍｅｓ邋ａｆｔｅｒ邋ａｄｍｉｎｉｓｌｒａｌｉｏｎ邋ｏｆ邋ｌｏｔａ！邋ｓａｐｏｎｉｎｓ邋ｆｒｏｉｎ邋ｔｅａｓｅｃｄ＾ｈ）逡逑圖２．１茶籽總皂苷對(duì)小鼠小腸ＧＩＰ邋ｍＲＮＡ表徸的影響。數(shù)據(jù)結(jié)果用平均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)偏差表示。逡逑不同的字母表示顯著性差異（ｐ＜０．０５）。逡逑Ｆｉｇ．２．１邋Ｅｆｆｅｃｔ邋ｏｆ邋ｔｅａ邋ｓｅｅｄ邋ｔｏｔａｌ邋ｓａｐｏｎｉｎｓ邋ｏｎ邋ｔｈｅ邋ＧＩＰ邋ｍＲＮＡ邋ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ邋ｉｎ邋ｔｈｅ邋ｓｍａｌｌ邋ｉｎｔｅｓｔｉｎｅ邋ｏｆ逡逑ｍｉｃｅ．邋Ｄａｔａ邋ａｒｅ邋ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｅｄ邋ａｓ邋ｍｅａｎｓ邋士邋ＳＤ邋ｆｒｏｍ邋ｔｈｒｅｅ邋ｒｅｐｌｉｃａｔｅｓ．邋Ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ邋ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ邋ｂｅｔｗｅｅｎ逡逑ｄｉ

通過灌胃給予６５ｍｇ／ｋｇＢＷ劑量茶籽總皂苷后，在不同時(shí)間點(diǎn)（0，０．５，１，２，邋３，邋４，逡逑６，１２，邋２４ｈ）處死小鼠并收集小腸組織，利用酶聯(lián)免疫法（ＥＬＩＳＡ）定量測(cè)定ＧＩＰ蛋白的逡逑表徸水平。由圖２．２所示，ＧＩＰ蛋白表達(dá)同樣出現(xiàn)整體先升高后降低的情況，在３ｈ時(shí)徸到最逡逑大值，約為對(duì)照組的３．５倍。逡逑４００邋－逡逑ａ逡逑３５０邋＿逡逑＾邋３００邋－邐Ｉ逡逑■邋Ｉ逡逑Ｉ２００邋：邐ｔ邋１邐■邋Ｃｄ逡逑ｄｒ邋ｒ邋ｌｌｌｌｉ邋ｅ逡逑ｉｉｉＢＥＳｌｉＢ逡逑０邋０．５邋１邐２邋３邐４邋６邋１２邋２４逡逑Ｔｉｍｅｓ邋ａｆｔｅｒ邋ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ邋ｏｆ邋ｔｏｔａｌ邋ｓａｐｏｎｉｎｓ邋ｆｒｏｍ邋ｔｅａ邋ｓｅｅｄ（ｈ）逡逑圖２．２茶籽總皂苷對(duì)小鼠小腸ＧＩＰ蛋白表達(dá)的影響。數(shù)據(jù)結(jié)果用平均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)偏差表示。逡逑不同的字母表示顯著性差異（ｐ＜０．０５）。逡逑Ｆｉｇ．２．２邋Ｅｆｆｅｃｔ邋ｏｆ邋ｔｅａ邋ｓｅｅｄ邋ｔｏｔａｌ邋ｓａｐｏｎｉｎｓ邋ｏｎ邋ｔｈｅ邋ＧＩＰ邋ｐｒｏｔｅｉｎ邋ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ邋ｉｎ邋ｔｈｅ邋ｓｍａｌｌ邋ｉｎｔｅｓｔｉｎｅ邋ｏｆ逡逑ｍｉｃｅ．邋Ｄａｔａ邋ａｒｅ邋ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｅｄ邋ａｓ邋ｍｅａｎｓ邋士邋ＳＤ邋ｆｒｏｍ邋ｔｈｒｅｅ邋ｒｅｐｌｉｃａｔｅｓ．邋Ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ邋ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ邋ｂｅｔｗｅｅｎ逡逑ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ邋ｇｒｏｕｐｓ邋ａｒｅ邋ｓｈｏｗｅｄ邋ｂｙ邋ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ邋ｌｅｔｔｅｒｓ邋（ｐ邋＜邋０．０５）．逡逑２．３．２邋ＴＳＥ１對(duì)ＳＴＣ－１細(xì)胞中

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本文編號(hào)：2756687