【摘要】：背景:在全球領(lǐng)域,癌癥是因病患致死的第二大原因。GLOBOCAN 2018年的估計顯示,世界上每五分之一的男性和六分之一的女性患有癌癥,八分之一的男性和十分之一的女性將在75歲之前死于癌癥。轉(zhuǎn)移占癌癥患者死亡原因的絕大多數(shù)。致使腫瘤轉(zhuǎn)移的病理機制極其繁雜,血液高凝狀態(tài)被視為重要影響因素。有大量的研究報道,血液高凝狀態(tài)加速腫瘤的進(jìn)程,并且和轉(zhuǎn)移高度相關(guān)。血液高凝狀態(tài)是一種血栓前狀態(tài),是誘發(fā)血栓的主要因素。腫瘤本身存在諸多易凝因素,例如:炎癥及低氧微環(huán)境長期作用,會引起血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷,血小板和凝血系統(tǒng)的激活,促進(jìn)高凝狀態(tài)的形成。由此可見,腫瘤與高凝狀態(tài)之間相互促進(jìn)。因此,針對腫瘤血液高凝狀態(tài)的抗腫瘤治療來控制病情的進(jìn)展和轉(zhuǎn)移是當(dāng)前研究的重要熱點內(nèi)容。中國傳統(tǒng)醫(yī)藥在腫瘤的治療中有著悠久的歷史,其取材方便,不良反應(yīng)低,價格便宜,且在提高患者免疫力,保留患者臟器功能和提高患者生存質(zhì)量方面有明顯的優(yōu)勢,能夠在西醫(yī)治療基礎(chǔ)上起到很好的輔助治療作用,所以被廣泛研究并應(yīng)用于臨床。目的:本研究根據(jù)半夏燥濕化痰、消痞散結(jié),當(dāng)歸活血扶正,赤小豆解毒排毒的功效,在傳統(tǒng)方劑當(dāng)歸赤小豆湯的基礎(chǔ)上添加配伍成半夏當(dāng)歸赤小豆湯,觀察其對腫瘤生長和轉(zhuǎn)移的影響及其可能機制。方法:體外實驗:MTT檢測半夏當(dāng)歸赤小豆湯對A549細(xì)胞增殖的影響;劃痕實驗檢測半夏當(dāng)歸赤小豆湯對A549細(xì)胞遷移的影響;Annexin V/PI雙染檢測半夏當(dāng)歸赤小豆湯對A549細(xì)胞凋亡的影響。體內(nèi)實驗:分別建立烏拉坦誘導(dǎo)的肺癌小鼠模型與H22肝癌肺轉(zhuǎn)移模型,觀察半夏當(dāng)歸赤小豆湯對荷瘤小鼠一般生存狀況(體重、自主活動)、肺瘤結(jié)節(jié)數(shù)、存活率(烏拉坦模型)及肺轉(zhuǎn)移瘤轉(zhuǎn)移指數(shù)(H22肝癌肺轉(zhuǎn)移模型)的影響,收集血液檢測凝血相關(guān)指標(biāo):血小板計數(shù)、凝血時間(CT)、血漿粘度、凝血四項(PT、APTT、TT、FIB)的變化,HE染色檢測肺組織病理學(xué)特征,評價半夏當(dāng)歸赤小豆湯對小鼠肺癌的治療效果以及對抗轉(zhuǎn)移作用。為了進(jìn)一步探索半夏當(dāng)歸赤小豆湯的抗腫瘤的機制,在體外實驗中,免疫印跡法檢測半夏當(dāng)歸赤小豆湯對A549細(xì)胞增殖標(biāo)志物PCNA、Ki67、EMT標(biāo)志物Ecadherin、N-Cadherin,以及HIF-1α的表達(dá),試劑盒檢測半夏當(dāng)歸赤小豆湯對A549細(xì)胞乳酸分泌的影響。在烏拉坦模型中,伊文思藍(lán)法檢測藥物對小鼠肺血管通透性的影響,免疫組化法檢測半夏當(dāng)歸赤小豆湯對小鼠肺組織CD62p、Vcam1和HIF1α表達(dá)的影響,試劑盒檢測小鼠血清ROS、IL-6、TNF-α、TGF-β1及乳酸含量水平的變化,免疫印跡法檢測半夏當(dāng)歸赤小豆湯對小鼠肺組織E-cadherin、N-Cadherin、Snail以及HIF1α表達(dá)的影響。結(jié)果:體外實驗結(jié)果顯示:半夏當(dāng)歸赤小豆湯對A549細(xì)胞增殖和遷移有一定的抑制作用,對A549細(xì)胞的促凋亡作用不顯著。體內(nèi)實驗結(jié)果顯示:半夏當(dāng)歸赤小豆湯對荷瘤小鼠體重?zé)o顯著影響,但可以改善小鼠自主活動能力,減少肺部瘤結(jié)節(jié)數(shù),改善肺部病理學(xué)特征,對血小板計數(shù)、TT及FIB水平無顯著影響,但可以降低血漿黏度,延長PT、APTT和凝血時間,此外,藥物可以降低烏拉坦誘導(dǎo)的肺癌小鼠死亡率,降低H22肝癌肺轉(zhuǎn)移模型小鼠肺部轉(zhuǎn)移瘤轉(zhuǎn)移指數(shù)。機制研究結(jié)果顯示:半夏當(dāng)歸赤小豆湯下調(diào)A549細(xì)胞惡性增殖標(biāo)志物PCNA、Ki-67,EMT標(biāo)志物N-Cadherin蛋白表達(dá),上調(diào)E-Cadherin蛋白表達(dá),下調(diào)HIF-1α表達(dá),并降低A549細(xì)胞乳酸含量;在烏拉坦誘導(dǎo)的肺癌小鼠模型中,藥物可以降低小鼠肺血管通透性,降低血小板活化標(biāo)志物CD62p、血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷標(biāo)志物Vcam1和HIF-1α表達(dá),降低ROS、IL-6、TNF-α、TGF-β1及乳酸含量水平,下調(diào)N-Cadherin、Vimentin、Snail和HIF-1α的蛋白表達(dá),上調(diào)E-Cadherin蛋白表達(dá)。結(jié)論:綜上所述,半夏當(dāng)歸赤小豆湯通過調(diào)節(jié)腫瘤低氧微環(huán)境,改善缺氧所致的炎癥微環(huán)境,解除高凝狀態(tài),抑制EMT,有效的改善了小鼠的生存狀態(tài),抑制了癌癥的進(jìn)程。
【學(xué)位授予單位】：河南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R285
【圖文】：

半夏當(dāng)歸赤小豆湯抗腫瘤作用及機制研究.4 實驗結(jié)果.4.1 半夏當(dāng)歸赤小豆湯對烏拉坦誘導(dǎo)的肺癌小鼠模型的影響1）半夏當(dāng)歸赤小豆湯對烏拉坦誘導(dǎo)肺癌小鼠體重、自主活動的影響驗開始時，小鼠的體重、自主活動兩組間比較無顯著性差異，P＞0.05不同組間小鼠體重及自主活動的比較見表 3-1。和正常組的小鼠體重、模型組和給藥組都有顯著下降；就小鼠體重而言，模型組和給藥組并給藥組的自主活動能力卻有明顯提高。

第三章 半夏當(dāng)歸赤小豆湯對荷瘤小鼠生長及轉(zhuǎn)移的干預(yù)作用表 3-2 不同組間小鼠存活率的比較觀察指標(biāo) 正常組 模型組 給藥組 2P存活率 100% 53.3%* 86.7%# 10.893 0.004注：Log Rank（Mantel-Cox）檢驗。*表示模型組和正常組比有顯著差異；△表示給藥組和正常組比有顯著差異；#表示給藥組和模型組比有顯著差異。（3）半夏當(dāng)歸赤小豆湯對烏拉坦誘導(dǎo)肺癌小鼠肺部瘤結(jié)節(jié)數(shù)的影響兩組比較結(jié)果有顯著性差異，即給藥組的小鼠肺部瘤結(jié)節(jié)數(shù)較模型組有顯著減少（P＜0.05）。（見圖 3-3、表 3-3）

圖 3-4 烏拉坦小鼠肺組織 HE 染色Fig.3-4 HE staining of urethane-induced model mouse lung tissues（5）半夏當(dāng)歸赤小豆湯對烏拉坦誘導(dǎo)肺癌小鼠血小板計數(shù)、凝血時間及血漿黏影響和正常組比，模型組和給藥組的小鼠血小板計數(shù)有明顯升高，而給藥組與模型，小鼠的血小板計數(shù)沒有顯著差異；模型組與正常組比較，小鼠的凝血時間明顯，血漿粘度明顯增高，給藥組較模型組凝血時間明顯延長，血漿粘度顯著降低，組與正常組比較凝血時間和血漿黏度無顯著性差異。 （見圖 3-5、表 3-5。）

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2754654